水牛体细胞核移植方法比较及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法核移植效果的影响

本研究旨在比较水牛2种体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT)方法的效果以及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法(Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCICSI)核移植效果的影响.采用水牛胎儿成纤维细胞作为供核,比较了透明带下注核法(Perivitelline Microinjection,PM)和WCICSI核移植效果.另外,试验了不同类型的供体细胞进行全细胞胞质内注射后与激活前的受体胞质的最适宜作用时间.结果,WCICSI构建核移植重构胚的成功率显著高于PM(87.1%vs 81.1%,P＜0.05),虽然其重构胚的分裂率极显著低于PM(49.5%vs 71.8%,P＜0.01),但囊胚率、核移植的效率无显著差异(P＞0.05).卵丘细胞和胎儿成纤维细胞在注射后3 h激活,重构胚的囊胚发育率最高;颗粒细胞注射后与激活前的最佳时间间隔可在1.5～3 h,但3 h是最佳的作用时间.结果表明,(1)WCICSI可用于水牛体细胞核移植的研究;(2)水牛胞质内注射供体细胞后3 h进行激活,核移植重构胚的发育效果最好.     

水牛体细胞连续核移植的效果

为探讨水牛体细胞连续核移植的效果,以水牛胎儿成纤维细胞为核供体,进行了水牛体细胞连续核移植。结果显示,连续核移植的融合率显著高于原代核移植(87.9%vs76.2%,P<0.05),但两者之间的分裂率和囊胚率没有显著差异(P>0.05);这说明水牛体细胞核移植胚胎可被再次克隆而不降低其发育能力,水牛体细胞连续核移植是可行的。     

兔精液冷冻保存的研究

本试验采用不同的稀释液对兔精液进行冷冻保存,并比较了在稀释液中添加不同防冻剂以及平衡时间对兔精液冷冻保存效果的影响.结果表明:稀释液Ⅱ稀释的精液,解冻后,精子活率明显高于稀释液Ⅰ稀释的(P＜0.01),其复苏率显著高于后者(P＜0.05).以稀释液Ⅱ为基础液,添加不同浓度(27.3%,15%,12%,9%)的DMSO对兔精液冷冻保存,结果解冻后精子活率以15%及12%两组较好,其中添加15%的优于12%的,但差异不显著(P＞0.05).选择不同种类的防冻剂(7%甘油与15%DMSO)比较时,发现7%甘油组解冻后精子活率明显低于15%DMSO组,二者差异极显著(P＜0.01),其复苏率显著低于后者(P＜0.05).以15%DMSO作为防冻剂,采用不同的平衡时间在5 ℃平衡,结果发现平衡30 min和60 min的解冻后精子活率较好,但差异不显著(P＞0.05),而90 min和120 min的冷冻效果较差.     

山羊精液冷冻保存技术研究

[目的]探索山羊精液的冷冻方法。[方法]以甘油为冷冻保护剂,采用细管法冷冻保存山羊精液,探讨甘油浓度和添加时间、冻结方法和解冻温度对山羊精液冷冻效果的影响。[结果]在稀释液中添加6%和7%甘油的处理组中,冻后精子活率与复苏率均显著高于添加3%、5%甘油的处理组。配液时添加6%甘油的处理组中冻后精子活率与复苏率均显著低于在4℃平衡后添加的处理组。把平衡的山羊精液分别在离液氮面3 cm处熏蒸9 min和-80℃冰箱中冻结9 min,前者的精子复苏率显著低于后者。在解冻温度分别为40、45和50℃的处理组中精子冻后活率与复苏率显著高于解冻温度为55和60℃的处理组,说明解冻温度以40～50℃为宜。[结论]在山羊精液冷冻保存中,甘油的最佳添加时间为4℃平衡后冻结前。     

供体核种类对水牛核移植效果的影响

采用电融合法和直接注射法进行核移植,以比较不同来源和不同类型水牛供体细胞的核移植效果。当用电融合法进行核移植时,成体耳部成纤维细胞的融合率(46.0%)、卵裂率(53.9%)和囊胚发育率(10.9%),均显著低于胎儿成纤维细胞(64.5%,70.1%和21.6%)、胎儿皮肤细胞(71.5%,70.8%和22.1%)以及卵巢颗粒细胞(88.2%,79.1%和25.5%);后三种细胞间的卵裂率和囊胚发育率无显著差异,但卵巢颗粒细胞的融合率显著高于胎儿成纤维细胞和胎儿皮肤细胞(P<0.05)。当用直接注射法进行核移植时,胎儿皮肤细胞注核后的存活率(78.2%)、卵裂率(41.6%)均显著低于成体耳部成纤维细胞(88.6%和57.4%)和胎儿成纤维细胞(85.8%和65.0%)。胎儿成纤维细胞注核后的卵裂率和囊胚发育率(23.3%)均显著高于胎儿皮肤细胞(10.1%)和成体耳部成纤维细胞(12.0%)。结果表明:(1)采用直接注核法进行核移植时,胎儿成纤维细胞作为核供体较为合适,而采用电融合法进行核移植时,用颗粒细胞作核供体更为适宜;(2)胎儿成纤维细胞的核移植效果好于成体成纤维细胞。     

中华竹鼠父系0和1世代肉用生产性能的比较分析

为了解中华竹鼠父系肉用性能的选育进展,选取0世代和1世代的1日龄中华竹鼠父系各300只,每个世代再随机分为3个重复,每个重复100只。统计两个世代中华竹鼠的成活率、均匀度和体重3个肉用生产性能。结果表明,经过选育后,1世代的断奶鼠成活率、成年鼠成活率、断奶鼠均匀度、成年鼠均匀度较0世代提高4.7%,2.2%,2.9%和2.2%;断奶公鼠体重、断奶母鼠体重、成年公鼠体重、成年母鼠体重分别比0世代提高17.3、15.9、96.4和52.1 g·只-1,差异显著(P0.05),表明中华竹鼠父系1世代的肉用生产性能的选育取得一定的进展。     

中草药饲料添加剂对肉用中华竹鼠生产性能的影响

为研究中草药饲料添加剂对肉用中华竹鼠生产性能的影响,选取35±5日龄的中华竹鼠180只为试验动物,分为1个试验组和1个对照组,每组再设3个重复组进行为期150 d的饲养试验。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮的基础上添加中药提取物300 mg·kg~(-1)。结果表明,试验组的成年鼠成活率、成年鼠均匀度和门齿健康率3个指标分别比对照组中华竹鼠高1.7%,1.8%和2.1%,差异显著(P0.05),试验组成年公鼠体重、成年母鼠体重分别比对照组重50.4 g·只~(-1)和50.8 g·只~(-1),差异显著(P0.05)。说明试验设计的中草药饲料添加剂能够提高中华竹鼠的生产性能。     

哺乳动物细胞核移植目前存在的问题

简要概括哺乳动物细胞核移植技术的应用前景,详细综述其目前存在的问题,认为对待细胞核移植技术的发展,应该理性分析。