HPLC法测定兽用中药散剂中非法添加利巴韦林的方法研究

建立了高效液相色谱法检测白龙散、黄连解毒散、苍术香连散等7种兽用中药散剂中非法添加利巴韦林的方法。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱,以水（用稀硫酸调节pH值至2．5±0.1）为流动相,检测波长207nm,流速1．0mL／min,进样量20μL。结果显示,利巴韦林的线性范围为1.016～20.32μg／mL,线性方程为Y=5．68×10X-5．61×10^-2（r=0．9999,n=6）,本方法的回收率为81．28％～119．46％,RSD为0．88％～1．65％。结果表明,本方法准确、可靠,适用于兽用中药散剂中非法添加利巴韦林的检测。     

应用马传染性贫血病毒-驴胚肺二倍体细胞系统筛选抗人免疫缺陷病毒药物模型研究 Ⅰ.三种药物对马传贫病毒抑制作用

在马传染性贫血病毒-驴胚肺二倍体细胞(EIAV-DELDC)系统中,采用直接生物素抗生物素(BA)染色法,测定了叠氮胸苷(AZT)、三氮唑核苷(Ribavirin)和磷羟基甲酸钠(PFA)三种药物抗EIAV作用。结果表明,这三种药物在此系统中具有明确的抗EIAV作用,并近似于在人免疫缺陷病毒(HIV)及相应细胞系统中的抗HIV作用。     

兽用复方利巴韦林注射液组分含量色谱测定法

采用高效液相色谱法测定兽用复方利巴韦林注射液各组分含量,以Extend-C18(十八烷基硅烷健合硅胶)为填充剂,水—乙腈—二乙胺(415∶85∶2.2,用磷酸调pH值为3.0)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长225nm,进样量10μ1。该制剂利巴韦林在0.505～2.020μg、盐酸环丙沙星在0.510～2.040μg、乳酸甲氧苄胺嘧啶在0.250～1.000μg范围内峰面积与进样量呈线性关系,相关系数均为0.9999,平均回收率分别为99.9%,99.6%,99.5%。该方法分离效果好,准确可靠,适用于该产品质量控制。     

Antiviral efficacy of EICAR against canine distemper virus (CDV) in vitro

Canine distemper virus (CDV) is a highly contagious pathogen of carnivores. In dogs, the disease is characterized by high lethality rates and no specific antiviral therapy is available. The aim of this study was to verify the in vitro antiviral activity of the 5-ethynyl-1-β-d-ribofuranosylimidazole-4-carboxamide (EICAR) and to compare it with the 1-(β-d-ribofuranosyl)-1,2,4-triazole-3-carboxamide (ribavirin, RBV).EICAR was more active than RBV against CDV replication, while both molecules exhibited low selectivity indexes. A reversal of their antiviral activity was observed after addition of guanosine, suggesting their involvement in the inhibition of the inosine monophosphate dehydrogenase enzyme (IMPDH). RBV and EICAR had a time- and concentration-dependent anti-CDV activity, mainly displayed during the first 10 h post-infection. The involvement of the inhibition of the viral RNA-dependent RNA polymerase (vRdRp) is discussed, as well as the role of CDV as a model to study more potent and selective antiviral molecules active against other Paramyxoviridae.     

饲料和鸡肉中利巴韦林的测定--超高效液相色谱-串联质谱法

本研究建立了饲料和鸡肉中利巴韦林的UPLC-MS/MS分析方法。样品经三氯乙酸-乙腈溶液提取,离心后提取液经PBA固相萃取小柱净化,0.1 mol/L甲酸水溶液溶解,进行UPLC-MS/MS分析。结果显示,利巴韦林在10.0～500.0 g/L浓度范围内线性关系良好,r2=0.9991。以浓缩饲料、配合饲料、预混料和鸡肉等为添加基质,其回收率在90.0%～114.5%,检出限为25.0 g/kg,定量限为50.0 g/kg。表明本方法灵敏度高、专属性好、操作简单、结果可靠,可满足饲料和鸡肉中利巴韦林的分析检测。     

UPLC-MS/MS法测定氟喹诺酮类药物可溶性粉中非法添加物利巴韦林

建立了氟喹诺酮类药物可溶性粉中非法添加物利巴韦林检测的UPLC-MS/MS方法。样品经提取稀释后,采用ACQUITY UPLCR BEH amide色谱柱为分离柱,质谱正离子扫描测定。结果显示,利巴韦林在1~50 ng/mL的范围内线性关系良好（R2=0.9984）;样品检出限为0.5 mg/g,定量限为2 mg/g。在40、50、60mg/g添加水平的回收率为90%～110%,批内批间变异系数均小于10%。本方法快速、灵敏、重现性好,适用于氟喹诺酮类药物可溶性粉中非法添加利巴韦林的检测。     

墨兰组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv) 的研究

 对墨兰原球茎顶端分生组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv) 病原的效果进行了研究。取1～2 mm大小的墨兰原球茎顶端分生组织, 经0, 20和40 mg·L ^{- 1}的三氮唑核苷浸泡15 min处理和继代培养, 诱导再生植株。RT2PCR检测表明: 从带病叶样提取的RNA经反向转录和PCR扩增反应, 在琼脂糖凝胶电泳中检测到长为767 bp的CymMv病原特异扩增产物, 而健康墨兰叶样中未检测到该扩增产物。单纯利用原球茎顶端分生组织培养获得的试管苗, 脱毒率为72.9%; 原球茎顶端分生组织经过20 mg·L ^{- 1}的三氮唑核苷处理, 可以获得100%的无病毒苗。虽然三氮唑核苷处理造成原球茎顶端分生组织细胞一定程度的伤害, 但经过5～6个月的培养, 分生组织能恢复生长, 不定芽能有效地增殖, 并获得了再生植株。当三氮唑核苷处理浓度为40 mg·L ^{- 1}时, 原球茎的顶端分生组织出现透明和褐变现象, 细胞活力难以恢复。     

利巴韦林速溶片的制备

选用微晶纤维素 ( microcrystallinecellulose)和淀粉 ( starch)为辅料 ,通过初步处方筛选确定利巴韦林与辅料的最佳比例。采用正交试验 L8( 2 7)筛选出最佳处方。用紫外扫描仪在 2 0 0～ 40 0 nm波长对利巴韦林扫描 ,测得利巴韦林在 2 0 7nm处有最大吸收。绘制利巴韦林标准曲线 ,得回归方程 A=2 .2 5× 1 0 - 3± 0 .0 43C,r=0 .9994。测得利巴韦林的平均回收率为 99.51 % ,相对标准偏差RSD=0 .89%。对利巴韦林速溶片进行质量检查 ,结果表明符合《中国药典》2 0 0 0年版要求。     

利巴韦林免疫原的制备

[目的]通过抗原合成、免疫小鼠制备单克隆抗体,为研制利巴韦林检测试剂盒和胶体金免疫层析试纸条奠定基础.[方法]通过琥珀酸酐法制备利巴韦林的完全抗原R-HS-BSA,免疫BALB/c小鼠,使小鼠产生免疫反应.建立间接ELISA和间接竞争ELISA系统,检测小鼠血清,并应用杂交瘤技术建立利巴韦林Mab细胞株,用体内诱生腹水法制备利巴韦林单克隆抗体,并对其效价、敏感性免疫学特性进行鉴定.[结果]成功合成利巴韦林的免疫原R-HS-BSA和包被原R-HS-OVA,二者蛋白浓度为10.9 mg/mL和10.6 mg/mL,结合比为11∶1和9∶1;血清效价为1∶32 000;制备的单克隆抗体浓度为7.462 mg/L;得到单克隆抗体的ICs0为39.8ng/mL.[结论]初步建立利巴韦林的完全抗原及包被原的制备方法,得到利巴韦林单克隆抗体.