微小隐孢子虫Cp16基因真核表达载体的构建及其免疫保护性研究

【目的】构建微小隐孢子虫黏附蛋白相关基因Cp16的真核表达载体pVAX1-Cp16,并检测其对小鼠的免疫保护效果。【方法】用PCR方法扩增微小隐孢子虫Cp16基因,构建其真核表达载体pVAX1-Cp16,并用脂质体介导法将其转染Hela细胞,用间接免疫荧光技术、SDS-PAGE及Western-blot检测Cp16蛋白在转染细胞中的表达情况;分别用真核表达载体pVAX1-Cp16、pVAX1空载体及PBS肌肉注射免疫BAILB/c小鼠,共免疫3次,检测血清IgG抗体水平及CD4+和CD8+T细胞亚群的变化,并用微小隐孢子虫卵囊感染免疫小鼠(剂量为1×106个/只),研究真核表达载体pVAX1-Cp16对隐孢子虫感染小鼠的免疫保护作用。【结果】成功构建了pVAX1-Cp16真核表达载体;Western-blot和间接免疫荧光检测结果显示,Cp16基因可以在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。pVAX1-Cp16免疫小鼠(试验组)血清中抗体水平及CD4+与CD8+T细胞数目比值升高,与各对照组(pVAX1和PBS对照组)相比差异显著(P0.05)。各组小鼠经口感染微小隐孢子虫卵囊后,试验组与各对照组相比,卵囊排出量均减少了63.97%,持续排出卵囊时间缩短了2d。【结论】构建了微小隐孢子虫黏附蛋白相关基因Cp16的真核表达载体pVAX1-Cp16,其能刺激机体产生一定的免疫保护作用。     

CRISPR/Cas系统对金黄色葡萄球菌耐药及毒力基因的影响

【目的】了解金黄色葡萄球菌(以下简称“金葡菌”) Staphylococcus aureus中成簇的规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的分布情况,分析其对抗生素耐药基因和毒力基因水平转移的影响。【方法】从公共数据库获取组装完整的金葡菌基因组575个,利用生物信息学方法,统计CRISPR结构的携带情况,菌株多位点序列分型(Multi-locus sequence typing,MLST)型别分布和菌株耐药基因、毒力基因的分布情况;对CRISPR结构阳性(CRISPR+)和CRISPR结构阴性(CRISPR-)的金葡菌耐药基因和毒力基因携带数目进行差异显著性分析。同时对实验室60株金葡菌二代测序数据进行分析,验证公共数据库分析结果。对实验室60株金葡菌中原噬菌体、接合质粒的携带情况进行统计,讨论CRISPR结构对菌株原噬菌体和接合质粒的影响。【结果】基因组组装完整的575株金葡菌中,有62株携带CRISPR结构(CRISPR+),513株不携带CRISPR结构(CRISP...     

海水养殖鱼类中虹彩病毒无症状感染的套式 PCR 分析

大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)是中国和韩国养殖大菱鲆的主要病毒性病原.本研究依据TRBIV的腺苷三磷酸酶(Adenosine triphosphatease,ATPase)基因序列,设计了特异性的引物,建立了一种检测TRBIV的套式PCR方法,该方法检测TRBIV的灵敏度大约为一步PCR的104倍.应用该方法对6种中国常见海水养殖鱼类进行TRBIV感染情况调查,在无明显发病症状的黑鮶(Sebastodes fuscescerns)、宽体舌鳎(Cynoglossus robustus)、半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)和非洲黑石斑鱼(Alphestes afer)4种鱼类中,扩增出长度约为471 bp的特异性DNA片段.对这些来自于不同鱼类的DNA片段进行测序和序列比对后发现,它们之间完全相同,且与TRBIV的ATPase基因序列有100%的同源性.研究结果表明,在这4种海水养殖鱼类体内存在TRBIV的无症状感染,它们可能也是TRBIV的宿主.     

丁香酚对鲫鱼麻醉效果的研究

采用丁香酚对鲫鱼(130±10 g)进行了麻醉效果的研究.结果显示:水温28℃下,丁香酚浓度在37～80 mg/L时,鲫鱼都能被理想麻醉,且随着浓度的增加,麻醉时间缩短,但复苏时间延长;丁香酚浓度为40 mg/L,水温在20.6～35℃时,鲫鱼都能被理想麻醉;水温28℃,丁香酚浓度在40 mg/L时,麻醉时间为7 min,复苏率为100%,空气暴露时间15 min,复苏率为100%.丁香酚可以被用作鲫鱼的一种安全有效的麻醉剂.     

抗氧化活性药物筛选模型的建立

以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝细胞为研究对象,以过氧化氢刺激肝细胞,建立抗氧化活性药物体外筛选模型.结果显示:过氧化氢的最佳使用浓度为10 mmol/L,对草鱼肝细胞的作用时间为2h.使用建立的模型测定了维生素C和两种药物在不同浓度下的抗氧化作用,结果表明维生素C和两种药物均具有一定的抗氧...     

南方鲇溃疡综合症病原菌的分离与鉴定

从南方鲇(Silurus meriordinalis Chen)病鱼体表溃疡部及内脏分离出细菌12株,经人工感染证实其中6株治病,生化鉴定6株为同一种菌即为引起该鱼溃疡综合症的病原菌,命名为DKN-1。该菌为革兰氏染色阴性,兼性厌氧发酵型短杆菌,极生单鞭毛,对除葡萄糖、麦芽糖、甘露糖、海藻糖、甘露醇、水杨苷、七叶苷以外多种糖不利用,氧化酶、过氧化氢酶、DNA酶、脂酶、蛋白酶、精氨酸双水解酶阳性,MR、VP阳性。在以该菌16S rDNA序列和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中,DKN-1与豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)同源性达到99.6%,综合该菌在形态、生理生化的结果,鉴定其为豚鼠气单胞菌。该病病原对美满霉素、大观霉素、妥布霉素高度敏感。     

贵州省新农村环境信息管理系统构建的实践

从贵州省脆弱生态环境背景下新农村环境可持续发展入手,旨在建立一个能同时服务政府部门、研究人员以及农民群众的农村环境信息管理系统。本着以上宗旨,分别设计了信息管理系统构建的原则、基础数据指标体系,在此基础上探讨了信息管理系统的运行模式及其主要应用前景。     

大口鲶维氏气单胞菌病发生与诊治

大口鲶俗称河鲶,属鲶形目、鲶科鱼类.大口鲶营养丰富,肉质鲜美,无肌间刺;生长速度快,苗种易得,疾病少,耐缺氧能力强,养殖技术简单,饲料成本低,经济效益好.基于以上原因,该品种深受养殖户和消费者喜爱.2014年7月四川崇州一养殖场养殖的大口鲶发生大规模死亡,笔者对其进行相关诊断,并进行治疗取得很好的治疗效果.     

明治奶粉召回查出放射元素召回40万罐

在中国妈妈中知名度很高的明治奶粉又出事了．日前，日本明治乳业公司宣布，该公司生产的“明治STEP”奶粉检测出微量放射性铯，公司决定召回约40万罐奶粉，进行无偿更换。但通过海外代购等非官方途径购买了明治奶粉的中国妈妈可能享受不到这一待遇，这止一些妈妈很着急。     

农电工形象处处闪光辉

农电工形象处处闪光辉黄肖丹，马学平四川眉山思蒙电管站（６１２１６１）１９９４年３月１９日，电管站的张保金、马学平、张树安、洪志兵４名同志正在莲花乡黄塔村２社为一村民用电搞安装。下午３时许，正在全神贯注进行施工的４位同志突然听见远处传来几声撕心裂肺的声...