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片球菌素基因的克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从乳酸片球菌中提取质粒DNA作为模板,根据GeneBank公布的细菌素结构基因,设计一对特异性引物,进行PCR扩增片段,将该片段定向克隆到pTA2载体,测序,与发表的基因序列比较,同源性为100%,然后克隆到表达载体Pet-28a,转化到Escherichia coli DH5α,经过卡那霉素平皿筛选,质粒酶切,PCR两步验证,获得阳性重组质粒,并转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳,显示在4 600 Da处出现条带,与已报道的细菌素分子量大小符合.表达产物对单核细胞增多症李氏杆菌有抗菌作用. 相似文献
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一、试验设计
试验设4个处理,供试小区长8米,3幅膜,随机排列,重复2次,走道宽50厘米,每小区面积54.72米^2,全试验净面积437.76米^2。 相似文献
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应用聚合酶链式反应(Polymerase chaim reaction,PCR)对199株肠道出血性大肠杆菌(enterohemor-rhagic Escherichia coli,EHEC)0157:H7中肠道聚集粘附大肠杆菌耐热肠毒素1(enteroaggregagive Es-cherichia coki heat-stable enteotoxin 1,EAST 1)基因进行了检验。结果,从1%(2/199)菌株中检出了EAST1基因。对其中1株(EHEC0157 96-84)的EAST1基因进行了序列测定。与以往发表的其他致腹泻性大肠杆菌的EAST1基因的序列相比较,EHEC0157 96-84与EAggEC(O42,TL100和160株)、产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)、肠道致病性大肠杆菌(enteropathogenic E.coli,EPEC)、扩散粘附性大肠杆菌(diffusely adherening e.coli,DAEC)的EAST1基因序列相同,但与EAggEC菌株17-2的EAST1基因有1个碱基对不同,从而导致1个氨基酸残 基的变化。本研究结果进一步表明,EAST1或它的变异型基因广泛分仙于致腹泻性大肠杆菌中。 相似文献
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根据大肠杆菌O157∶H7的编码eae蛋白的eaeA基因和大肠杆菌编码H7抗原的fliC基因的核甘酸序列,合成了2对寡核苷酸引物,建立了一个检测大肠杆菌O157∶H7的PCR方法。对11株已知大肠杆菌O157∶H7(NM;无运动性)株和其他不同属的42株已知肠道致病菌的检测结果表明,该方法只从大肠杆菌O157∶H7(NM)株的DNA中产生预期的扩增产物,而从其他菌株的DNA中未扩增出任何DNA产物。该方法从基因水平直接确定大肠杆菌的血清型,特异性强,克服了以往血清学方法有非特异性反应的缺陷,为检测和鉴定大肠杆菌O157∶H7(NM)提供了一个新方法。 相似文献
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为了筛选女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力影响的最佳剂量,并对其毒性进行评价,试验首先采用细胞计数法和MTT法绘制IPEC-J2细胞7 d的生长曲线,然后用梯度浓度的女贞子多糖刺激IPEC-J2细胞24 h,用MTT法检测细胞活力。结果表明:细胞生长稳定,生长曲线第4~7天为明显的对数生长期;0.1~10 mg/mL的女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力有明显促进作用,其中1 mg/mL的女贞子多糖效果最好(P0.01)。说明女贞子多糖对IPEC-J2细胞活力有促进作用,且安全范围广。 相似文献