野桑蚕、家蚕海藻糖酶基因5''侧翼区的克隆与序列分析

海藻糖是一种双糖,广泛存在于包括细菌、酵母、植物和无脊椎动物在内的生物体内,主要功能是储备生物代谢所需的能源.在昆虫血液中,海藻糖是一种最重要的糖类,具有供给能量和提供合成生物大分子的底物等功能.其功能主要是通过海藻糖酶(Trehalase)的作用来实现的.家蚕海藻糖酶有可溶型和膜固定型两种类型,可溶型主要存在于蛹期中肠,而膜固定型存在于包括卵巢在内的多种组织.这两种类型酶是由同一个基因表达而形成不同的成熟海藻糖酶.海藻糖酶膜固定型存在于向血液面的卵巢膜内,该基因的表达是由滞育激素诱导调控.卵母细胞通过位于膜内的海藻糖酶,将血液中海藻糖降解成葡萄糖,然后吸收到胞内,最后合成糖原,从而导致蚕卵的滞育.从而海藻糖酶基因是从分子水平来解明家蚕滞育机理的一个重要途径.本实验从野桑蚕、家蚕苏@菊×明@虎基因组中分别克隆了野桑蚕和家蚕的海藻糖酶基因的5′侧翼区片段并进行了测序分析,以供进一步的启动子功能研究,现报道如下.     

两个褐飞虱海藻糖转运蛋白基因的结构及调控海藻糖代谢功能

【目的】海藻糖是昆虫中的主要血糖物质,在昆虫的发育及生理活动中发挥重要功能。其中,海藻糖转运蛋白(Tret)在将海藻糖从其生成组织(例如脂肪体)运输到其消耗组织的过程中起着重要作用。本研究通过分析褐飞虱(Nilaparvata lugens)两条Tret1的序列结构,进一步抑制Nl Tret1的表达,探讨这两个Nl Tret1在褐飞虱体内的生物学功能。【方法】以褐飞虱两条Tret1序列为研究对象,利用生物信息学技术分析其蛋白结构以及与其他昆虫之间的同源性。采用RNAi(RNA interference)技术将合成的外源ds RNA(double-stranded RNA)注射到实验室饲养褐飞虱种群体内,抑制其体内Nl Tret1的表达,分别在注射48 h后取材,抽取总RNA并用反转录试剂盒合成第一链c DNA,采用q RT-PCR(quantitative real-time PCR)技术检测ds Nl Tret1的干扰效果以及RNAi后褐飞虱体内海藻糖代谢通路中相关基因的表达,最后测定葡萄糖、海藻糖和糖原含量以及海藻糖酶活性。【结果】生物信息学分析表明,Nl Tret1-like X...     

外源海藻糖对高温胁迫下肺形侧耳氧化损伤的缓解效应

高温胁迫影响食用菌的品质和产量,由高温引起的氧化胁迫是导致损伤的主要原因.以肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)热敏感菌株CCMSSC 00494和耐热菌株CCMSSC 00499为试验材料,研究了外源海藻糖对其菌丝体高温胁迫下氧化损伤的缓解效应.结果表明,高温(40℃)胁迫48 h,热敏感菌株中硫代巴比妥酸反应物(TBARS)含量(代表氧化损伤程度)高于耐热菌株.外源海藻糖处理可以显著降低高温胁迫下菌丝体内O2-产生速率、H2O2含量、脂氧合酶(LOX)活性和TBARS含量水平,缓解高温胁迫所引发的氧化损伤.另外,外源海藻糖对超氧化物歧化酶(SOD)活性有保护和提高的作用,对过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性有抑制作用,对过氧化物酶(POD)活性影响不明显.外源海藻糖对热敏感菌株的保护效应高于耐热菌株.     

木薯种茎离体脱水胁迫下生理生化响应研究

木薯是热带和亚热带地区重要的粮食和经济作物。木薯种茎是目前唯一的繁殖方式,然而采收后木薯种茎如何应对脱水胁迫及糖代谢基因的表达尚不清楚。本研究通过检测对照组和保水处理组的木薯种茎在采后不同时间点水分和糖分的含量变化来探究离体条件下木薯种茎内糖类发挥的作用。通过检测糖类代谢相关基因的表达来解析不同糖分间的代谢关系及离体种茎的活性状态。结果表明,在保水处理组中随着采后时间的延长,种茎中的果糖、葡萄糖和蔗糖的含量先降低后升高,而海藻糖含量变化正好相反。同时,保水处理组的果糖、葡萄糖和蔗糖的含量显著高于对照组,而海藻糖含量显著低于对照组。qPCR分析发现,严重的脱水胁迫显著地提高了糖酵解基因的表达。这些结论表明,脱水胁迫显著影响木薯茎中糖类的相互转化。推测脱水胁迫前20 d通过合成海藻糖来响应脱水胁迫,在20~30 d则通过分解海藻糖为木薯种茎提供必要的能量物质。同时本研究通过甘油处理提高了木薯种茎的贮藏时间,为木薯种茎的贮藏提供新的方法。     

外源海藻糖对NaCl胁迫下番茄幼苗生理指标的影响

在0.4%NaCl胁迫下,利用0.3%~0.5%的外源海藻糖处理番茄幼苗,研究其对番茄幼苗生长及叶片保护酶活性和氧化损伤的影响。结果表明:0.5%的外源海藻糖处理显著提高了番茄幼苗的株高、茎粗、根系活力、叶片叶绿素含量和SOD酶的活性,显著降低了MDA的含量,缓解NaCl胁迫伤害的效果最好,增强了植株的耐盐性。     

谷氨酸棒杆菌麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因的克隆与表达

采用PCR方法从谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）基因组中分离得到2.4 kb的麦芽寡糖基     

海藻糖对冻藏过程中鳙肌原纤维蛋白冷冻变性的影响

从鳙（Aristicktkys nobilis）肌肉中提取肌原纤维蛋白，在蛋白溶液中加入10％（W／V）蔗糖、山梨醇混合物（质量比1：1）或10％（W／V）海藻糖。蛋白溶液在-18℃下冻藏30d，测定冻藏过程中肌原纤维蛋白盐溶性、Ca^2＋-ATPase活性、活性巯基含量、总巯基含量、表面疏水性变化和冻藏结束时的SDS-PAGE。测定结果表明，蔗糖、山梨醇混合物和海藻糖都抑制了冻藏过程中肌原纤维蛋白盐溶性、Ca^2＋-ATPase活性、巯基含量的降低和表面疏水性的升高，延缓了鳙肌原纤维蛋白的冷冻变性。海藻糖比蔗糖、山梨醇混合物有更好的抗冷冻变性效果。[中国水产科学，2006，13（4）：637—641]     

外源添加山梨醇和海藻糖对意大利蜜蜂抗寒性能的影响

本试验旨在通过测定意大利蜜蜂(简称意蜂)体内山梨醇、海藻糖等相关生化物质含量、抗氧化酶活性及抗寒基因表达的变化,探究外源添加山梨醇和海藻糖在蜜蜂抗寒过程中的作用机制.从意蜂姊妹蜂群中随机选取900只刚出房的蜜蜂,随机分成6组,每组3个重复,每个重复50只蜜蜂,分别饲喂蔗糖溶液(对照) 、海藻糖溶液和山梨醇溶液. 6 组...     

丹参海藻糖-6-磷酸合成酶基因（SmTPS）的克隆及其表达分析

对丹参EST序列进行Blast分析,得到一条海藻糖-6-磷酸合成酶（TPS）基因,将其命名为SmTPS,GenBank注册号为JF937196。该基因cDNA全长2836 bp,包含一个长为2574 bp的ORF,编码857个氨基酸。生物信息学分析表明,分子量为97.04 kD,等电点为5.76,含α-螺旋、β转角、延伸连和无规则卷曲。该蛋白同时具有海藻糖-6-磷酸合成酶（TPS）和海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶（TPP）的功能结构域。系统进化树分析表明丹参TPS功能域和拟南芥AtTPS6属于一类,而TPP功能域与低等生物酵母ScTPS2属于一类。实时定量PCR结果分析表明,SmTPS基因在丹参不同组织器官中差异表达,其茎中表达量最高。在干旱和低温处理下,其表达量与对照相比均可上调约2倍,表明SmTPS基因在丹参抵抗干旱和低温胁迫中发挥一定的作用。     

酿酒酵母菌胞内海藻糖提取工艺参数的优化

建立了超声破碎酿酒酵母细胞和冷三氯乙酸化学浸提海藻糖的工艺，探索了离子色谱分析技术条件，采用响应曲面法（RSM），研究了液料比R、超声功率W、工作时间T1、超声总时间T2和浸提时间T3等5个试验关键因子对海藻糖提取的影响规律，并构建了动态控制的数学模型，得到了海藻糖提取最优工艺参数依次为：尺为7、W为698W、T1为4．9s、T2为7．3min、T3为9min。结果表明：模型极显著，具有可行性和有效性，超声功率、工作时间和超声总时间对海藻糖提取量的影响最大，为生产中的应用提供了科学依据。