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微小隐孢子虫Cp16基因真核表达载体的构建及其免疫保护性研究
引用本文:肖 丹,殷 驰,李建华.微小隐孢子虫Cp16基因真核表达载体的构建及其免疫保护性研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2010,38(12):25-30.
作者姓名:肖 丹  殷 驰  李建华
作者单位:吉林大学 畜牧兽医学院;吉林大学 畜牧兽医学院;吉林大学 畜牧兽医学院
基金项目:国家科技支撑计划项目(20007BAD40B05);国家“863”计划重点支持项目(2006AA10A207)
摘    要:【目的】构建微小隐孢子虫黏附蛋白相关基因Cp16的真核表达载体pVAX1-Cp16,并检测其对小鼠的免疫保护效果。【方法】用PCR方法扩增微小隐孢子虫Cp16基因,构建其真核表达载体pVAX1-Cp16,并用脂质体介导法将其转染Hela细胞,用间接免疫荧光技术、SDS-PAGE及Western-blot检测Cp16蛋白在转染细胞中的表达情况;分别用真核表达载体pVAX1-Cp16、pVAX1空载体及PBS肌肉注射免疫BAILB/c小鼠,共免疫3次,检测血清IgG抗体水平及CD4+和CD8+T细胞亚群的变化,并用微小隐孢子虫卵囊感染免疫小鼠(剂量为1×106个/只),研究真核表达载体pVAX1-Cp16对隐孢子虫感染小鼠的免疫保护作用。【结果】成功构建了pVAX1-Cp16真核表达载体;Western-blot和间接免疫荧光检测结果显示,Cp16基因可以在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。pVAX1-Cp16免疫小鼠(试验组)血清中抗体水平及CD4+与CD8+T细胞数目比值升高,与各对照组(pVAX1和PBS对照组)相比差异显著(P0.05)。各组小鼠经口感染微小隐孢子虫卵囊后,试验组与各对照组相比,卵囊排出量均减少了63.97%,持续排出卵囊时间缩短了2d。【结论】构建了微小隐孢子虫黏附蛋白相关基因Cp16的真核表达载体pVAX1-Cp16,其能刺激机体产生一定的免疫保护作用。

关 键 词:隐孢子虫  Cp16基因  真核表达质粒  免疫保护性
收稿时间:2010/10/29 0:00:00

Construction of eukaryotic expression vector of Cryptosporidium parvum Cp16 gene and its immunoprotective effect
XIAO Dan,YIN Chi,LI Jian-hua,GONG Peng-tao,ZHANG Xi-chen.Construction of eukaryotic expression vector of Cryptosporidium parvum Cp16 gene and its immunoprotective effect[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2010,38(12):25-30.
Authors:XIAO Dan  YIN Chi  LI Jian-hua  GONG Peng-tao  ZHANG Xi-chen
Institution:(College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun,JiLin 130062,China)
Abstract:
Keywords:C  parvum  Cp16 gene  eukaryotic expression plasmid  immunoprotectiveness
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