三个类群藏系绵羊线粒体细胞色素b基因序列多态性及其系统进化的研究

为研究藏系绵羊红原、贾洛、欧拉3个类群的亲缘关系、遗传多样性以及其系统进化,测定该3个类群藏系绵羊的41个个体的细胞色素b基因的全序列。结果表明,41个藏系绵羊的细胞色素b基因的全序列长度均为1 140bp,有27个多态位点,其中单一多态位点16个,简约信息位点11个,共定义13种单倍型,单倍型多样性为0.672±0.078,核苷酸多样性为0.331%。藏系绵羊贾洛类群与欧拉类群遗传距离最远,为0.003 9,红原类群与欧拉类群遗传距离较近,为0.002 64。说明红原类群与欧拉类群亲缘关系较近,藏系绵羊有一个共同祖先,同时存在第2个母系起源。     

四川白猪血液蛋白多态型的测定

采集 30头四川白猪血样 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ,测定血清中运铁蛋白 (Tf)、前白蛋白(Pa)、后白蛋白 (Po)、血液结合素 (Hp)的多态型 ,估测其基因型频率和基因频率。测定结果表明 :四川白猪运铁蛋白有AA、AB、AC、BB、BC、CC六种表现型 ,前白蛋白有AA、AB、BB三种表现型 ,后白蛋白有AA、AB、BB三种表现型 ,血液结合素有 0 - 1、1 - 1、1 - 2、2 - 2、2 - 3五种表现型 ,其频率分别为 :0 0 6 6 7、0 2 0 0 0、0 2 6 6 7、0 2 0 0 0、0 2 333、0 0 333、0 4 333、0 4 6 6 7、0 1 0 0 0、0 5 333、0 30 0 0、0 1 6 6 7、0 30 0 0、0 4 6 6 7、0 0 333、0 1 0 0 0、0 1 0 0 0     

不同绵羊群体KAP2基因多态性分析

为了探究KAP2基因在不同绵羊群体的多态性,本次试验利用PCR-SSCP的方法,分析新吉细毛羊、道赛特羊和小尾寒羊的基因型和突变位点,并对KAP2基因编码区序列进行多态性分析。结果:新吉细毛羊基因序列第292位点处发生T→C的突变,绵羊群体基因型可分为AA、AB、BB基因型;A基因频率中新吉细毛羊、道赛特羊、小尾寒羊分别为0.3261、0.3696、0.5217,B基因频率中新吉细毛羊、道赛特羊、小尾寒羊分别为0.6739、0.6304、0.4783,AA基因型频率新吉细毛羊、道赛特羊、小尾寒羊分别为0.2609、0.3043、0.3913,AB基因型频率新吉细毛羊、道赛特羊、小尾寒羊分别为0.1304、0.2174、0.2609,BB基因型频率新吉细毛羊、道赛特羊、小尾寒羊分别为0.6087、0.4783、0.3478。结论:绵羊群体分为AA、AB、BB基因型,BB基因型为优势基因型。     

乾华肉用美利奴羊血红蛋白多态性的研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE)分析乾华肉用美利奴羊的血红蛋白(Hb)多态性。结果表明:乾华肉用美利奴羊血红蛋白多态性存在Hb A和Hb B两种变异体,构成了Hb AA、Hb AB和Hb BB三种基因型。其中Hb AA、Hb AB和Hb BB基因型频率分别为0.17、0.20和0.63,基因杂合度为0.39;Hb ~A基因频率为0.27,Hb ~B基因频率为0.73,以Hb ~B为优势基因。该研究旨在对乾华肉用美利奴羊的保种选育以及生产提供理论指导。     

申农1号猪ESR基因的多态性及其与繁殖性能相关性分析

本研究采用PCR—RFLP的方法,对申农1号144头母猪进行ESR基因的多态性进行检测,分析ESR基因型对头胎总产仔数与产活仔数的遗传效应。结果表明,在申农1号母猪群中,ESR基因存在遗传多态性,可分为AA、AB和BB三个基因型,A、B等位基因频率分别为0．5069和0．4931。AA型、AB型和BB型的频率分别为0．2639、04861和0．2500,但AA、AB和BB三种基因型与产仔数之间差异均不显著。     

西宁地区西门塔尔牛血液蛋白质多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对西宁地区西门塔尔牛的血红蛋白、运铁蛋白和后运铁蛋白的多态性特征进行了研究。结果表明:①血红蛋白位点存在HB AA和HB AB两种基因型,以HBAA为优蛰基因型,HB~A为优势等位基因;②运铁蛋白位点存在TF AA,TF AD,TF DD,TF DE和TF AE五种基因型,以TF DD为优势基因型,TF~D为优势等位基因;③后运铁蛋白位点存在PTFAA,PTF AB和PTF BB三种基因型,以PTF AA为优势基因型,PTF~A为优势等位基因;④三个血液蛋白质位点的平均基因杂合度为0.3396。     

藏系绵羊、新疆细毛羊及阿勒泰羊mtDNA D-loop基因序列分析及系统进化研究简

为研究藏系绵羊的贾洛、红原、欧拉3个类群与新疆细毛羊、阿勒泰羊的遗传多样性及系统进化关系,试验对该5个类群89个绵羊个体的mtDNA D-loop区全序列进行测序分析。结果显示,该5个绵羊类群89个个体总共发现有168个多态性位点,单一多态位点（singleton variable sites） 82个,简约信息位点（parsimony informative sites）86个,碱基A+T的平均含量达到了62.5%,明显高于C+G（37.5%）,共检测到70种单倍型,核苷酸多样性（Pi）在0.01040～0.02892之间,单倍型多样性在0.640～1.000之间,平均核苷酸差异数（K）为18.340,Tajima’s D中性检验发现这5个类群均不显著。通过构建NJ进化树结果表明,在藏系绵羊中红原类群与欧拉类群的亲缘关系最近,其次藏系绵羊中贾洛类群才与红原、欧拉类群聚为一类,再依次聚类的为新疆细毛羊、欧洲摩弗伦羊、东方盘羊;盘羊与羱羊单独聚为一类。该5个类群存在明显的3个母系起源。     

两个藏系绵羊类群细胞色素氧化酶Ⅰ基因序列多态性及系统进化分析

为了从分子水平研究藏系绵羊贾洛类群和红原类群的遗传多样性和系统进化,试验采用PCR和测序方法对贾洛类群、红原类群、新疆细毛羊共25个样品的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)基因全序列进行分析。结果表明:3个绵羊品种(类群)的COⅠ基因序列全长为1 545 bp,共定义11种单倍型,单倍型多样性为0.464~0.806,核苷酸多样性为0.002 27~0.004 61,红原类群的遗传多样性比贾洛类群和新疆细毛羊丰富。25只个体的系统发育树呈现3个明显分支,支持绵羊有3个独立母系起源的观点;红原类群和新疆细毛羊为3个支系,贾洛类群为2个支系。3个群体间的分子系统发育树显示,红原类群与贾洛类群聚在一起,新疆细毛羊为相对独立的一支。说明COⅠ基因可以用于分析绵羊品种间或不同类群间的系统进化。     

绵羊MyoG基因内含子Ⅱ多态性及其与生长性状的关联分析

【目的】 分析肌细胞生成素(myogenin,MyoG)基因内含子Ⅱ的多态性及其对绵羊生长性状的影响,筛选对绵羊生长发育有显著影响的分子标记,以期为绵羊的分子育种提供参考。【方法】 选取大尾寒羊、小尾寒羊、豫西脂尾羊、湖羊、杜泊羊5种绵羊为研究对象,采用PCR-RFLP技术对MyoG基因内含子Ⅱ(Eco72 Ⅰ)进行基因分型,利用PopGene32软件计算绵羊MyoG基因内含子Ⅱ的群体遗传多样性,利用SPSS 17.0软件对不同基因型与绵羊生长性状进行关联分析。【结果】 小尾寒羊、杜泊羊、湖羊群体中MyoG基因内含子Ⅱ均存在3种基因型:AA(368/540 bp)、AB(908/368/540 bp)和BB(908 bp);大尾寒羊和豫西脂尾羊群体中仅检测到2种基因型:AB(908/368/540 bp)和BB(908 bp)。大尾寒羊、小尾寒羊、豫西脂尾羊、湖羊、杜泊羊的AB基因型频率分别为0.845、0.633、0.917、0.706和0.811,BB基因型频率分别为0.155、0.033、0.083、0.176和0.054,AA基因型频率分别为0、0.333、0、0.118和0.135。小尾寒羊的杂合度最低(0.455),杜泊羊的杂合度最高(0.497),表明杜泊羊的遗传多样性要高于其他群体;5个群体多态信息含量(PIC)均为中度多态(0.25<PIC<0.5)。关联分析发现,小尾寒羊MyoG基因内含子Ⅱ BB基因型个体胸围、胸宽、头长、颈长均显著低于AA、AB基因型(P<0.05)。【结论】 MyoG基因内含子Ⅱ Eco72 Ⅰ位点可作为影响绵羊生长性状的分子标记,结果可为今后绵羊生长性状的分子标记辅助选择提供参考。     

四川省引进外种猪群体的ESR基因Pvu Ⅱ位点多态性分析

采用PCR-RFLPs方法,对四川引进外种猪(杜洛克、长白猪和约克夏)ESR基因的多态性进行研究。并对ESR基因的基因频率和基因型频率进行分析,结果表明:杜洛克出现了AA、AB、BB3种基因型,基因型频率分别为76.32%、18.42%和5.26%,A、B基因频率分别为85.53%和14.47%;长白猪中仅出现AA和AB2种基因型,且基因型频率分别为67.74%和32.26%,其中,等位基因A、B频率分别为83.87%和16.13%;在约克夏中存在AA、AB、BB3种基因型,频率分别为22.22%、61.90%和15.87%,等位基因A与等位基因B频率相当,分别为53.18%和46.82%。     

Investigation of transferrin polymorphism in Garole sheep

The aim of this study was to determine the genetics of polymorph systems of Transferrin in Garole sheep breed. The present study was conducted on 95 adult Garole sheep comprising 52 ewes and 43 rams, maintained at Sheep and Goat Breeding Farm of West Bengal University of Animal and Fishery Sciences, West Bengal, during the period from April–September, 2009. The polymorphism of transferrin was determined through SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis technique. It was found that the transferrin type was controlled by five codominant alleles (TfA, TfB, TfC TfD and TfE) in Garole sheep. These five alleles, because of co-dominant nature of inheritance, determined the occurrence of nine transferrin genotypes in the analyzed flock. Four (TfAA, TfBB, TfCC and TfDD) of these were homozygous and the remaining five (TfAD, TfBC, TfBD, TfCD and TfDE) heterozygous. It was found that the TfDD genotype (0.263) was predominant while TfDE genotype (0.042) was least common in the analyzed flock. Frequencies of other genotypes were as: TfCD(0.242), TfBD(0.126), TfCC(0.084), TfBB(0.074), TfAA(0.063), TfAD and TfBC (0.053 for each genotype ) in whole population. From the result it was found that in whole population combined, the heterozygotic genotypic frequency (0.516) was more than that of homozygotic genotypic frequency (0.484). Considerable variations were recognized in the frequencies of transferrin alleles. In the whole population frequencies of transferrin alleles were found to be TfA = 0.089, TfB = 0.163, TfC = 0.232, TfD = 0.495 and TfE = 0.021. Transferrin system has shown an absence of genetic equilibrium among the analyzed herd (χ2 value = 51.31). In conclusion, there were polymorphism in Transferrin types and the presence of differences among the frequencies of the five alleles by categories could be a source of genetic variation in Garole sheep.     

不同绵羊群体间心脏型脂肪酸结合蛋白基因第2外显子单核苷酸多态性的研究

以东北细毛羊、小尾寒羊、杜泊和道赛特4个群体为研究对象,采用PCR-SSCP方法对心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid binding protein,H-FABP)基因第2外显子单核苷酸多态性进行检测。结果发现,H-FABP基因第2外显子存在939(A/G)、980(G/A)、1013(A/C)和1018(T/C)4个SNP位点,表现出AA、AB、BB 3种基因型;在东北细毛羊、小尾寒羊和杜泊群体中,BB型为优势基因型,在道赛特群体中,AB型为优势基因型;经χ²检验后,4个绵羊品种群体的基因频率和基因型频率均处于Hardy-Weinberg平衡状态;群体遗传多态性分析结果表明,东北细毛羊、杜泊和道赛特3个群体中的多态信息含量(PIC)均处于0.25和0.50之间,为中度多态,小尾寒羊为低度多态(PIC＜0.25);进一步分析结果表明,各个群体存在不同程度的遗传变异。     

The Analysis for the Single Nucleotide Polymorphism of TGF-β1 and Its Association with Reproduction in Different Sheep Breeds

A single nucleotide polymorphism (SNP) of 805 bp region in the intron 6 of transforming growth factor β1 (TGF-β1) gene was identified by polymerase chain reaction-single-strand composition polymorphism (PCR-SSCP) in 196 sheep among Small-tailed Han sheep, Tong sheep, Tan sheep and Oula sheep. Comparative sequence analysis of cloned products revealed an AGAC deletion at 294 bases upstream of exon 7 of the TGF-β1 gene (site 14201 in gi76871756). Statistical results of the genotype and allele frequencies in different breeds showed that genotype AB was dominant in the Small-tailed Han sheep. Genotype BB, however, was in majority in low-fecundity sheep. The results of a Chi-square test indicated that all the populations were in Hardy-Weinberg equilibrium.     

The Analysis for the Single Nucleotide Polymorphism of TGF-β1 and Its Association with Reproduction in Different Sheep Breeds

A single nucleotide polymorphism(SNP)of 805 bp region in the intron 6 of transforming growth factor β1(TGF-β1)gene was identified by polymerase chain reaction-single-strand composition polymorphism(PCR-SSCP)in 196 sheep among Small-tailed Han sheep,Tong sheep,Tan sheep and Oula sheep.Comparative sequence analysis of cloned products revealed an AGAC deletion at 294 bases upstream of exon 7 of the TGF-β1 gene(site 14201 in gi76871756).Statistical results of the genotype and allele frequencies in different breeds showed that genotype AB was dominant in the Small-tailed Han sheep.Genotype BB,however,was in majority in low-fecundity sheep.The results of a Chi-square test indicated that all the populations were in Hardy-Weinberg equilibrium.     

绵羊MyoG基因外显子1的多态性及其与肉质性状的关联分析

肌细胞生成素（myogenin,MyoG）基因在肌细胞分化过程中起着中心调节作用,直接影响着动物的产肉能力。本研究以大尾寒羊、小尾寒羊、豫西脂尾羊、兰州大尾羊、蒙古羊、同羊6个绵羊品种为试验材料,利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测MyoG基因外显子1的多态性,并与绵羊的肉质性状进行关联分析,探讨MyoG基因外显子1对绵羊肉质性状的影响。结果表明,MyoG基因外显子1在6个绵羊群体中均检测到3种基因型（AA、BB、AB）和2个等位基因（A、B）,在小尾寒羊、大尾寒羊、豫西脂尾羊、兰州大尾羊、蒙古羊、同羊群体中检测到MyoG基因外显子1的A等位基因频率分别为：0.5167、0.2500、0.4375、0.6500、0.5750和0.7125,MyoG基因外显子1的B等位基因频率分别为：0.4833、0.7500、0.5625、0.3500、0.4250和0.2875。MyoG基因外显子1主要对羊肉的水分和色泽有影响,主要表现为BB基因型水分极显著高于AB基因型（P< 0.01）,显著高于AA基因型（P< 0.05）;AB基因型的色泽极显著高于BB基因型（P< 0.01）,显著高于AA基因型（P< 0.05）。     

Polymorphism of MyoG Gene Exon 1 and Its Association Analysis with Meat Quality Traits in Sheep

Myogenin (MyoG) gene plays a central regulatory role in the process of muscle cell differentiation, which directly affects meat production capacity of animal. In this study, 6 sheep varieties including Large-tail Han sheep, Small-tail Han sheep, Yuxizhiwei sheep, Lanzhou fat-tailed sheep, Mongolia sheep and Tong sheep were selected as experimental materials to detect the polymorphism of MyoG gene exon 1 by non denaturing polyacrylamide gel electrophoresis, and analyze the association analysis between the polymorphism of MyoG gene exon 1 and meat quality traits in sheep. The results showed that 2 alleles (A, B) and 3 genotypes (AA, BB, AB) were detected in MyoG gene exon 1 of six sheep populations. The A allele frequency in Small-tail Han sheep, Large-tail Han sheep, Yuxizhiwei sheep, Lanzhou fat-tailed sheep, Mongolia sheep and Tong sheep were 0.5167, 0.2500, 0.4375, 0.6500, 0.5750 and 0.7125, respectively, the B allele frequency of six sheep populations were 0.4833, 0.7500, 0.5625, 0.3500, 0.4250 and 0.2875, respectively. MyoG gene exon 1 mainly affected the moisture and color of mutton, the moisture content of BB genotype was significantly higher than that of AB genotype (P< 0.01) and AA genotype (P< 0.05). The color of AB genotype was significantly higher than that of BB genotype (P< 0.01) and AA genotype (P< 0.05).     

湖羊IGF-1基因5’侧翼区多态性与羊毛弯曲度性状的关联分析

为探寻湖羊IGF-1基因5′侧翼区多态性及其对羊毛弯曲度性状的影响,选用128只湖羊作为实验材料,对IGF-1基因5'侧翼区进行扩增、测序和PCR-SSCP检测,探讨IGF-1基因5′侧翼区的遗传特征,寻找与羊毛弯曲度性状相关的遗传标记,为湖羊羊毛弯曲度标记辅助选择提供理论依据。结果表明:湖羊IGF-1基因5'侧翼区突变位点有AA、AB、BC三种基因型,基因型频率分别为0.609 4、0.093 8和0.296 8。AB型与AA型相比,在外显子1前的第649 bp有一处G→A突变,BC型与AA型相比,在外显子1前的第651 bp处发生G→C突变,在外显子1前的第649 bp有一处G→A突变。卡方独立性检验结果表明,不同基因型个体羊毛花纹类型和基因型之间不存在显著相关关系(P>0.05)。该研究初步认为,IGF-1基因5'侧翼区多态性与羊毛弯曲度性状之间没有显著关联(P>0.05)。     

小尾寒羊高繁殖力候选基因RARG的研究

以视黄酸受体γ（retinoic acid receptor-gamma，RARG）基因为候选基因，采用PCR—SSCP技术分析了RARG基因在高繁殖力绵羊品种（小尾寒羊、湖羊）以及低繁殖力绵羊品种（特克塞尔、多赛特、萨福克）中的单核苷酸多态性，同时研究这个基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明：RARG基因引物1扩增片段在5个绵羊品种中存在PCR—SSCP多态性，AA基因型只出现在湖羊中，AB和BB基因型均出现在5个绵羊品种中；BB基因型小尾寒羊平均产羔数比AB基因型多0．41只，但差异不显著（P〉0．05）。RARG基因引物2扩增片段在5个绵羊品种中存在PCR—SSCP多态性，CC和CD基因型均出现在5个绵羊品种中，5个绵羊品种中都没有检测到DD基因型；CC基因型小尾寒羊平均产羔数比CD基因型多0．55只（P〈0．05）。     

绵羊高繁殖力候选基因BMPR-IA的研究

以骨形态发生蛋白受体IA（bone morphogenetic protein receptor IA，BMPR-IA）基因为候选基因，采用PCR—SSCP技术检测该基因在高繁殖力绵羊品种（小尾寒羊、湖羊）以及低繁殖力绵羊品种（多赛特羊、特克塞尔羊、德国肉用美利奴羊）中的单核苷酸多态性，同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明：在小尾寒羊中检测到AA、AB两种基因型，在湖羊中只检测到一种基因型BB，而在低繁殖力的3个绵羊品种中只检测到一种基因型AA。统计结果表明：小尾寒羊A等位基因频率为0．964，B等位基因频率为0．036。测序结果表明：BB型与AA型相比有6处核苷酸发生了突变。独立性检验表明：外尾寒羊与低繁殖力绵羊品种间基因型分布差异不显著（P〉0．05），而湖羊与小尾寒羊、低繁殖力绵羊品种间基因型分布差异极显著（P〈0．001）。AB基因型小尾寒羊平均产羔数比AA基因型多0．15只，但差异不显著（P〉0．05）。研究表明：BMPR-IA基因不是小尾寒羊和湖羊高繁殖力的主效基因。     

小尾寒羊高繁殖力候选基因RBP4的研究

以视黄醇结合蛋白4（retinol binding protein 4，RBP4）基因为候选基因，采用PCR-SSCP技术分析了RBP4基因在高繁殖力绵羊品种（小尾寒羊、湖羊）以及低繁殖力绵羊品种（多赛特羊、萨福克羊）中的单核苷酸多态性，同时研究这个基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明：RBP4基因扩增片段在4个绵羊品种中存在PCR-SSCP多态性。BB基因型只出现在高繁殖力绵羊品种中，而低繁殖力绵羊品种则没有BB基因型；AB基因型频率随着绵羊繁殖力的降低而升高；AA基因型只出现在小尾寒羊、多赛特羊中。BB基因型小尾寒羊产羔数分别比AA和AB基因型多0．52只（Pd0．05）和0．67只（Pd0．05），AA和AB基因型小尾寒羊产羔数没有显著差异（P〉0．05）。本研究检测的绵羊RBP4基因座位与小尾寒羊高繁殖力相关。