同步与异步接毒法在鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗生产中的比较

在应用鸡胚原代成纤维细胞（ＣＥＦ）培养鸡辣鹌鹑化弱毒（简称鹌系毒）细胞苗生产中,试验在制备ＣＥＦ同时接入种毒（简称同步法）,与细胞形成单层后再接毒（简称异步法）,两种方法相比较,结果同步法缩短了培养时间,简化了生产工艺。     

不同接毒方法对猪圆环病毒2型增殖的影响

本试验对比了不同的接毒方法,观察猪圆环病毒2型的繁殖情况.试验分为同步接毒(A组、B组)和异步接毒(C组、D组):同步接毒A组为在消化分装好的细胞悬液中同步接入5%(V/V)的PCV2种毒,B组为在消化分装好的细胞悬液中同步接入3%(V/V)的PCV2种毒,24 h后再接种2%种毒;异步接毒C组为在生长良好、 培养24 h的单层细胞中接种5%(V/V)的PCV2种毒,D组为在生长良好、培养48 h的PK15单层细胞中接种5%(V/V)的PCV2种毒.四组均在接种后培养72 h收获,进行病毒含量检测.试验结果显示:A组的病毒含量为107.0~7.25TCID50/mL,B组病毒含量为106.75~7.0TCID50/mL,C组的病毒含量为106.4~6.5TCID50/mL,D组的病毒含量为106.25~6.5TCID50/mL.试验结果表明,采用同步接毒法的病毒含量明显高于异步接毒法,在细胞悬液中同步一次性接入5%种毒,病毒的增殖量最高.     

鸡痘鹌鹑化弱毒活疫苗生产工艺改进试验

优化鸡胚成纤维细胞(CEF)培养鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗的生产工艺中,采用同步接毒法即在制备鸡胚成纤维细胞时同时接毒和异步接毒法即鸡胚成纤维细胞形成单层以后接毒,两种方法进行对比。结果以同步接毒法可以降低生产成本,缩短细胞培养的时间,简化工艺。     

鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗接毒培养工艺探索

在鸡胚成纤维细胞(CEF)培养鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗的工艺中,采用同步接毒工艺,通过调整单位细胞浓度和单位病毒含量,以细胞单层形成时间和收获时间分别为24 h和96 h为标准,确定细胞浓度和接毒浓度分别为1.2×106 ～1.5×106个/mL和102 ～103 EID50/mL较为合适.     

鸡传染性法氏囊病灭活疫苗接毒方法改进试验

利用鸡胚成纤维细胞生产鸡传染性法氏囊病(X株)灭活疫苗的过程中,生产规程要求在接毒时一般采用弃去原生长液,接种病毒后37℃吸附1 h,再加入维持液进行病毒增殖的方法。本试验通过直接接毒的方法进行病毒繁殖,并与吸附接毒法对比。结果表明,直接接毒法不论是抗原收获的时间还是病毒含量(TCID50),与传统吸附接毒法都无显著差异,且按直接接毒法生产的疫苗安全性检验全部合格,说明可用不换液直接接毒来进行(X株)灭活苗的生产。     

不同接毒方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖效果比较

通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染Marc-145细胞4种不同接毒方法的比较研究,筛选出一种在规模化生产中既能保证毒价,又能减少工艺流程,提高工作效率,降低污染几率及生产成本的接种方法。结果表明,与其他方法相比,同步接毒法效果最佳,不仅毒价最高,而且繁殖毒液时间缩短,减轻了工作量,节省生产成本。     

猪细小病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法检测不同接毒条件对病毒增殖效果的影响

为提高细小病毒（PPV）细胞培养的滴度,本试验通过对猪细小病毒（PPV）感染ST细胞接毒工艺各步骤的比较研究．从不同接毒方式、细胞接种量、病毒感作时间以及接种浓度等方面进行分析,利用猪细小病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法对病毒滴度进行检测。结果表明：ST细胞覆盖率接近单层时接毒,采用分步法接毒,以10^3倍稀释病毒接种,接种病毒后感作2h,将接毒后细胞维持液中血清浓度设为2％这5个方面的接毒工艺可提高PPV细胞培养的病毒滴度。     

鸡痘弱毒细胞苗接毒培养工艺探索

鸡痘是由鸡痘病毒(FPV)引起一种急性、高度接触性传染病。防治鸡痘除加强饲养管理及搞好卫生和消毒工作外。最可靠的方法是及时接种疫苗。目前。我国使用的国产鸡痘疫苗有两种。一种为细胞苗。另一种为组织苗。细胞苗以产量大、生产成本低被各生产厂家广泛应用。研究通过不同时间接人毒种来研究接毒的最佳时间，以获得优质高效的产品。为企业大规模生产提供依据。     

鸡全胚成纤维细胞在鸡痘细胞活疫苗生产中的应用

采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样).鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗均可引起鸡胚绒毛尿囊膜水肿、增厚或痘斑,但鸡痘细胞苗产生痘斑数量明显高于鸡痘组织苗.鸡体刺种结果表明,鸡痘细胞苗诱发的免疫反应(发痘)好于鸡痘组织苗;与常规法相比,全胚成纤维单层细胞制备方法可提高鸡胚利用率2倍以上.全胚法也可应用于制备其他鸡成纤维细胞疫苗.     

IBDV超强毒GX8/99株的细胞适应毒和鸡体传代毒的致病性和VP5基因的比较

传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Diseas Virus,IBDV)的超强毒株GX8/99经在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续盲传23代后,细胞适应毒株GXC23时鸡的致病性显著减弱,对4～6周龄SPF鸡的致死率从85%～90%减为0～5%.GXC23在96孔细胞培养板上经2次无限稀释法后得到3个克隆病毒.经SPF鸡回传20代后,相应的毒株GX-2820、GX-4820、GX-5820对SPF鸡的致死率仍维持在0～5%.序列比较表明,GX8/99在传代过程中,其细胞适应毒GXC23有8个碱基突变,其中5个碱基突变导致了氨基酸改变.bp#2 T→C突变,导致传代毒ORF中的起始编码子后移了4个氨基酸.而3个克隆化病毒回鸡20代后致病性不变,这几个位点也保持不变,且与3个疫苗株完全一致.进一步分析表明,有4个超强毒株和4个强毒株的VP5基因的5个位点与GX8/99原始毒相同,而另3个超强毒及6个强毒株与细胞适应毒GXC23一致.这些结果表明,超强毒GX8/99在细胞传代过程中VP5基因上5个氨基酸的变异主要与适应细胞培养相关而与致病性无关.