亚硝基谷胱甘肽对孢子化卵囊、孢子囊活力及致病力的影响

以亚硝基谷胱甘肽(S-nitroso-glutathione,GSNO)处理柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)卵囊和孢子囊,通过检测子孢子的脱囊情况以及卵囊和孢子囊的致病力来探讨GSNO对E.tenella卵囊和孢子囊活力的影响。体外脱囊试验结果表明,GSNO处理孢子囊的脱囊率只有1.01%~1.48%,而GSNO处理的孢子化卵囊的脱囊率为45.73%~63.90%。接种试验表明,各接种组鸡均发生了明显的临床球虫病,但与攻毒对照组相比,只有GSNO处理的孢子囊组鸡的发病情况有所减轻,这说明GSNO能明显抑制孢子囊的脱囊,并能在一定程度上减轻其致病力,而对孢子化卵囊无明显抑制作用。     

阳光照射对球虫卵囊孢子化率的影响

为了解阳光照射对球虫卵囊孢子化率的影响,将未孢子化卵囊分别在阳光下照射2小时、4小时、6小时后,放在27～28℃恒温箱中培养,于第3天和第5天进行显微镜观察计数球虫卵囊孢子化率。试验结果表明,阳光照射对球虫卵囊的孢子化率有着明显抑制作用,随着光照时间的延长,球虫卵囊的孢子化率呈下降趋势。说明鸡球虫未孢子化卵囊对高温干燥的环境抵抗力差,阳光照射3～4小时,孢子化率明显下降12.67%￣26.00%。     

判断消毒剂对鸡球虫孢子化卵囊抑杀效果的新方法——脱囊抑制试验

判断消毒剂抑杀鸡球虫孢子化卵囊的效果,一般要通过鸡体试验,即观察经消毒剂作用过的卵囊对健康鸡的致病力,以病变值、卵囊值、抗球虫指数等判定效果［１］。鸡体试验操作繁琐,试验时间长,且不能确定药物抑杀的百分率。我们参考文献［２,３］介绍的脱囊技术,总结出...     

环境因素对球虫卵囊孢子化的影响

探讨环境因素对球虫卵囊孢子化的影响,为切断鸡球虫病的感染途径提供依据。本实验将未孢子化球虫卵囊分别置于高温干燥、高温潮湿、室温三个不同环境中处理后,再按常规方法培养,并测其孢子化率。结果表明:80℃高温干燥环境中放置15 min以上,80℃高温潮湿环境中放置30 min以上,室温环境中放置1 d以上,卵囊均已完全丧失孢子化能力。     

环境因素对球虫卯囊孢子化的影响

探讨环境因素对球虫卵囊孢子化的影响,为切断鸡球虫病的感染途径提供依据。本实验将未孢子化球虫卵囊分别置于高温干燥、高温潮湿、室温三个不同环境中处理后,再按常规方法培养,并测其孢子化率。结果表明:80℃高温干燥环境中放置15 min以上,80℃高温潮湿环境中放置30 min以上,室温环境中放置1 d以上,卵囊均已完全丧失孢子化能力。     

猪囊等孢球虫孢子化与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质组学分析

通过比较猪囊等孢球虫孢子化卵囊与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质,以期从蛋白质组学角度研究其发育机制,并为此类球虫的发育机制及该病的免疫预防或化学防治找到新的“关键”分子奠定基础。首先建立哺乳仔猪的猪囊等孢球虫感染模型,然后运用iTRAQ技术,结合LC-MS/MS分析差异表达蛋白质,并采用荧光定量PCR验证iTRAQ数据。结果共鉴定出174个蛋白,差异表达蛋白40个,其中38个蛋白上调表达,2个蛋白下调表达,差异蛋白主要涉及代谢、抗生素的生物合成、次生代谢产物的生物合成和糖酵解/糖异生过程等通路。研究结果为阐明猪囊等孢球虫孢子化发育机制以及发现新的生物标志物提供参考。     

毒害艾美耳球虫卵囊先孢子化后贮存和先贮存后孢子化对其致病力的影响

新鲜收集的毒害艾美耳(Eimeria necatrix)球虫卵囊，一部分未孢子化即贮存在4℃冰箱，另一部分在28℃恒温水浴根荡孢子化48小时后再贮存在4DC冰箱。2个月后将先贮存的未孢子化卵囊在上述同等条件下进行孢子化48小时，然后两部分卵囊作致病力比较试验。结果表明，先贮存后孢子化卵囊的孢子化率和致病力都明显下降，先孢子化再贮存的卵囊存放2个月后其致病力各项指标也略有下降。     

温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响

为探讨温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响,试验以7%氨水作为对照组,设置1:50、1:100、1:150的球虫消杀剂溶液组,同时设置生理盐水对照组.各处理液分别在4℃和20℃下与柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊在体外相互作用6、12和24h,然后用2.5%重铬酸钾溶液培养处理后的球虫卵囊,观察其孢子化率.结果表明:1:50、1:100、1:150球虫消杀剂在4℃分别处理6、12和24h的卵囊孢子化率均极显著(P<0.01)高于20℃下的对应处理组.球虫消杀剂在20℃下有更好的抑制球虫卵囊孢子化的作用.     

堆型艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫卵囊最短孢子发育时间的测定

将收集到的新排出的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)与柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)卵囊于29℃静态系统中孢化。以30min为间隔，对卵囊孢子发育的4个阶段在显微镜下进行观察。以1h为间隔，用发育中的卵囊连续接种无球虫鸡，以确定最短孢子发育时间(MST)。对影响孢子发育的外部因素进行了初步探讨。用堆型艾美耳球虫比较不同卵囊浓度，不同悬液深度在卵囊孢化过程中第20h时子孢子形成的卵囊百分率。E.acervulina与E.tenella的MST分别为11b与18b。卵囊浓度和悬液深度与孢子发育时间呈明显反比关系。     

毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的分离与纯化

用毒害艾美耳球虫孢子化卵囊接种50只15日龄无球虫感染的雏鸡,感染后第6~12天,每隔12 h收集1次粪便,按常规方法分离卵囊。未孢子化卵囊经次氯酸钠溶液处理后,用1.1 mol/L蔗糖溶液漂浮法纯化卵囊。采用玻璃珠涡旋法破碎卵囊壁,最后用孔径10.0μm的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜过滤获得纯化的卵囊壁。研究结果为进一步研究毒害艾美耳球虫卵囊壁的结构及其蛋白组成奠定了基础。     

鼠隐孢子虫卵囊及子孢子的纯化

应用不连续蔗糖密度梯度离心法，对犊牛粪便中的鼠隐孢子虫卵囊进行了提取，经过两次漂浮和一次不连续蔗糖密度梯度离心，得到纯净的卵囊，其中含有极少量的杂质，不含其他微生物。卵囊的回收率为３７％。纯化的卵囊脱囊后，经过一次不连续蔗糖密度梯度离心，得到很纯的子孢子。子孢子的回收率为４７．６％。纯化的卵囊及于孢子可用于隐孢子虫的核酸分析、生物化学、免疫学及细胞培养等方面的研究。该法具有简便、快速、大量分离卵囊的优点。     

次氯酸钠对柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化的影响研究

给14日龄海兰鸡雏接种E.tenella杂交F2株（本实验室培育），7d后扑杀，刮取盲肠卵囊制成卵囊悬浊液。用不同浓度次氯酸钠（含活性氯不低于7．5％）分别处理5min、10min、15min、20min后，离心洗涤并进行卵囊计数，加2．5％的重铬酸钾，28℃环境下孢子化。于60h取样检查其孢子化率。结果表明，高浓度长时间的次氯酸钠处理时E.tenella球虫卵囊孢子化率有显著影响（P〈0．05）。     

影响球虫病防治效果的各种因素

影响球虫病防治效果的因素主要包括： 1环境因素与饲养方式 　　1.1环境温、湿度 　　球虫病病鸡肠道中产生的卵囊随粪便排到外界环境中，这种内含原生质团的新鲜卵囊称为未孢子化卵囊，它是没有致病力的。当外界环境温度在 25～ 32° C（最适宜温度为 29° C左右）、相对湿度为 70％以上，又有充足的氧气时，未孢子化卵囊即可正常发育为孢子化卵囊。艾美耳属球虫孢子化卵囊中含 4个孢子，每个孢子内含 2个子孢子，即共有 8个子孢子。只有孢子化卵囊才具有侵袭力。我国南方梅雨季节因具备上述温、湿度条件而成为球虫病高发季节，故民间有…     

鸦胆子对鸡球虫卵囊孢子化率及子孢子的直接杀伤作用

自苦木科植物鸦胆子中提取了鸦胆子油(BJ-PE)、鸦胆子乙醇萃取物(BJ-EE)和鸦胆子水提物(BJ-WE),通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)检测了鸦胆子油的化学成分,并探讨了鸦胆子提取物对鸡球虫卵囊孢子化的影响及对子孢子的直接杀伤作用。结果显示,通过GC-MS法鉴定出鸦胆子油中含有32种化合物,主要为脂肪酸、脂肪醇类化合物及少量芳香族化合物。鸡球虫卵囊经BJ-EE、BJ-WE和Bruceine-D处理后,未孢子化率升高,其中8g/L BJ-WE处理组中未孢子化卵囊的数量显著高于对照组(P0.05)。子孢子经BJ-EE和Bruceine-D处理后,数量显著减少,形态发生明显变化,表现出变短、变圆的趋势。透射电镜观察发现,子孢子或萎缩成小球,外膜轮廓模糊,淀粉粒减少;或细胞膜破裂,胞内细胞器排列混乱;或呈现哑铃型,结构扭曲。综上所述,鸦胆子提取物对鸡球虫卵囊的孢子化具有一定的抑制作用,对子孢子具有较强的直接杀伤作用,为抗球虫药物的研发提供了新选择。     

球虫病疫苗中卵囊活力测定的重要性

要使免疫程序获得成功,即产生强健的免疫力,并且对生产性能的影响尽可能地小,就要根据活孢子化卵囊的数量来制作质量稳定的疫苗。在原始卵囊群体中测出无活力卵囊所占的比例,才能得到准确的活孢子化卵囊数。     

用消毒药抑杀鸡球虫卵囊的试验

本试验按照安全、有效、经济、来源容易的原则，从时鸡球早卵囊有一定抑杀作用的三类消毒药物（酸类、消毒剂类、表面活性剂类）中，筛选了17组不同药物和浓度的搭配组合，设计了3个试验，抑制鸡球中新鲜卵囊孢子化试验；抑杀孢子化卵囊试验；新鲜 囊和孢子化卵囊经药物处理后感染小鼠试验。通过试验，4、7、8、11、13号药物组合对新鲜球虫卵囊的抑杀率是100％，其中7、13号药物组合在抑杀孢子化试验中孢子化率和感染小鸡试验中的感染均为阴性，证明了7、13号药物地鸡球虫卵囊有很好的体外抑杀作用，可作为环境消毒药的首选物在生产上推广。     

不同培养方式对鸡球虫卵囊孢子化率的影响

兑水离心洗净早熟艾美耳球虫(Eimeria praecox)保存虫株,经口感染雏鸡增殖卵囊,收集、分离刚排出粪便中的卵囊,以不同培养液、培养液深度、卵囊密度和3种状态的4种方式(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)进行卵囊培养试验。其结果方式Ⅰ:卵囊平均孢子化率以2.5%重铬酸钾组(91.98%)为最高,以鸡粪汁组(5.18%)为最低并与其他2组存在极显著差异(P<0.01);方式Ⅱ:最浅组至最深组卵囊平均孢子化率依次降低,分别为90.15%、89.25%和86.70%,组间差异不显著(P>0.05);方式Ⅲ:卵囊平均孢子化率以密度最小组(90.68%)为最高,以密度最大组(47.28%)为最低,密度最小组与其他2组存在极显著差异(P<0.01);方式Ⅳ:吹吸、静置、隔氧状态下,卵囊平均孢子化率依次降低,分别为90.65%、88.89%、86.94%,组间差异不显著(P>0.05);以2.5%重铬酸钾液、1×106/3 mL的卵囊密度、0.5 mm的液深且经常吹吸培养卵囊,卵囊孢子化效果最好。     

妥曲珠利对柔嫩艾美耳球虫作用峰期的初步研究

E．tenella球虫又称盲肠球虫，主要侵害鸡的盲肠，一般感染15～35日龄的雏鸡。一旦鸡吞食了E．tenella球虫卵囊，由于球虫的高繁殖性能，随之有众多的卵囊排出并污染环境，导致球虫病暴发。E．tenella球虫发育过程包括3个生殖阶段，孢子生殖在外界环境中进行，其它两种生殖阶段在鸡体内完成。随鸡粪便排到外界环境中的球虫卵囊称为未孢子化卵囊，不具有感染力。     

不同日龄雏鸡对柔嫩艾美球虫早熟株卵囊的易感性及免疫力

对１,７和２５日龄鸡分别感染１０００个早熟柔嫩艾美球虫孢子化卵囊、感染１２０ｈ后,每２４ｈ收集粪便１次,进行卵脏数,连续７ｄ,３种日龄鸡排卵囊总数分别为４６０．９,８０２．０和１４１７．７万个／只。感染后１４ｄ对７日龄鸡的免疫组及相对应的２个不免疫对照组每只鸡攻击１００个柔嫩艾美球虫亲本株孢子化卵囊。攻毒１４４ｈ后,每２４ｈ收集粪便１次,进行卵囊计数,连续５ｄ,各组鸡的囊总量分别为４１．４,５．８     

球虫免疫鸡群饲料添加剂的选用

球虫感染属于自限性感染，感染后机体就会产生对同种球虫的免疫力。球虫免疫就是根据这一原理采用少量疫苗活卵囊通过口服途径感染鸡只，而使鸡只获得对同种球虫的保护力，小剂量感染不会引起临床疾病，而且对肠道显微结构的破坏也不大。具体讲，疫苗活卵囊进入鸡消化道经2次脱囊释放出孢子，孢子侵入肠上皮细胞经过孢子生殖、裂殖生殖和配子生殖3个发育阶段形成大量未孢子化的卵囊随粪便排出。在适宜的外界环境中，这些卵囊发育成具感染力的孢子化卵囊，鸡只再从垫料中摄入这些卵囊，从而开始新一轮的增殖发育，这样感染强度与免疫力相长，…