非洲猪瘟病毒感染的流行病学及其疫苗的研究进展

非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是一种由DNA虫媒病毒引起家猪和野猪的高病死率疾病。非洲猪瘟病毒(ASFV)具有复杂的基因组结构和免疫逃逸机制,目前尚未研制出有效的疫苗。近年来,非洲猪瘟(ASF)疫情在俄罗斯等邻国扎根蔓延,间接导致了在我国大部分地区的流行,对我国猪养殖业造成了严重威胁。为切实做好非洲猪瘟疫病的防范工作,并使猪群得到有效的免疫保护,文章通过对该病的病原学、流行病学以及疫苗的研究进展进行概述,以期为人们对非洲猪瘟的防控措施提供依据,为研制有效疫苗提供参考。     

新疆首次检测到猪圆环病毒3型及其全基因组进化分析

为了解新疆某规模化猪场猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV-3)的流行现状、分子生物学特征和遗传演化规律,试验应用巢式PCR技术对新疆某规模化猪场的45份血液样本进行PCV-3基因检测和测序;利用TempliPhi 100 amplification Kit对检测到的PCV-3阳性样本进行全基因组扩增,将扩增得到的基因组片段克隆到Trans-T1载体中,经测序、拼接获得PCV-3基因组全长序列;利用MEGA 6. 0. 6和MegAlign软件对其全基因组进行遗传进化分析和同源性比较。结果表明:在新疆地区首次检测到PCV-3,且该猪场PCV-3的阳性率为20%(9/45),并获得PCV-3全基因组序列,长度为2 000 bp,命名为PCV-3/CN/Xinjiang-11/2018;与美国株PCV-3-US-SD 2016处于同一进化分支,属于3b亚群;与国内PCV-3/Pig/CN/Hebei20170320的同源性最高(99. 4%),与PCV-3-CN/Fujian-820-2016和PCV-3-CN/Fujian-318-2017的同源性最低(97. 8%),与国外美国株PCV-3-US-SD 2016的同源性最高(99. 1%)。说明新疆地区猪场已经存在PCV-3,应该引起养猪业的重视。     

流行性乙型脑炎病毒NS1基因克隆及其蛋白表达纯化

为了表达流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis type B)非结构蛋白NS1,本研究通过PCR扩增了日本乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)P3株NS1基因,并分别构建了其融合表达His和GST标签的原核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达了NS1融合蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定,并用尿素变性复性和镍亲合层析法纯化目的蛋白。结果显示,试验成功构建了NS1的两个原核表达载体pET-42b-NS1和pGEX-KG-NS1,P3株NS1基因全长1 056bp,以包涵体的形式表达约40ku的蛋白,尿素变性复性效果较好,镍亲合层析纯化得到纯度和浓度均较高的NS1蛋白。JEV NS1基因可以通过原核表达系统高效表达蛋白并纯化得到高纯度产物,为后期生物学功能研究奠定基础。     

某规模化猪场主要猪繁殖障碍性传染病抗体检测及分析

为了解某规模化猪场猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗体水平以及猪伪狂犬病野毒感染情况,研究应用ELISA检测技术对该场307份血清进行了CSFV、PRRSV抗体检测,63份血清进行了PRV-gB、PRV-gE蛋白抗体检测,猪群总体CSFV抗体阳性率为81.11%;PRRSV抗体阳性率为90.23%;PRV-gB蛋白抗体阳性率为95.24%;PRV-gE蛋白抗体阳性率为69.84%,并对不同类别猪群的抗体水平做出具体分析。该结果为了解该猪场3种常见传染病的整体免疫水平,进一步制定合理的免疫程序和防治措施提供参考。     

猪圆环病毒3型新疆株Cap蛋白的原核表达及纯化

本研究旨在通过构建pGEX-4T-1-Cap原核表达载体,制备猪圆环病毒3型（PCV3）重组核衣壳（Cap）蛋白抗原。将密码子优化的PCV3 Cap全基因插入pGEX-4T-1载体,构建重组质粒pGEX-4T-1-Cap,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,筛选出最佳诱导条件,通过谷胱甘肽琼脂糖树脂纯化重组Cap蛋白。结果表明,成功构建重组质粒pGEX-4T-1-Cap;在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、16 ℃诱导20 h的条件下,可获得大量可溶性重组Cap蛋白,SDS-PAGE结果表明分子质量在51.6 ku,与预期相符;Western blotting分析表明经纯化的Cap蛋白与鼠抗GST单克隆抗体、PCV3兔源阳性血清呈阳性反应,进一步证实了重组蛋白的表达。本研究表达并纯化了PCV3 Cap重组蛋白,为新型基因工程亚单位疫苗的研制和ELISA血清学诊断方法的建立奠定了基础。     

石河子地区某规模化猪场主要疫病抗体检测与分析

试验为了解新疆石河子地区某规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、2型猪圆环病毒(PCV-2)、O型口蹄疫病毒(FMDV-O)、猪伪狂犬病毒gB蛋白(PRV-gB)、猪伪狂犬病毒gE蛋白(PRV-gE)的抗体水平以及猪伪狂犬野毒(PRV)感染情况,应用ELISA检测技术对随机采集的血样进行了PRRSV、CSFV、PCV-2、FMDV-O、PRV-gB蛋白、PRV-gE蛋白抗体检测。结果显示:PRRSV抗体阳性率为93.84%;CSFV抗体阳性率为78.32%;PCV-2抗体阳性率为70.32%;FMDV-O抗体阳性率为12.50%;PRV-gB蛋白抗体阳性率为89.10%;PRV-gE蛋白抗体阳性率为10.90%。试验结果提供该猪场5种主要常见传染病的整体免疫水平,为进一步制定合理的免疫程序和防制措施提供参考。     

2019 年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测与分析

为了解2019年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体水平,本研究采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对采集的599份猪的血清进行猪PRRSV抗体检测。结果显示,PRRSV抗体平均阳性率为92.82%（556/599）,高于国家规定标准（70.00%）,S/P平均值为2.17依1.43,变异系数为65.83%。不同类别猪群抗体平均阳性率在80.00%～100.00%之间,存在一定差异。结果表明,调查的11个规模化养猪场PRRSV抗体平均阳性率均达到国家标准。但有3个规模化养猪场的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体变异系数较高渊跃60.00%冤曰不同类别猪群中,保育仔猪群和繁殖母猪群变异系数较高渊跃60.00%冤,需要调整完善现有的免疫程序,进一步加强猪繁殖与呼吸综合征的免疫防控。     

新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体检测与分析

为了解2.019年新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体水平,本试验采用间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)法对采自5家规模化猪场不同日龄猪的338份血清样品进行猪圆环病毒2型抗体检测与分析。结果显示,猪圆环病毒2型抗体平均阳性率为70.71%(239/338),刚好达到国家规定标准(70%),平均S/P值为1.69,各猪场间猪圆环病毒2型抗体水平差异显著。各日龄段猪群抗体平均阳性率在26%～92%之间,存在一定差异。保育猪平均阳性率最低(26.56%),且低于国家规定标准(70%),只有经产母猪、后备猪和育肥猪的猪群抗体阳性率在70%以上。表明在新疆地区5个规模化化猪场中,有3个猪场的猪圆环病毒2型抗体阳性率未能达到国家标准(70%),需要制定更加合理的免疫程序;哺乳仔猪、保育猪和种公猪平均阳性率低于国家标准,需加强免疫防控。该结果在一定程度上可为新疆部分地区猪圆环病毒2型防疫工作提供一定的参考。     

2018年北疆地区猪伪狂犬病病毒gE、gB蛋白抗体ELISA检测及分析

为调查北疆地区猪群伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)野毒感染的情况,试验应用猪伪狂犬病病毒gB、gE抗体检测试剂盒,对北疆地区6个规模化养猪场共401份血样进行PRV-gB和PRV-gE两种蛋白的抗体检测。结果发现6个规模化养猪场的PRV-gB平均抗体阳性率为93.27%(374/401),D场的抗体阳性率最高,为100.00%,C场的抗体阳性率最低,为55.00%。6个规模化养猪场的PRV-gE平均抗体阳性率为45.14%(181/401),E场的阳性率最高,为86.23%,C养殖场的阳性率最低,为0。对不同日龄的猪群分析,PRV-gE蛋白的阳性率最高为公猪68.06%,最低为保育猪12.00%;PRV-gB蛋白的阳性率最高为肥育猪、公猪均为100%,最低为后备猪84.21%。试验表明,北疆地区猪群存在野毒感染,各猪场之间感染情况不一,不同类别猪群之间PRV-gE、PRV-gB蛋白抗体水平存在差异。     

一株鸡大肠埃希氏菌裂解性噬菌体的分离与生物学特性分析

旨在为鸡大肠埃希氏菌病防治提供噬菌体材料。使用双层琼脂平板法从鸡场污水中分离纯化得到1株鸡埃希氏菌裂解性噬菌体vB-EcoM-IME540(IME540),并通过噬菌斑、透射电镜观察该噬菌体的噬菌斑和形态特征,测定其最佳感染复数、耐热稳定性、pH敏感性等生物学特性,并对其进行全基因组测序及进化分析。结果表明,噬菌体vB-EcoM-IME540的噬菌斑呈透亮的圆形,直径0.8 mm~1.1 mm,边缘整齐无晕环,裂解谱较窄(3/45);透射电镜下其头部呈椭圆形且具有收缩尾与尾丝,头尾被颈圈分开,头大小约106.7 nm×73.3 nm,尾长约140 nm×16.7 nm;全基因组大小为170237 bp,G+C为39.46%;基因序列与大肠埃希氏菌噬菌体Bp7的相似性为97.44%;最佳MOI=0.000001,潜伏期约为20 min,暴发时长约为130 min,裂解量约为23 PFU/cell;在80℃条件下20 min活性全部丧失;在pH为4.0~13.0内均有很高的活性。说明噬菌体vB-EcoM-IME540是一株具有一定耐热、耐酸碱能力的肌尾科的大肠埃希氏菌裂解性噬菌体。