猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的研制与应用

为制备猪圆环病毒2型(porcine circovirus serotype2,PCV-2)高免卵黄抗体,并对其治疗效果进行研究,通过自制猪圆环病毒2型(PCV-2)灭活苗,免疫SPF产蛋鸡,收集高免蛋,制备PCV-2高免卵黄抗体,对高免卵黄抗体进行无菌检验、活体动物安全性检测,用琼脂扩散方法进行效价检验和人工感染保育猪治疗试验,并将其应用于临床实践,观察其治疗效果。结果抗体效价达到1∶64;人工感染治疗试验治愈率达100%;临床试验治愈率为96%,应用效果良好。     

母鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体的检测及其相关性分析

为了解母鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体检测结果的相关性,试验采集了新城疫疫苗免疫母鸽的血液和卵黄,通过血凝抑制试验检测了新城疫病毒的抗体,利用GraphPad Prism软件中的Spearman Analysis分析了血清抗体效价和卵黄抗体效价的相关性。结果表明:绝大多数样品提取的卵黄液抗体效价低于血清抗体效价,而绝大多数样品的卵黄原液抗体效价高于血清抗体效价。血清抗体效价、提取的卵黄液抗体效价与卵黄原液抗体效价两两之间呈显著或极显著正相关(P0.05或P0.01),提取的卵黄液抗体效价与血清抗体效价之间的相关系数最高。说明鸽新城疫病毒血清抗体和卵黄抗体有明显的相关性,提取的卵黄液可代替血清用于母鸽新城疫病毒抗体的检测。     

猪瘟-猪蓝耳病-猪圆环2型三联高免血清的制备

进行了制备猪瘟-猪蓝耳病-猪圆环2型三联高免血清的试验。试验采用三种疫苗对试验牛只进行多次免疫后,对其进行颈静脉采血和分离血清,并对所制备的高免血清进行无菌检验和安全性试验,通过间接ELSIA检测血清中的猪瘟、猪蓝耳、猪圆环病毒三种抗体的效价。结果显示,猪瘟、猪蓝耳、猪圆环病毒抗体效价分别达到1：2056、1：1280...     

猪圆环病毒2型和猪瘟病毒抗体检测与分析

目的检测临汾市某县猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)的抗体水平.方法分别从该县的企业、散户、大户的猪只中采集血清186份,应用ELISA方法检测抗体水平.结果 PCV2抗体阳性率平均为83.33%,CSFV抗体阳性率平均为54.83%.结论该县猪圆环病毒2型感染严重,猪瘟疫苗免疫抗体水平偏低,与猪瘟疫苗使用不当、猪圆环病毒2型感染存在一定关系.     

鄂西北地区猪圆环病毒2型抗体水平监测

应用ELISA方法对鄂西北地区35家标准化猪场282份血清进行猪圆环病毒2型抗体水平检测,间接监测猪圆环病毒2型感染情况。试验结果表明：送检血清中阳性者为207份,总体阳性率73.4％,阳性ELISA值正态分布于0.15~0.6,其中0.3~0.4分布最多,占阳性数的25.1％;送检猪场中未感染猪圆环病毒2型者占17.1％,感染猪圆环病毒2型的猪场占82.9％;通过对发病猪进行临床症状观察和病理剖检发现具有典型猪圆环病毒2型特征。      

圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的初步研制及应用

为快速检测猪群中猪圆环病毒2型抗体,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记纯化的猪圆环病毒Cap蛋白和兔IgG,包被至玻璃纤维膜上制备金标垫,将纯化抗原和羊抗兔IgG分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了检测猪圆环病毒2型抗体的胶体金免疫层析方法并组装检测卡。结果显示,组装的检测卡只与圆环病毒阳性血清发生特异性反应,阳性血清稀释10倍后仍然能够检出。用此检测卡与商品化ELISA试剂盒对100份临床血清进行平行检测,阳性率分别为89%和93%,两种方法符合率在95%以上。该方法操作简便、特异性强,可广泛应用于基层,也为圆环病毒疫苗效果评价提供了良好的试剂选择。     

猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法的建立

为了更加快速灵敏地检测血清中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)抗体的水平,我们通过优化反应条件建立了快速检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果显示,本研究研制的试剂盒检测3份PCV2抗体阳性血清的阳性滴度为1∶12 800～1∶25 600,而韩国JBT PCV2试剂盒检测的阳性滴度为1∶3200～1∶6400;对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪口蹄疫病毒等10种其他病原体的20份阳性血清的检测结果均为阴性,表明本研究研制的试剂盒具有良好的特异性;批内重复性试验变异系数(C.V%)为2.26%～7.60%,批间重复试验的变异系数(C.V%)为1.67%～6.41%,变异系数均小于10%,呈现良好的可重复性。因此,我们成功建立了敏感性高、特异性强及重复性好的猪圆环病毒2型抗体间接ELISA检测方法。     

大肠杆菌不同佐剂灭活苗血清抗体与卵黄抗体消长规律的研究

笔者用分离得到的猪源致病性大肠杆菌制成灭活疫苗免疫产蛋鸡,定期检测蛋鸡血清和卵黄的抗体效价。试验结果表明,免疫蛋鸡血清中和卵黄中抗体的消长规律相似,同一时期的血清抗体比卵黄抗体较高。同时比较3种不同佐剂疫苗产生的效果,结果表明,氟氏佐剂和氢氧化铝佐剂疫苗产生的抗体效价较白油佐剂疫苗产生的抗体效价高,但氟氏佐剂疫苗和白油佐剂疫苗较氢氧化铝佐剂疫苗抗体持续时间长。综合比较,氟氏佐剂较其他2种佐剂产生的抗体效价高、持续时间长。     

规模猪场主要疫病抗体水平检测及分析

2010年10月,笔者在宁海县某规模化猪场对种猪、肉猪群随机抽检血清样品179份,进行了猪瘟（HC）、口蹄疫（FMD）、蓝耳病（PRRS）和猪圆环病毒2型（PCV2）等疫病的抗体检测,现将检测结果报告如下。 1材料和方法 1．1检测试剂盒猪瘟正向血凝诊断试剂、猪口蹄疫0型正向血凝诊断试剂均购自中国农科院兰州兽医研究所;蓝耳病抗体检测试剂盒为法国LSI公司生产;猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒为武汉科前动物生物制品有限责任公司生产。     

新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体检测与分析

为了解2.019年新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体水平,本试验采用间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)法对采自5家规模化猪场不同日龄猪的338份血清样品进行猪圆环病毒2型抗体检测与分析。结果显示,猪圆环病毒2型抗体平均阳性率为70.71%(239/338),刚好达到国家规定标准(70%),平均S/P值为1.69,各猪场间猪圆环病毒2型抗体水平差异显著。各日龄段猪群抗体平均阳性率在26%～92%之间,存在一定差异。保育猪平均阳性率最低(26.56%),且低于国家规定标准(70%),只有经产母猪、后备猪和育肥猪的猪群抗体阳性率在70%以上。表明在新疆地区5个规模化化猪场中,有3个猪场的猪圆环病毒2型抗体阳性率未能达到国家标准(70%),需要制定更加合理的免疫程序;哺乳仔猪、保育猪和种公猪平均阳性率低于国家标准,需加强免疫防控。该结果在一定程度上可为新疆部分地区猪圆环病毒2型防疫工作提供一定的参考。     

2020年新疆地区规模化猪场猪PCV2抗体检测与分析

为了解新疆地区2020年规模化猪场猪圆环病毒2型的免疫抗体水平,选择新疆地区6个规模化猪场,针对不同日龄段的猪采集血清样品333份,采用猪圆环病毒2型ELISA抗体检测方法进行抗体检测分析。结果发现,2020年新疆地区规模化猪场猪圆环病毒2型平均抗体阳性率为77.78%（259/333）,平均抗体阳性率符合国家标准。但各猪场免疫效果参差不齐,抗体阳性率最高的为A场,阳性率达100.00%;阳性率最低的为C场,仅48.78%,低于（70%）的国家标准。不同日龄段的猪抗体水平也存在一定的差异,抗体阳性率最高为种公猪,达96.30%;而保育阶段猪抗体水平最低,仅有47.92%,低于国家标准。     

猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型（PCV1）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20 ℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。     

鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备

本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100.     

猪繁殖与呼吸综合症与猪圆环病毒-2型对猪瘟抗体的影响

<正>在2006～2008年期间,运用ELISA方法,对猪瘟抗体检测的血清进行了对猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒-2型的抗体水平的监测,以期了解育肥猪群中繁殖与呼吸综合症和猪圆环病毒-2型的感染情况,3种病毒抗体水平之间的关系,寻求更好地解决实际问题的措施。     

云南某中小规模猪场主要疫病的抗体监测

为了掌握云南楚雄地区某中小规模猪场的疫苗接种情况及免疫效果，及时发现存在的问题和隐患，采集云南省某规模化养猪场100头母猪的血清样品，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对主要疫病的免疫抗体水平进行检测。结果显示：该猪场猪瘟病毒抗体阳性率为75%，猪圆环病毒2型抗体阳性率为100%，猪伪狂犬病毒gB抗体阳性率为100%，猪支原体抗体阳性率为75%。猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪支原体、猪伪狂犬病毒gB的抗体水平均高于国家标准（>70%），免疫抗体水平均合格。     

鸡抗大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体变化规律研究

用猪源大肠杆菌四价(K88、K99、987P、F41)灭活疫苗免疫蛋鸡,微量凝集法定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明,血清抗体比卵黄抗体出现早,免疫蛋鸡血清中和卵黄中4种抗体的消长规律基本相似,但不同抗体水平之间存在明显的差异,整个试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。     

母源抗体对不同猪圆环病毒2型疫苗的免疫效果影响

为了田间评估母源抗体对猪圆环病毒2型疫苗的影响,将14日龄仔猪分成8组分别进行试验,接种四种不同类型的市售猪圆环病毒2型疫苗,应用ELISA检测血清抗体等方法评价免疫效果。结果为:14日龄仔猪猪圆环疫苗抗体的S/P值为1.98～2.08,经F检验各组间无显著性差异;38和68日龄为1.67～1.8和0.99～1.24;134日龄为1.4～2.0,经检验各疫苗免疫组间无显著差异。试验表明仔猪在较高圆环母源抗体下免疫不同类型猪圆环病毒2型疫苗后至120日龄内均能保持较高的抗体水平。但不同疫苗的成活率和增重效果则有所差异。     

猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验（Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）,用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%（52/56）,对照组猪血清抗体检测均为阴性（33/33）。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。     

猪流行性腹泻病毒间接ELISA抗体检测方法建立与应用

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是目前引起我国猪急性肠炎并水样腹泻的重要病原之一,但尚无商品化病毒血清抗体检测试剂盒。本研究以纯化的PEDV为包被抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了间接ELISA抗体检测方法,其反应条件为:抗原最佳包被浓度为3μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶100,包被时间为37℃作用2 h,1.5%BSA 37℃封闭3 h,二抗1∶10 000稀释,37℃作用30 min,抗体临界值为OD450nm≥0.306判为阳性,OD450nm≤0.268判为阴性,介于二者之间为可疑。该方法检测6份已知PEDV阳性血清效价为1∶3 200,检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病毒和口蹄疫病毒血清抗体均为阴性,批间和批内重复试验变异系数2.5%～8.3%,对江苏、上海、浙江、安徽地区587份猪血清样品进行检测,抗体阳性率达56.76%,证明该方法具有较好敏感性、特异性和重复性,可用于PEDV抗体检测和流行病学调查。     

抗猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒卵黄抗体制备及其临床应用研究

本研究旨在制备猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒高免卵黄抗体,研究其治疗效果。以猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻二联灭活苗免疫产蛋鸡,琼脂扩散方法检测抗体效价达到1∶64时,收集卵黄,采用氯仿抽提和硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体,进行微生物学检测、安全性试验,通过人工感染治疗试验和临床应用,观察其治疗效果。结果人工感染治愈率为100%,临床应用治愈率为88.0%,表明制备的卵黄抗体对猪传染性胃肠炎和流行性腹泻具有显著的治疗效果。