凡纳滨对虾血蓝蛋白酚氧化酶活性的研究

试验结果表明,凡纳滨对虾血蓝蛋白在胰蛋白酶诱导下可表现出一定的酚氧化酶活性,与对照组相比,其酚氧化酶活力单位显著上升。同时,其活性可被D-半乳糖、α-葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇和N-乙酰神经氨酸不同程度地抑制,其抑制率分别为67%、100%、33%、33%、67%和100%。血蓝蛋白与胰蛋白酶孵育后经SDS-PAGE分析和L-Dopa显色,其75 kDa单体呈明显的棕褐色,添加抑制剂N-乙酰神经氨酸之后,其显色强度显著减弱。由此进一步证实凡纳滨对虾血蓝蛋白在胰蛋白酶诱导下确实具有酚氧化酶活性,其活性可被不同的糖所抑制,其发挥活性的单体为75 kDa单体。     

中华绒螯蟹血淋巴中酚氧化酶的部分生化特性

对中华绒螯蟹血淋巴的血清、血浆和血细胞裂解上清液（HLS）中酚氧化酶（PO）的活力以及该酶最适pH和温度进行了测定分析，结果表明在血清和HIS中都有PO活力，而血浆中无PO的存在，血清中的PO来自于血细胞；以L—Dopa为底物，中华绒螯蟹PO活力的最适pH值为6．5，最适温度为40℃。采用SDS、Ca^2＋、Mg^2＋以及SDS与Ca^2＋联合和SDS与Mg^2＋联合分别对酚氧化酶原（proPO）进行激活试验，血清和HLS中的PO活力都有显著的增加，其中SDS的激活作用最强，Ca^2＋、Mg^2＋的激活作用最弱，SDS与Ca^2＋联合和SDS与Mg^2＋联合的混合激活作用介于SDS和Ca^2＋、Mg^2＋之间，激活试验表明中华绒螯蟹的PO主要以酚氧化酶原（proPO）形式存在于血细胞中。     

Effects of formalin on total haemocytes count and histopathological changes in the shrimp Litopenaeus schmitti (Pérez‐Farfante & Kensley 1997)

Formalin is used in shrimp industry to eliminate ectoparasites and as a disinfectant. However, the effect of formalin on shrimp's defense mechanism is unknown. Several biomarkers were used to assess the immune response of juveniles of the shrimp Litopenaeus schmitti exposed to different concentrations of formalin (10, 25 and 50 mg L^?1) during 24 and 48 h. Formalin concentrations of 25 and 50 mg L^?1 produced a significant reduction in the total haemocyte count at both 24 and 48 h. Peroxidase and phenoloxidase activity did not show variations. The total protein concentration in haemolymph of shrimps was not significantly different between experimental groups. Histological analysis showed hyperplasia in the gills of animals exposed at 10 mg L^?1 for 24 h; however, the exposure at 25 and 50 mg L^?1 caused necrosis in gills, hepathopancreas and the antennal gland.     

A3α肽聚糖对凡纳对虾幼体生长及抗病毒感染力的影响

用含不同量的A3α肽聚糖(PG)(0.005%、0.01%、0.1%)的幼体饵料投喂凡纳对虾幼体,另在育苗水体中添加不同水平(0.005mg·mL-1、0.01mg·mL-1、0.05mg·mL-1)PG浸浴并以投喂不添加PG的幼体饵料的实验组作为对照,另设投喂活饵的实验组作参考,分别考察Z1-M1期、M1-PL1期、Z1-PL1期幼体的成活率,M1期、PL1期幼体体长,PL1期幼体体重,另外,PL1期仔虾经7d饲养后,检测体内酚氧化酶(PO)活性,并用白斑综合症病毒(WSSV)料投喂感染。结果显示:与投喂不添加PG幼体饵料组相比,在Z1-M1期,活饵组、0.01%PG添加量的幼体饵料组、0.005mg·mL-1PG的浸浴组幼体的成活率有极显著(P<0.01)提高,而在Z1-PL1、M1-PL1期,各实验组除0.05mg·mL-1浸浴组外均有极显著地(P<0.01)提高;各实验组除0.01mg·mL-1、0.05mg·mL-1PG浸浴组外,M1期幼体体长、PL1期幼体体重也有显著(P<0.01)增长,且各实验组PL1期幼体都有极显著(P<0.01)增长;各实验组仔虾PO活力均有极显著(P<0.01)提高;各实验组除0.1%PG添加量的幼体饵料组外,感染WSSV后仔虾的存活率有不同程度地提高。     

4-己基间苯二酚和曲酸对舞毒蛾酚氧化酶的抑制作用

以舞毒蛾为材料,分离提取酚氧化酶,研究4-己基间苯二酚(4HR)和曲酸对舞毒蛾酚氧化酶活力的影响.结果表明:4HR对该虫的单酚酶和二酚酶活性均表现很强的抑制作用,其IC_(50)分别为0.000 41和0.000 35mmol·L~(-1).其中,4HR对单酚酶活力表达的迟滞时间有明显的延长效应,浓度为0.000 2 mmol·L~(-1)时可使单酚酶活力表达迟滞时间从181 s延长到253 s;而当浓度为0.000 5 mmol·L~(-1)时,其迟滞时间则延长至372 s.以邻苯二酚为底物时,4HR对二酚酶的抑制作用表现为典型的竞争型抑制类型,抑制常数K_1为0.000 15 mmol·L~(-1).曲酸对舞毒蛾的单酚酶和二酚酶活性均表现较强的抑制作用,其IC_(50)分别为0.06和0.92 mmol·L~(-1).曲酸对单酚酶活力表达的迟滞时间也有明显的延长效应,浓度为0.1 mmol·L~(-1)时可使单酚酶活力表达迟滞时间从306 s延长到732 s;而当浓度为0.15 mmol·L~(-1)时,其迟滞时间则延长至900 s.以邻苯二酚为底物时,曲酸对二酚酶的抑制作用表现为典型的竞争型抑制类型,抑制常数K_i为0.51 mmol·L~(-1).     

牛耳枫提取物对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用

 【目的】筛选对甜菜夜蛾（Spodoptera exigua（Hübner)）酚氧化酶具有高抑制活性的化合物,寻找新型害虫控制剂的线索。【方法】以牛耳枫（Daphniphyllum calycinum Benth.）提取物Deoxycalyciphylline B和Methyl homosecodaphniphyllate为抑制剂,采用酶标仪微量法研究了其对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制活性及抑制类型。【结果】Deoxycalyciphylline B和Methyl homosecodaphniphyllate对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)分别为2.439 mmol?L-1和0.879 mmol?L-1,2种化合物均为典型的可逆竞争型抑制剂,抑制常数（Ki）分别为2.051 mmol?L-1和1.269 mmol?L-1。【结论】2种生物碱对甜菜夜蛾酚氧化酶具有较好的抑制活性,可以以这2种化合物或其类似物为模板指导酶抑制剂的分子设计,是寻找新型害虫控制剂的重要途径。     

克氏原螯虾酚氧化酶部分生化特性的研究

以克氏原螯虾(Procambarus clarkii)酚氧化酶(PO)为材料,采用L-DOPA为反应底物,分光光度计测定不同温度和pH条件下PO活力,研究克氏原螯虾PO的特性,为其免疫学研究及优化PO准确测定方法提供依据。结果显示PO活力最高时的温度为35℃,低于和高于35℃活力逐渐下降,45℃以上活力迅速下降;0℃仍具有最高活力的24%。在pH4.0～9.5内PO均具有活力,鳃组织最佳pH5.5,血清最佳pH6.5。因此测定克氏原螯虾PO活力的最佳参数为温度35℃,pH5.5(鳃)或6.5(血清)。以上结果说明冰浴终止反应法测定克氏原螯虾PO活力会影响结果的准确性,要慎用。     

中华蜜蜂酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶相关基因 及其全长转录本发掘与分析

为深入开展中华蜜蜂相关研究提供参考信息和基础,利用已获得的纳米孔(Nanopore)测序数据对中华蜜蜂Apis cerana cerana的酚氧化酶(phenoloxidase, PO)和丝氨酸蛋白酶(serine protease, SP)相关基因和全长转录本进行发掘和分析。通过Blast工具将中华蜜蜂所有全长转录本比对KEGG和Nr数据库以筛选出PO和SP相关基因和全长转录本。采用gffcompare软件将PO和SP相关全长转录本与东方蜜蜂参考基因组(ACSNU-2. 0)已注释基因进行比较以优化结构。使用Astalavista软件鉴定PO和SP相关基因的可变剪接(alternative splicing, AS)事件,再利用IGV浏览器进行结构可视化。通过PCR验证AS事件的真实性。利用TAPIS pipeline预测和分析可变多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation, APA)位点,并通过TBtool软件鉴定APA位点上游的基序(motif)。鉴定到中华蜜蜂PO和SP相关的42个基因与146条转录本。优化了16个参考基因组已注释PO和SP相关基因的结构,其中5′端延长和3′端延长的基因均有7个,5′端和3′端同时延长的基因有2个。鉴定到PO和SP相关的10个基因的389次AS事件,其中最丰富的AS类型是5′端可变剪接。PCR结果证实了2次AS事件的真实性。共鉴定到34个PO和SP相关基因含有1个及以上的APA位点,其中含有3个APA位点的基因数量最多;在APA位点上游鉴定到多个motif,一致性序列为：GGHKSYWSHHTRATWTCNBHDMRRYWYRTNYTVACNGCKGCDCAYTGYR。鉴定到中华蜜蜂PO和SP相关的42个基因和146条全长转录本,优化了东方蜜蜂参考基因组已注释的PO和SP相关基因结构,并发掘出PO和SP相关基因的389次AS事件和237个APA位点。     

日本对虾的酚氧化酶特性研究

本文以日本对虾为材料提取和部分纯化酚氧化酶，并对其特性进行了研究，以邻苯二酚为作用底物，该酶的最适ｐＨ为６．５，在ｐＨ５．０－８范围内较高稳定性，最稳定的ｐＨ为７．０，最适温度为４０℃，在４０℃以下表现出较高的热稳定性，而在５０℃以上迅速失活。该酶对不同的酚类物质表现出不同的底物专一性，由高至低的趋势依次为三元酚、二无酚和单元酚。米氏常数Ｋｍ值测定表明，该酶对邻苯二酚比ＤＬ－多巴有更高的亲和力。浓     

天然源化合物曲酸对小菜蛾酚氧化酶抑制作用研究初报

研究了曲酸对小菜蛾酚氧化酶的抑制作用及抑制类型。结果表明,曲酸对该试虫酚氧化酶的抑制中浓度(I50)为66.54 μg/mL,是酚氧化酶典型的竞争型抑制剂。对以曲酸为模板,研究开发对酚氧化酶有抑制作用的"昆虫生命活动干扰剂"理论及实践进行了讨论。