镉对体外培养大鼠大脑皮质神经元钙稳态的影响

选用原代培养大鼠大脑皮质神经元为模型,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体经免疫组织化学染色技术鉴定神经元.用不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)醋酸镉染毒大鼠大脑皮质神经元12h,利用流式细胞仪检测细胞内[Ca2-]i,ATPase酶试剂盒测定Na-K+ ATPase和Ca2-Mg2--ATPase活性的变化,荧光定量PCR法测定钙调蛋白(CaM) mRNA转录水平.结果表明,免疫组化染色证实培养细胞呈现NSE阳性染色,证明是神经元.与对照组相比,各镉染毒组细胞内[Ca2+]i显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01),Na--K--ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性显著或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),20 μmol/L组CaM mRNA转录水平极显著降低(P＜0.01).说明镉可能通过影响CaM的转录水平与维持钙稳态相关的酶(Na+-K-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase)活性,干扰神经元细胞内钙稳态,进而造成神经元细胞损伤.     

铅、镉及铅镉联合胁迫致雏鸡红细胞膜的损伤

150只7日龄公雏鸡分为10组,分别经口灌服或在体外培养红细胞中加入生理盐水、低浓度、中浓度及高浓度的铅、镉及铅镉混合溶液,研究铅、镉及铅镉联合对雏鸡红细胞膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性的影响。结果表明:体内及体外红细胞铅、镉及铅镉联合染毒后,红细胞膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性都有不同程度的降低(P0.01或P0.05),且呈明显的时间-剂量效应关系,中浓度联合染毒组与高浓度单独染毒组差异不显著(P0.05)。铅、镉、铅镉联合均对雏鸡红细胞膜有损伤作用,铅镉对红细胞膜的损伤有协同作用。     

敌百虫对体外培养大鼠大脑皮质神经细胞凋亡的影响

为探讨敌百虫对大鼠大脑皮质神经细胞的毒性作用及机理,本研究在建立体外培养新生24h内SD大鼠大脑皮质神经细胞模型的基础上,在细胞培养液中添加0、5、20、80mg/L敌百虫染毒,在染毒后的不同时间测定细胞凋亡率、线粒体膜电位、细胞内[Ca2＋]i、ROS含量和ATP酶的变化。结果显示：①染毒12h,细胞凋亡率明显增加;②染毒12h,各染毒组线粒体膜电位逐渐降低,其中80mg/L组与对照组存在极显著差异（P〈0.01）;③染毒0.5h,各染毒组细胞内[Ca2＋]i显著高于对照组（P〈0.01）;染毒12h,各染毒组细胞内[Ca2＋]i呈下降趋势,但仍显著或极显著高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）;④染毒12h和24h,细胞内ROS水平显著或极显著高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）;⑤染毒12h,细胞Na＋-K＋-ATPase和Ca2＋-Mg2＋-ATPase活性逐渐降低,20、80mg/L组与对照组有极显著差异（P〈0.01）;上述指标的变化呈显著的剂量-效应关系。结果表明,低质量浓度敌百虫暴露可致大鼠大脑皮质神经细胞凋亡率和细胞内ROS含量升高,线粒体膜电位下降,细胞内钙离子超载且ATPase活性降低,提示细胞凋亡在敌百虫所致的大脑皮质神经细胞损伤过程中发挥主导作用。     

隆朋对犬红细胞ATPase活性及其抗氧化功能的影响

将12只健康本地犬,肌肉注射隆朋3.0 mg/kg,在注药前(即对照组)及注药后2、8、24、72、120、168 h静脉采血,分别测定红细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果显示,注射隆朋后红细胞膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase三种酶活性均呈下降趋势,并在8 h均降到最低值,与对照值比较差异显著(P<0.05).注射隆朋后2 h T-AOC、SOD活性显著低于对照组(P<0.05);而MDA的含量在注药后2 h高于对照组且差异极显著(P<0.01),120 h基本恢复正常.本试验结果表明,隆朋对于犬红细胞膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase活性均有不同程度的抑制作用.隆朋对于犬的T-AOC及sOD的活性存在显著影响,并会引起红细胞分泌MDA含量升高,从而导致红细胞膜发生损伤.     

锰对鸡睾丸发育用ATP酶活性的影响

在饲料中添加500、800、1700 mg/kg MnCl2建立亚慢性锰中毒模型,分别在试验30、60、90 d剖杀鸡只取睾丸组织,计算睾丸脏器系数并检测睾丸组织中Na+-K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活性,探讨锰对鸡睾丸脏器系数和ATPase活性的影响.结果表明,与对照组相比除60d低剂量组外,其它各染毒组睾丸脏器系数均呈不同程度降低,Na+-K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活性下降,并呈一定的时间-剂量效应.锰能够降低睾丸组织ATPase活性,抑制睾丸发育.     

镉致大鼠大脑皮质神经细胞凋亡的机理及N-乙酰半胱氨酸的保护作用

对神经细胞用不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)醋酸镉染毒和N-乙酰半胱氨酸(NAC)(100μmol/L)进行保护,通过流式细胞仪检测了细胞凋亡率、[Ca2+]i和活性氧(ROS)水平.结果表明,与对照组相比,各染毒组细胞凋亡率、细胞内[Ca2+]i和ROS水平明显升高,呈剂量-效应关系,除5 μmol/L组ROS水平外,均差异极显著(P<0.01).添加NAC组与相应染毒组比较,神经细胞凋亡率有降低趋势,但差异不显著(P>0.05);10、20μmol/L组细胞内[Ca2+]i和ROS水平显著降低(P<0.05或P<0.01).表明镉可诱导神经细胞凋亡,其机理可能与细胞内Ca2+和ROS水平升高有关,NAC对其有一定的保护作用.     

乐果引起大鼠肝细胞凋亡的机理

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(0、3、10、30、100、300μmol/L),染毒122、4 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,探讨乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响。结果显示,肝细胞染毒12、24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3μmol/L组外,与对照组相比差异显著(P0.05或P0.01),且呈时间-剂量效应。3μmol/L组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;细胞内ROS水平在3~100μmol/L随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300μmol/L组略有下降,除3μmol/L组外,与对照组相比均差异极显著(P0.01);Δψm除24 h 300μmol/L组外均出现持续下降。结果表明,低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和Δψm可能参与了这一过程。     

内毒素对肉鸡肠黏膜线粒体Na+-K+-ATPase酶活性的影响及氨基胍的保护效应

通过动物试验观察内毒素对肉鸡肠黏膜Na+-K+-ATPase活性影响及氨基胍的保护作用.30日龄黄羽肉鸡90只,随机分成内毒素处理组(LPS组,5mg/kg)、氨基胍治疗组(AG+ LPS组)和生理盐水对照组.每组分别在处理后1、3、5、7和9h时间点杀鸡取样.取肠黏膜匀浆,提取线粒体.检测肠黏膜线粒体Na+-K+-ATPase活性.LPS在3、5h时,显著增加了肉鸡肠黏膜线粒体Na+-K+-ATPase活力(P＜0.05),而在7、9h时,肠黏膜线粒体Na上-K+-ATPase活力却降至正常(P＞0.05).AG除了在5h时显著降低了肉鸡肠黏膜Na+-K+-ATPase活力外(P＜0.05),其余时间点均显著增加了肉鸡肠黏膜线粒体Na+-K+-ATPase活力(P＜0.05).由此推论:LPS诱导了线粒体的损伤,引起线粒体内Na+-K+-ATPase活性紊乱,能量代谢障碍,组织机能发生改变;AG对LPS具有明显的拮抗作用,对机体起到保护作用.     

促红细胞生成素在铅镉联合胁迫致雏鸡贫血中的作用

为研究促红细胞生成素(EPO)在铅镉联合胁迫致雏鸡贫血中的作用,选用60只7日龄公雏鸡,平均分为对照组、铅组、镉组和铅镉组,每日经口灌服染毒,分别于第1、3、7天染毒后,检测雏鸡血液学指标和网织红细胞数量,并进行骨髓象的观察及红细胞膜ATP酶活性、红细胞渗透脆性和血清EPO含量的检测。结果表明铅镉单独染毒使雏鸡发生贫血,网织红细胞数量先增加后降低,骨髓象增生先活跃后受抑制,红细胞膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性降低,红细胞渗透脆性增加,血清EPO含量先增加后降低,铅镉联合染毒也表现出上述变化,且较单独染毒组变化明显(P<0.05或P<0.01)。本研究证实铅、镉单独及联合染毒均可引起雏鸡发生贫血,贫血类型主要为再生障碍性和溶血性贫血,且铅与镉存在显著的协同效应;EPO参与了铅镉联合胁迫致雏鸡的贫血作用。     

内毒素致兔红细胞膜ATP酶活性改变及阳离子A的保护作用

为观察内毒素(ET)致兔红细胞膜(ECM)ATP酶(ATPase)活性变化及阳离子A(CA)的保护作用.采用定磷法分别测定正常对照组(Ⅰ组)、内毒素组(Ⅱ组)和阳离子A拮抗组(Ⅲ组)兔ECM的3种ATPase活性.结果除Na+-K+-ATPase、Mg2+-ATPase活性在0.5 h时与Ⅰ组比较无显著差异(P＞0.05)外,Ⅱ组3种ATPase活性在3.0 h内均显著增高(P＜0.01,P＜0.05),而5,7 h全部下降(P＜0.01);与Ⅲ组比较中,Ⅲ组除1 h时Mg2+-ATPase的活性无显著差异(P＞0.05)外,3种ATPase的活性均显著增强(P＜0.05,P＜0.01).结果表明ET可使ECM上3种ATPase活性先增高后降低,而CA对膜ATPase活性有明显保护作用.     

镉对鸡卵巢NO代谢及ATP酶活性的影响

为了探讨镉对鸡卵巢发育的毒性机制,在饲料中分别加入CdCl2140和210mg/kg,建立亚慢性镉中毒模型,分别在试验第20、40、60天取卵巢,检测NO含量,以及NOS、Na+-K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活性。结果显示,卵巢组织NO含量和NOS活性升高,Na+-K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活性降低,且存在时间-剂量效应。表明镉中毒可引起卵巢组织NO代谢紊乱及ATPase活性降低,进而损伤卵巢。     

乐果诱导大鼠肝胞凋亡的分析

为研究乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响,将24只SD大鼠分成对照组和3个染毒组,分别按体质量以0、1、6和30 mg·kg-1的剂量灌服乐果,连续灌服30 d后,观察肝脏组织学和超微结构变化.同时,通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(染毒终浓度分别为0、3、10、30、100和300 μmol·L-1),染毒12、24 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹明123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(△ψm)变化.结果表明,组织学和超微结构检查显示肝细胞脂肪变性、凋亡等.肝细胞染毒12和24 h后,细胞凋亡率明显升高,除3 μmol·L-1组外,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01),且呈时间-剂量效应;3μmol·L-1组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P<0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;细胞内ROS水平在3～100μmol·L-1范围内随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300 μmol·L-1组略有下降,除3μmol·L-1组外,与对照组相比均差异极显著(P<0.01);△ψm除24 h高剂量染毒组(300 μmol·L-1)外均出现持续下降,30～300 μmol·L-1组均小于对照组(P<0.01).本研究表明低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和△ψm可能参与了这一过程.     

氯胺酮对大鼠海马神经元ATP酶活性的影响

本试验研究不同浓度氯胺酮对大鼠海马神经元ATP酶活性的影响,并探讨氯胺酮的中枢麻醉机制。体外培养怀孕16~18 d的胎鼠神经细胞,至第8天直接给予3种不同浓度的氯胺酮,使用超微量ATP酶测定试剂盒,检测胎鼠海马中ATP酶的活力。结果显示,海马中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性均受到不同程度的抑制,并且这种抑制作用的程度具有剂量依赖的趋势。据此推测氯胺酮的麻醉机制可能与抑制海马中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性有关。     

噻拉嗪对山羊不同脑区ATP酶活性的影响

为研究噻拉嗪对山羊不同脑区Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的影响,探讨噻拉嗪麻醉山羊的中枢作用机制。试验将25只山羊随机平均分成对照组、诱导组、麻醉组、恢复Ⅰ组和恢复Ⅱ组共5组。对照组肌肉注射生理盐水10 m L,试验组肌肉注射噻拉嗪12.8 mg/kg体重。10 min后、山羊倒地、翻正反射消失后、翻正反射恢复后和翻正反射恢复后6 h断头取脑组织,采用分光光度法测定山羊各脑区Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果大脑皮质、丘脑的Na+-K+-ATP酶活性分别较对照组降低30.1%和21.9%(P<0.01);大脑皮质、海马、丘脑、小脑和脑干内Ca2+-Mg2+-ATP酶活性分别较对照组降低36.5%、38.6%、35.1%、36.9%和37.9%(P<0.01)。恢复Ⅰ组和恢复Ⅱ组两种ATP酶活性的变化与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。表明噻拉嗪通过大脑皮质和丘脑Na+-K+-ATP酶及大脑皮质、海马、丘脑、小脑和脑干内Ca2+-Mg2+-ATP酶活性作用的改变起麻醉作用。     

不同发育期大通牦牛心肌、骨骼肌线粒体ATP酶活性的测定

对青海省大通牦牛1、30、180日龄及成年组心肌和骨骼肌线粒体Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性进行测定。结果显示,牦牛心肌、骨骼肌线粒体Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性在年龄组间差异均不显著(P>0.05)。表明大通牦牛在生长发育阶段心肌、骨骼肌线粒体ATP酶在物质运输、能量转换及信息传递等方面发挥着稳定的作用,且与年龄之间无明显的线性关系。     

连梅提取液对湿热泻痢仔猪的血清抗氧化指标、胃肠调节酶及十二指肠凋亡基因表达的影响

为了探索连梅提取液对湿热泻痢仔猪的抗氧化功能、胃肠调节酶及十二指肠凋亡基因表达的影响,试验采用了人工模拟高湿高热的环境,给仔猪灌服大肠杆菌辅助致使泻痢,选择泻痢仔猪分为模型组、阳性药物组和连梅提取液高、中、低剂量组,以正常环境下正常饲喂的仔猪作为对照,通过检测仔猪血清抗氧化酶、胃肠调节酶、肝ATP酶以及十二指肠凋亡基因Caspase-3、-8、-9 mRNA转录变化以分析连梅提取液治疗泻痢仔猪的作用机制。结果显示,湿热泻痢仔猪经连梅提取液进行治疗后,血清T-SOD、GSH-Px活力升高,LDH、MDA含量减少,与模型组相比较差异极显著(P0.01);乙酰胆碱酯酶、淀粉酶、肝Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活力较模型组显著增强(P0.05);T3、T4和GH分泌量显著升高(P0.05),GC分泌量显著降低(P0.05);同时各药物组仔猪十二指肠凋亡基因得到了不同程度的恢复,Caspase-8 mRNA表达量只有中剂量组较模型组极显著降低至2.62倍(P0.01);Caspase-3mRNA表达中,高、中剂量组分别降至正常组的5.82、3.29倍,较模型组差异显著(P0.05)或极显著(P0.01);Caspase-9mRNA表达量均显著降低(P0.05),且降低量与药物浓度成正比。由此可知,连梅提取液可以通过增强湿热泻痢仔猪抗氧化损伤能力,改善胃肠道的消化吸收,促进生长激素的分泌和降低凋亡基因的表达而达到治疗仔猪湿热泻痢。     

钙离子超载在镉致大鼠肝细胞凋亡中的作用

拟探讨Ca2+超载在镉诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用。采用两步灌流法获得大鼠肝细胞,经过24 h培养,用醋酸镉、醋酸镉与Bapta-AM共同处理肝细胞。用MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态和凋亡,流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度、ROS生成和ΔΨm变化。结果表明,随着镉剂量的增加和作用时间的延长,细胞变形,坏死细胞和凋亡细胞增多,镉可极显著提高细胞内Ca2+浓度和ROS生成量(P<0.01),极显著降低线粒体膜电位(P<0.01),Bapta-AM可显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低镉的毒性。研究结果提示Ca2+超载在镉致肝细胞凋亡中发挥重要作用。     

胰高血糖素样肽-2对28日龄断奶仔猪肠上皮细胞的保护及修复效应研究

本研究旨在探讨胰高血糖素样肽-2(Glucagon-like peptide-2,GLP-2)对28日龄断奶仔猪的肠黏膜上皮细胞(IEC)损伤后增殖、代谢、凋亡的影响及可能的作用机理.试验首先采用单因子设计,分别用1.2和2.4 mg·mL-1的β-伴球蛋白对原代培养的断奶仔猪肠上皮细胞进行攻毒,通过测定细胞增殖、代谢及凋亡的变化而建立细胞损伤模型;然后再采用2×3因子设计,考察添加不同浓度的GLP-2(1×10-9、1×10-8、1×10-7 mol·L-1)对致敏的肠上皮细胞的影响.结果表明,使用β-伴球蛋白攻毒,细胞MTT OD值显著降低(P<0.05),细胞蛋白质沉积量和细胞总蛋白含量极显著降低(P<0.01),胞外LDH活力极显著增加(P<0.01),Na+-K+-ATP酶活力显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)降低,半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)酶活力极显著(P<0.01)升高;使用β-伴球蛋白攻毒的同时添加不同浓度的GLP-2,细胞MTT OD值、细胞蛋白质沉积量、细胞总蛋白含量和Na+-K+-ATP酶活力均显著或极显著(P<0.05或P<0.01)升高,且随着GLP-2浓度的增加而升高,而胞外LDH活力则随着GLP-2浓度的增加而逐渐下降(P<0.05或P<0.01),caspase-3酶活力极显著(P<0.01)降低.提示β-伴球蛋白对断奶仔猪小肠上皮细胞的增殖和细胞完整性有不利影响,而GLP-2能够减轻或者避免β-伴球蛋白对断奶仔猪小肠上皮细胞的不利影响,这种效应可能是通过调节细胞Na+-K+-ATP酶、caspase-3等的活力变化并影响细胞代谢而实现.     

荷斯坦牛血红细胞Na~+-K~+-ATP酶活力与其耐热性的相关性研究

[目的]为探讨Na+-K+-ATP酶在荷斯坦牛热应激过程中的作用.[方法]本研究比较测定了329头荷斯坦牛在非热应激期和热应激期的体温、红细胞K+和红细胞Na+-K+-ATP酶活力的变化.[结果]显示,试验牛群红细胞Na+-K+-ATP酶活力呈正态分布;不同胎次、产犊季节、泌乳期、场次牛Na+-K+-ATP酶活力差异不显著(P>0.05);不同性别牛Na+-K+-ATP酶活力差异极显著(P<0.01).在热应激期,同一泌乳期牛红细胞Na+-K+-ATP酶活力与产奶量下降率成负相关;荷斯坦牛的体温明显升高,产奶量明显下降,红细胞K+无显著变化,红细胞Na+-K+-ATP酶活力明显下降,与非热应激期相比只有红细胞K+差异不显著(P>0.05),其余都差异极显著(P<0.01);红细胞Na+-K+-ATP酶与体温成负相关,与产奶量成正相关,与红细胞K+的相关性不显著.[结论]在热应激期,荷斯坦牛红细胞Na+-K+-ATP酶活力与耐热性成正相关,红细胞Na+-K+-ATP酶活力高的荷斯坦牛,耐热性好.     

盐胁迫对芨芨草苗期质膜H~+-ATP酶活性及5′-核苷酸酶活性的影响

以芨芨草(Achnatherum splendens)为试验材料,在不同浓度NaCl和Na2SO4胁迫下,对芨芨草叶片与根系的质膜H+-ATPase和5′-AMPase的活性进行测定。结果表明:在NaCl和Na2SO4胁迫下,芨芨草根系的质膜H+-ATPase活性呈"先升后降"的趋势,当浓度小于300mmol/L时,根系的质膜H+-ATPase和5′-AMPase活性均高于对照。同一盐胁迫下,芨芨草根系中质膜H+-ATPase活性和5′-核苷酸酶活性均显著高于叶片。在Na2SO4胁迫下,芨芨草根系和叶片的质膜H+-ATPase和5′-AMPase活性分别显著高于相同浓度的NaCl胁迫组,芨芨草在Na2SO4胁迫下有更强的抗性。