抑制性消减杂交分离苹果缺铁诱导的相关基因

以铁高效基因型植物———苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et J iang) 为材料, 利用抑制性消减杂交( SSH) 方法, 成功构建了小金海棠缺铁条件下的消减cDNA文库。该文库包含1 152个克隆, 通过PCR检测插入片段大小在300～1 000 bp之间。对构建的消减cDNA文库进行差异筛选, 得到差异表达片段( ESTs) 105个。GenBank上BLAST结果如下: 50个ESTs与其它物种同源性较高, 视为已知基因, 并根据其功能分为9个组; 32个ESTs在GenBank中无法查到对应的同源序列, 可能代表了新基因;另外23个是与已知ESTs重复的基因片段。     

小金海棠MxIRT1基因定点突变的研究

采用PCR技术对小金海棠MxIRT1基因的定点突变体系进行了探讨。根据MxIRT1开放阅读框（ORF）两端和突变位点序列各设计一对引物。通过PCR扩增,获得带有突变位点且在突变位点相互重叠的两个PCR片段。对以上两个片段的浓度进行调整后,将其用作PCR反应的模板。对退火温度和延伸时间进行优化后,利用ORF两端引物,将带有突变位点的两个片段拼接起来,从而获得了含有所要突变位点的MxIRT1,并将其插入pEASY-T2载体中。DNA序列分析表明在预期位点上已经发生了突变：MxIRT1编码的第186位密码子已由组氨基酸残基变为丙氨酸残基,证明用PCR技术已成功地突变了MxIRT1基因。整个突变过程不需要任何回收与纯化步骤,是一个高效、快捷的定点突变体系。     

生物活性素对富士苹果园土壤氮素利用及苹果生长发育的影响

为提高苹果生产中肥料利用效率以及解决大量施肥造成树体旺长、不易成花和果品品质下降的问题，本研究利用自制的生物活性素复合制剂，于2017—2019年在陕西省延安市选择正常管理下的4个不同树龄的红富士果园，采用常规施肥(对照)和增施生物活性素处理，从土壤理化性状、树体生长发育和果实品质等方面，去探究生物活性素对果园氮素利用及红富士苹果生长发育的影响。结果表明:1)经生物活性素处理后，土壤全氮含量提高4.69%~51.35%，其中幼龄树果园中提高效果更为明显；2)处理后幼龄树的花芽数量连年增加，平均增加58.42%，成花树的比例平均提高22%；3)4个参试果园中果实产量均有提高，果实香气普遍提高；4)肥料偏生产力在3个果园中平均提高11.32%，总体呈增加趋势。施用生物活性素，对幼龄树可促进早花早果，对成龄树有一定增产提质的作用。综合来看，生物活性素的施用是黄土高原地区红富士苹果高效利用肥料及高产优质生产的有效措施。     

小金海棠实生后代耐缺铁性状分离分析

【目的】采用直接鉴定的方法,对四倍体小金海棠(高耐缺铁,兼性无融合生殖)×山定子(不耐缺铁)杂交后代实生群体中杂种、重组型无融合生殖及非重组型无融合生殖等不同倍性的后代单株的耐缺铁性状进行评价,对筛选高耐缺铁新种质和培育抗缺铁砧木有重要的指导意义。【方法】通过观察叶片黄化情况以及测定铁含量和SPAD(土壤、作物分析仪器开发,Soil and Plant Analyzer Development)值,比较沙培-滴灌条件下小金海棠无融合生殖后代与小金海棠×山定子杂种后代的耐缺铁能力,并分析其分离情况。【结果】结果表明,小金海棠无融合生殖后代耐缺铁能力基本保持,但仍表现出与倍性相关的多样性分离;杂种后代耐缺铁能力不及无融合生殖后代,杂种后代中三倍体分离更广泛,出现耐缺铁后代比率更高;小金海棠耐缺铁性状为多基因控制的隐性性状。并筛选出若干优异的个体。【结论】小金海棠实生后代耐缺铁性状分离复杂,通过杂交育种得到兼有小金海棠与其他优良砧木品种优良性状的杂种可能性虽小却并非不可能。     

小金海棠抑制性消减cDNA文库的构建及文库质量分析

构建小金海棠抑制性消减文库,为进一步大量筛选、克隆苹果铁高效基因、果树转基因工程奠定基础.试验是在提取水培条件下小金海棠缺铁(ETA-Fe2 ,4μmol/L)和正常供铁(EDTA-Fe2 ,40μmol/L)的根的总RNA,经过LD-pCR扩增双链cDNA后,利用抑制性消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次抑制性PCR,构建了小金海棠缺铁条件下包含1200个独立克隆的消减cDNA文库.用菌落PCR检测,结果显示插入片段大小范围在300～800bp之间,提取质粒进行PCR和质粒RsaⅠ酶切同样也得到一致性的结果.     

供氮水平对“八月脆”桃产量、品质和叶片养分含量的影响

我国桃树的栽培面积居世界第一位，产量占世界的三分之一左右。为了片面追求单果重、果实大小和产量，果农大量施用氮肥的现象十分普遍，据调查平谷果园的平均施氮量为N600kg／hm^2左右，个别农户的氮素投入甚至超过N1000kg／hm^2。桃树对氮素较为敏感，大部分桃树每年因收获带走的氮素仅为N40～100kg／hm^2，尽管氮素供应不足可能会影响到产量以及果实大小，但是过量施氮导致桃树营养生长过旺，影响树体对其它元素的吸收，果实营养品质下降。国外桃园生产非常注重桃果实的风味和着色，并非产量和大果，     

试管微嫁接早期鉴定小金海棠与苹果品种的亲和性*

用试管微嫁接法鉴定嫁接亲和性的结果表明,苹果(Malus pumila)富士／小金海棠(M.xiaojinensis)和苹果新红星／小金海棠两种砧穗组合的嫁接成活率均在80％以上;嫁接后10d左右,接穗新叶开始生长;嫁接后2个月,嫁接苗移栽成活率达70％左右。移栽1个月后,嫁接口已完全愈合;移栽3个月后,富士／小金海棠和新红星／小金海棠两种嫁接苗的茎杆粗细均匀,无大小脚现象,嫁接苗的平均株高分别为8．08cm和7．34cm,平均干周分别为1．30cm和1．32cm,长势与同时移栽的富士、新红星组培苗一致。从早期的鉴定结果可以看出,小金海棠与富士、新红星具良好的嫁接亲和性。     

NaCl胁迫下珠眉海棠苹果中Na~+的组织细胞定位研究

本试验研究了水培条件下NaCl胁迫下珠眉海棠苹果组织细胞中Na+的分布及可能的耐盐机制。结果表明 :在一定NaCl胁迫浓度范围内 ,根系中Na+浓度高于地上部 ,根系对Na+有一定的再吸收作用 ,这是珠眉海棠耐盐的重要机制 ;当NaCl胁迫浓度达到一定阀值后 ,根、叶细胞Na+大量积累 ,当细胞液泡不再接纳Na+时 ,Na+大量积累于胞质和质外体 ,使质外体渗透势大大降低 ,胞质水分外流 ,破坏细胞膜系统和胞质新陈代谢 ,造成伤害。     

胶东半岛苹果园重金属污染评价

对胶东半岛红富士苹果园土壤和果实的重金属镉(Cd)、铅(Pb)、铬(Cr)、砷(As)、铜(Cu)含量进行测定,采用Nemerow指数法对土壤重金属污染进行评价。结果表明:采样区土壤普遍存在镉轻度污染现象,铅、铬、砷、铜元素为安全等级,土壤综合污染程度均为轻污染;化工厂附近果园土壤砷含量高于其他采样区,果实样品各元素含量均符合无公害食品重金属含量标准;苹果园土壤中重金属含量与土壤有机质含量和果实重金属含量之间相关性均不明显。     

接种和检测苹果潜隐病毒

通过试管微嫁接，分别将苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒接种到小金海棠组培苗上，并用PAS—ELISA法检测其带毒率。结果表明：接穗小金海棠苹果褪绿叶斑病毒的带毒率为60．0％，其苹果茎沟病毒带毒率为73．3％，从而证明用此方法可以对组培苗进行快速病毒接种而得到带毒的实验材料。