毛竹大片段双元细菌人工染色体基因组文库的构建

从毛竹Phyllostachys pubescens幼嫩叶片中提取纯化得到高质量的基因组DNA,经限制性内切酶BamH I对它们进行梯度酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,与脱磷酸化处理过的质粒载体pCLD04541按质量比3∶1相互连接,转化大肠杆菌Escherichia coli DH10B感受态细胞进行蓝白斑筛选,挑取白色克隆,获得重组率较高的阳性克隆,构建了含有10⁴个克隆的双元细菌人工染色体（BIBAC）基因组文库,并通过脉冲场电泳检测分析后确定,所构建的毛竹BIBAC文库平均插入片段为105 kb,约覆盖5倍毛竹基因组。该文库的构建为毛竹基因组研究做好了前期的基础工作。图8参18     

烟秆生物质炭对烤烟连作障碍的消减作用初探

通过初步探究烟秆生物质炭对烤烟连作障碍的消减作用,旨在明确连作烟田最佳的烟秆生物质炭施用量,并为今后深入开展烟秆生物质炭消减烤烟连作障碍的机理研究提供一定的科学依据和理论支撑.本研究设置4个烟秆生物质炭施用量(A1:0 g/株;A2:80 g/株;A3:160 g/株;A4:240 g/株)处理,测定不同处理下烤烟的农...     

适用于竹林土壤PCR-DGGE分析用的微生物总DNA提取及纯化方法

为了获得完整、高纯度的竹林土壤微生物总DNA,采用改良的十二烷基硫酸钠-高盐抽提法对5种竹林土壤进行DNA提取,通过DNA凝胶回收试剂盒纯化粗提的DNA,利用细菌16 SrDNA基因的V3区引物对纯化的DNA进行了聚合酶链式反应一变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）验证。结果表明,该方法所需土壤样品少,抽提的DNA片段均在23kb以上,完整性好;采用DNA凝胶回收试剂盒纯化能够有效去除粗提DNA中大部分杂质,获得高质量的DNA;以此DNA为模板进行DGGE检测所反映的微生物信息量丰富。图3表1参15     

毛竹qRT-PCR分析中内参基因的选择

实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)是目前研究基因表达的常用方法,而在特定的实验材料及条件下选择合适的内参基因是准确分析目标基因相对表达量的首要条件。本研究以毛竹(Phyllostachys edulis)的根、茎、叶和笋等器官和组织为实验材料,通过qRT-PCR技术对5种常用内参基因:甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、肌动蛋白(actin,ACT)、热休克蛋白(heat shock protein,HSP)、18S核糖体RNA(18S ribosomal RNA,18S r RNA)和真核起始因子4α(eukaryotic initiation factor 4α,e IF-4α)在毛竹不同器官和组织中的表达情况进行了分析。经Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3个软件对比分析发现,对5种常用内参基因而言,在利用qRT-PCR分析比较毛竹不同叶片之间的基因表达差异时,可选取e IF-4α作为校正内参基因;比较笋不同部位之间的基因表达差异时,可选取18S r RNA或ACT作为校正内参基因;而比较毛竹根、茎、叶不同器官组织分化中的基因表达差异时,可选取18S r RNA作为校正内参基因。而上述发现与多数文献中把ACT作为毛竹唯一内参基因的研究不一致。本研究为在毛竹qRT-PCR分析中选择合适的内参基因提供了理论依据。     

哈密瓜转ACC脱氨酶基因再生植株的获得

ACC脱氨酶基因表达产物具有减少植物乙烯合成的作用,从而达到果实保鲜耐贮的目的.用农杆菌侵染三种哈密瓜(皇后、迦师瓜、红蜜脆)培养8d的子叶块,接种在MS附加BA 1.0mg/L,Kana(卡那霉素)75mg/L和Amp(氨苄青霉素)200mg/L的培养基上,在温度(27±1)℃、光照2000lx条件下,经20d左右培养出现不定芽的分化;继续将这些不定芽接种在MS 附加IBA 0.1mg/L,Kana 50mg/L和Amp 200mg/L的培养基上,诱导根的产生,最终获得了转化植株.通过对转化植株的PCR扩增检测证明,1kb的ACC脱氨酶基因已经整合到哈密瓜基因组中.     

猕猴桃果实成熟生理和贮藏保鲜研究进展

从猕猴桃果实成熟生理的规律入手，分析了影响猕猴桃贮运性的因素，总结了国内外近年来各种贮藏保鲜技术，剖析了我国目前猕猴桃贮藏保鲜方面存在的问题，提出了依靠生物技术培育耐品种，配合各种常规保鲜技术来进行猕光贮藏保鲜的解决策略。     

毛竹EST资源SSR标记分析与筛选

 对来源于NCBI公共数据库的非冗余3 087条毛竹（Phyllostachys edulis）EST序进行简单重复序列SSR搜索发现：在401条毛竹EST序列中共查找到408个SSR位点,平均6.8 kb EST序列中含有1个SSR。其中二核苷酸和三核苷酸重复是毛竹EST-SSR的主要重复类型,分别占SSR总数的43.14%和49.75%。SSR的不同重复基序中,最常见的重复基序是：(AG)_n,占37.01%,其余出现频率较高的依次为(TC)_n、(AGC)_n、(GAG)_n和(CGC)_n。根据搜索结果设计了182条毛竹EST-SSR引物,以12个不同种属的竹子DNA为模板,对引物进行了稳定性、通用性的验证与评价。结果表明有42对引物有较清晰且稳定的目标扩增产物,其中39对引物的产物存在多态性,说明设计开发的毛竹的EST-SSR标记是可行且有效的。     

木瓜花粉生活力测定及储藏特性

以木瓜Chaenomeles sinensis新鲜花粉为试材,通过培养基萌发试验法、氯化三苯基四氮唑（1TrC）染色法、碘．碘化钾（I-KI）染色法对花粉生活力进行测定,并研究了不同储藏条件及时间对木瓜花粉萌发的影响。结果表明：木瓜花粉萌发的最佳培养基为100mg．L-1蔗糖＋30mg·L-1硼酸＋8g-L-1琼脂,萌发率达75．09％;TTC染色法的染色率为60．64％．适宜作为木瓜花粉生活力的测定;I—KI染色法的染色率仅为17．94％,不宜于其生活力的测定;适宜木瓜花粉储藏的条件依次为-80℃,4℃,-23℃和常温;花粉在-80℃储藏16d后,花粉萌发率仍达到22．9％。图2表2参10     

抗生素对甜瓜植株再生的影响

在建立以农杆菌介导的表达ACC脱氨酶基因的甜瓜遗传转化体系过程中,进行了抗生素影响甜瓜植株再生试验。结果表明:卡那霉素对甜瓜愈伤组织、不定芽分化及生根均有明显的抑制作用,75 mg/L的卡那霉素百可作为今后甜瓜遗传转化筛选转化体和非转化体的临界浓度;200~400mg/L浓度范围内的氨苄青霉素能够很好地抑制农杆菌过度生长造成的污染,但对甜瓜植株再生的影响较小。     

竹类植物中CYP85A1基因的克隆及表达分析

油菜素内酯(BRs)是一种促进植物茎秆伸长的甾类植物激素,CYP85A1基因参与了BRs合成中重要的催化反应步骤。为阐明CYP85A1基因在竹类植物节间伸长中的作用,本研究以20个竹类植物为试验材料,利用生物信息学分析了CYP85A1基因的特点,并利用实时荧光定量PCR技术分析了该基因在孝顺竹及其变种凤尾竹的不同组织和不同发育阶段的相对表达量。结果表明, 20个竹种中CYP85A1基因序列在DNA水平上的同源性为92.23%,cDNA序列的同源性为98.79%,氨基酸序列的同源性为97.86%;这些基因均含有9个外显子和8个内含子,编码465~480个氨基酸,蛋白分子量约为54 kDa,理论等电点均约为9.2。氨基酸序列中均含有细胞色素P450家族保守的血红素结合域、富含脯氨酸和氧的结构域及Glu-X-X-Arg结构域;CYP85A1基因孝顺竹和凤尾竹母竹的叶中表达量均最高,茎中次之,在根中的表达量最低。孝顺竹和凤尾竹幼竹中,该基因在顶部的表达量明显高于第2、第4、第5节间中的表达量;CYP85A1基因在快速伸长阶段的表达量明显高于生长缓慢时期,节间伸长速率越快该基因的表达量越高。综上,CYP85A1基因在竹类植物茎秆及节间伸长发育过程中具有促进作用。本研究结果为阐明CYP85A1在竹类植物中的生物学功能奠定了一定的理论基础。