策勒县不同季节和田羊和策勒黑羊梨形虫感染情况调查

为了了解策勒县和田羊和策勒黑羊梨形虫在不同季节的感染情况,试验分别于2015年冬至及2016年春分、夏至和秋分在策勒县某牧业合作社采集和田羊和策勒黑羊血液样本共120份,应用PCR法进行梨形虫检测。结果表明:泰勒虫总感染率为69. 2%(83/120),均为绵羊泰勒虫,未发现尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫和巴贝斯虫感染。和田羊不同季节泰勒虫感染率无统计学差异(P0. 05),策勒黑羊不同季节泰勒虫感染率差异显著(P0. 05),均以春分感染率最低。说明应在春季开展南疆地区绵羊的灭蜱和药物防治工作。     

我国部分地区奶山羊无浆体感染情况的调查

为了解我国奶山羊无浆体病的流行情况,应用套式PCR方法对2012年7月至2014年9月采自河南、云南、陕西共12个县区奶山羊的300份血样和204份奶样无浆体16SrRNA基因和MSP4基因进行检测,结果在血液样品中共检出3种无浆体,分别为嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum)、牛无浆体(A.bovis)和绵羊无浆体(A.ovis),阳性率分别为18%(54/300)、21.67%(65/300)、5.33%(16/300);血液无浆体总阳性率为23%(69/300);陕西奶山羊3种无浆体阳性率分别为A.phagocytophilum20.09%(47/234)、A.bovis 20.94%(49/234)、A.ovis 6.41%(15/234),河南分别为A.phagocytophilum11.11%(7/63)、A.bovis 25.4%(16/63),A.ovis 1.59%(1/63);云南均为0%(0/3)。仅在1份羊奶样品中检出A.ovis,阳性率为0.49%(1/204)。调查结果表明,奶山羊无浆体感染普遍存在;不同地区、不同品种、不同饲养方式奶山羊的无浆体阳性率及优势种存在差异;A.phagocytophilum作为人兽共患病原,在奶山羊养殖中应予高度重视。     

新疆南疆部分地方品种羊无浆体的分子检测与鉴定

为了解新疆南疆部分地方品种羊的无浆体感染情况和分子特征,用PCR法检测新疆南疆5种地方品种绵羊共100份血液DNA样本,发现无浆体总感染率为67.0%(67/100)。以多浪羊感染率最高,为100%(20/20),和田羊感染率最低,为44.0%(11/25);散养和圈养羊的无浆体感染率分别为74.0%(37/50)和60.0%(30/50)。67份无浆体阳性样本中,65份检出绵羊无浆体,14份检出嗜吞噬细胞无浆体,其中有12份样本中同时检出绵羊无浆体和嗜吞噬细胞无浆体,未检出牛无浆体和山羊无浆体。序列比对分析,绵羊无浆体存在3个基因型,分别为基因型AO1(n=40)、基因型AO2(n=12)和基因型AO3(n=13);嗜吞噬细胞无浆体存在3个基因型,分别为基因型AP1(n=12)、基因型AP2(n=1)和基因型AP3(n=1)。结果表明,新疆南疆部分地方品种羊的无浆体感染较普遍,应加强对其检测和防治。     

嗜吞噬细胞无浆体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立荧光定量PCR方法检测嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum),针对GenBank A.phagocytophilum 16S rRNA基因保守序列(JN558815),设计1对引物1-25F/183-205R。以已知引物EE1/EE2和该引物进行巢式PCR扩增出预期大小片段(205bp),构建含有16S rRNA基因的重组质粒,以质粒为模板构建了标准曲线。以1-25F/183-205R为荧光定量PCR引物,建立A.phagocytophilum荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样本检测。结果表明,该方法在6.4×10~3~6.4×10~8 copies/μL相关系数为0.99,显示出良好的线性关系;所建方法能特异地检出A.phagocytophilum,对绵羊无浆体、牛无浆体和环形泰勒虫基因组DNA和灭菌双蒸水均无交叉反应;可检测到6.4×10~2 copies/μL的标准质粒DNA,比常规PCR敏感性高100倍;批内及批间变异系数均低于2.0%,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法对30份羊血液临床样品检出率比巢式PCR高16.67%。该研究为A.phagocytophilum临床检测和定量分析病原感染程度奠定理论基础。     

新疆北部地区蜱传嗜吞噬细胞无浆体病原学检测与分子遗传进化分析

为调查我国新疆北部地区蜱及牛、羊体内蜱传播性嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum)病原的流行情况,收集了新疆北部地区13个县(市)的蜱虫样品及血液样品(蜱虫样品609只,牛血液样品670份,羊血液样品631份),提取基因组DNA, PCR检测后挑选阳性样品测序(1/3),分析其感染状况及病原分子遗传特征。结果显示,蜱虫和血液样品中共检测出183份A.phagocytophilum感染阳性,牛、羊和蜱虫感染率分别为10.0%(67/670)、9.5%(60/631)和8.2%(50/609),样品总体感染率为9.3%(177/1 910)。此次获得的新疆北部地区A.phagocytophilum 16S rRNA和MSP4基因序列遗传进化分析显示,该区牛、羊和蜱体内检测到的病原基因阳性片段与GenBank已公布的中亚、中欧地区病原基因序列同源性为96.7%～99.5%,进化树分析显示与中亚、中欧多国A.phagocytophilum基因序列聚为一支。结果可为新疆北部地区蜱与蜱传播性嗜吞噬细胞无浆体病的防控提供理论依据。     

甘肃省景泰县羊无浆体病的诊断

为建立羊无浆体病简便快捷的病原学检测方法,论文以马米玲等已建立的边缘无浆体MSP5重组抗原间接ELISA检测方法对甘肃省景泰县多地采集的219份田间样品进行羊无浆体ELISA检测,以PCR检测方法进行病原学的检测和验证。同时为进一步验证MSP5基因在边缘无浆体和羊无浆体之间的保守性,Western blot检测证实边缘无浆体重组蛋白在45ku处与羊无浆体阳性血清反应,与羊其他病原阳性血清均不反应,表明该重组蛋白适合作为羊无浆体病的诊断抗原。在被检的219份样品中,ELISA方法检测阳性率为34.7%(76/219),PCR方法阳性率为30.6%(67/219),证实该地区存在羊无浆体病,与以往调查结果相比,阳性率有所下降。利用边缘无浆体MSP5重组抗原建立的EILSA方法具有良好的特异性和敏感性,可以检测羊无浆体病,为羊无浆体病的血清学诊断及流行病学调查提供了手段。     

山羊无浆体16S rRNA、MSP4和GroEL(HSP60)基因的克隆测序及分析

对疑似感染山羊的无浆体16SrRNA基因、主要表面蛋白4(MSP4)和编码HSP60的GroEL基因进行克隆测序及系统发育分析。发现所克隆的无浆体16SrRNA、MSP4和GroEL基因序列长度分别为1 464、870、977bp,GenBank登录号分别为JX898992、JX898990和JX898991。所获得的无浆体16SrRNA序列及GroEL序列与公布的羊无浆体南非OVI株(16SrRNA:AF414870;GroEL:AF441131)同源性最高,分别为98.8%和99.8%,而MSP4序列与重庆忠县羊无浆体ZX17株(HQ840746)同源性最高,达100%。系统发育分析显示,本试验获得的无浆体16SrRNA、MSP4和GroEL基因序列均被聚类到羊无浆体群。本试验首次同时克隆分析了山羊无浆体16S rRNA、MSP4和GroEL基因序列,从分子水平证实羊无浆体在重庆存在,建议在进行无浆体种类鉴定时,最好同时选择2个或2个以上物种鉴定基因进行克隆分析,以确保研究结果更可靠。     

吉林省部分地区蜱和羊携带羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体分子流行病学调查

为调查吉林省部分地区蜱虫和羊体内羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的流行情况，本试验采用PCR方法对采自吉林省5个地区的340份羊血液样本和841份蜱虫样本进行检测，并对部分阳性样本测序，建立系统发育树。结果显示，蜱虫中羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体阳性率分别为4.64%(39/841)和7.13%(60/841);羊血液样本中羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体阳性率分别17.06%(58/340)和10.00%(34/340),混合感染率为3.24%(11/340)。蜱虫和羊血液样本中感染的羊泰勒虫为吕氏泰勒虫单独感染，未检测到尤氏泰勒虫和绵羊泰勒虫。系统发育树分析显示，蜱虫和羊血液样本中检测到的泰勒虫与吕氏泰勒虫处于同一分支，与吕氏泰勒虫河南株亲缘关系较近，与尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫亲缘关系较远；蜱虫和羊血液样本中检测到的嗜吞噬细胞无浆体与韩国株、俄罗斯株处于同一分支，亲缘关系较近。结果表明，吉林省羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体感染普遍存在。本调查结果为吉林省羊泰勒虫病和嗜吞噬细胞无浆体病的综合防治提供了理论依据。     

PCR检测新疆南疆部分地方品种绵羊的嗜血支原体和泰勒虫感染情况

为了解新疆南疆部分地方品种绵羊嗜血支原体和泰勒虫的感染情况,采用PCR法检测新疆南疆5个地方品种绵羊共100份血液DNA样本。结果表明:新疆南疆部分地方品种绵羊泰勒虫和嗜血支原体感染率分别为35.0%(35/100)和3.0%(3/100)。仅和田羊和多浪羊上检测到嗜血支原体感染,感染率分别为8.0%(2/25)和5.0%(1/20),不同品种羊的嗜血支原体感染率无统计学差异(P>0.05);泰勒虫感染率多浪羊最高,为60.0%(12/20),卡拉库尔羊感染率最低,为15.0%(3/20),不同品种羊泰勒虫感染率差异显著(P<0.05)。散养绵羊嗜血支原体感染率6.0%(3/50),圈养绵羊未发现感染,两者间无统计学差异(P>0.05);散养和圈养绵羊的泰勒虫感染率分别为26.0%(13/50)和44.0%(22/50),两者之间无统计学差异(P>0.05)。将PCR产物进行双向测序,对序列进行比对分析,发现3个嗜血支原体阳性样本均被鉴定为绵羊支原体,35个泰勒虫阳性样本均被签定为绵羊泰勒虫。说明新疆南疆部分地方品种绵羊的泰勒虫感染均较为普遍,而嗜血支原体的感染情况有待于进一步调查。     

利用50K芯片解析和田羊和策勒黑羊的遗传规律

旨在探究和田羊和策勒黑羊遗传规律的不同,筛选优异基因及其分子标记,推动新疆南疆绵羊品种遗传资源的开发和利用.本研究分别选取健康、成年和田母羊84只、策勒黑羊41只,采集耳组织,放入75％的酒精.基于酚氯仿法提取DNA,经电泳和核酸仪检测,制备Illumina Ovine SNP50芯片.用Plink1.07对基因组数据...     

一起山羊泰勒虫与无浆体混合感染的诊断与防控

通过对颈静脉采集的40份不同年龄阶段的羊血液样品进行DNA提取、PCR扩增,结果显示寄生虫总阳性率为82.50%(33/40),其中,北坡放牧母羊总阳性率为85%(17/20),北坡放牧公羊总阳性率为80%(16/20)。共检出3种血液病原,包括A.phagocytophilum、A.bovis、Theileria spp,阳性率分别为37.50%(15/40)、75.00%(30/40)、32.50%(13/40),其中北坡放牧母羊三种病原阳性率分别为75%(15/20)、75%(15/20)、50%(10/20),南坡放牧公羊仅感染牛无浆体和泰勒虫,二种病原阳性率为75%(15/20)、15%(3/20)。2-3种病原混合感染比较普遍,总混合感染率高达45%(18/40);2种病原混合感染率为27.5%(11/40),其中A.phagocytophilum+A.bovis、A.bovis+Theileria.spp、A.phagocytophilum+Theileria spp、A.phagocytophilum+A.bovis+Theileria spp的混合感染率分别为15%(6/40)、10.00%(4/40)、2.50%(1/40);3种病原混合感染率为17.50%(7/40)。依据PCR检测结果,结合临床症状和病理剖检情况综合分析,该羊场羊群发病及引起死亡的原因,应是泰勒虫与无浆体混合感染所致。     

策勒黑羊和多浪羊FecB基因多态性及其与产羔数的相关性研究

为了探讨策勒黑羊和多浪羊FecB基因多态性及其与产羔数的相关性,为新疆南疆绵羊多胎品系的选育提供参考,试验以策勒黑羊、多浪羊为研究对象,利用PCR-RFLP技术对这两品种绵羊FecB基因单核苷酸多态性进行检测,同时研究该基因对这两品种绵羊产羔数的影响。结果表明:策勒黑羊FecB基因检测到3种基因型,即BB、B+、++,基因型频率分别为0.14,0.44,0.42,B、+基因频率分别为0.35,0.65;多浪羊FecB基因检测到2种基因型,即B+、++,基因型频率分别为0.52,0.48,B、+基因频率分别为0.26,0.74。基因型为BB型的策勒黑羊平均产羔数为2.87只/胎,显著高于++型(P0.05);基因型为B+型的多浪羊平均产羔数为2.55只/胎,显著高于++型(P0.05)。说明策勒黑羊和多浪羊FecB基因具有多态性,其中BB型、 B+型可用于南疆绵羊多胎品系的分子辅助育种。     

喀什地区绵羊无浆体感染情况调查

为了解喀什地区绵羊无浆体的感染情况,采用吉姆萨染色法对喀什地区12个市(县)共278份绵羊血液样品进行显微镜检查。结果表明:无浆体总感染率为45.3%;不同地区绵羊的无浆体感染率为10.0%~65.7%;而不同饲养模式条件下无浆体感染率为40.7%~46.6%,无显著差异(P0.05)。说明喀什地区绵羊的无浆体感染普遍,应加强监测和防控。     

伊吾县部分养殖场感染绵羊无浆体病的流行病学调查

为了解2016～2018年伊吾县部分养殖场感染绵羊无浆体病的情况,实验采用统计学方法和分子生物学方法对羊体表媒介蜱进行种群结构分析,对疑似羊全血进行流行病学调查。结果表明,鉴定出硬蜱2属4种,璃眼蜱属为该地区羊体表寄生蜱的主要群落物种,残缘璃眼蜱和小亚璃眼蜱染蜱率、蜱指数较高,亚洲璃眼蜱蜱指数最低为0.15;吐葫芦乡种群结构较为丰富、多样,盐池镇、淖毛湖镇种群结构参数相似;蜱源性病原检测仅小亚璃眼蜱检测出携带绵羊无浆体,蜱源性无浆体病总阳性率为3.96%,血源性绵羊无浆体总阳性率为14.60%(87/596),其中淖毛湖镇绵羊无浆体阳性率最高为20.13%(30/149),1n≤2年龄段的绵羊无浆体感染较高为7.55%(45/596)。本次调查结果为伊吾县媒介蜱和绵羊无浆体病的综合防控提供参考依据。     

新疆南疆部分地区绵羊的绵羊无浆体病感染情况调查

为了解南疆地区绵羊感染绵羊无浆体感染状况,试验从南疆4个地区(喀什、和田、阿克苏、巴音郭楞蒙古自治州)的21个县市采取绵羊血液样品,进行流行病学调查。对采集的637份血液样品中绵羊无浆体的16S rRNA进行巣式PCR扩增,并分析584 bp片段的阳性样品。结果表明:巴州、喀什、和田和阿克苏地区的感染率分别为75.8%、34.8%、23.3%和23.0%,平均感染率为33.3%;采样点各县市中感染率最高的为巴楚县91.4%,最低为阿瓦提县感染率10.3%,各地区感染率差异性较大。调查说明,新疆南疆地区属于绵羊无浆体病高发地区,急需采取科学防控措施。     

云南山羊感染嗜吞噬细胞无浆体调查分析

为了解云南山羊无浆体的感染及发病情况,2018—2019年从云南12个县20个山羊养殖场/户采集全血样品983份,进行原虫病原学调查及遗传进化分析。调查结果表明:云南山羊存在无浆体感染,但其感染率维持在较低水平,仅有石林县1个养殖场的3份样品为嗜细胞无浆体阳性,总血液样品阳性率为0.3%;通过16S rDNA测序比对验证,阳性感染场3份无浆体均为嗜细胞无浆体(登录号:MN922957),基于16S rDNA基因序列构建的遗传进化树表明,云南感染株SHILIN与嗜吞噬细胞无浆体新疆绵羊株KG782376核苷酸同源率为100%,与陕西株MG869254同源率为99.7%,与边缘无浆体同源率为96.9%。     

上海市闵行区宠物犬体表蜱及蜱传病原体初步调查

为调查上海市闵行区宠物犬媒介蜱及蜱传病原体情况,闵行区宠物医院就诊犬2763只,其中57只犬体表检获183只,根据形态学鉴定蜱种类;采用PCR方法筛查采集的蜱类样本和保留的392份犬血液样本,以发现可能的蜱传病原体。研究结果表明,宠物犬带蜱率为2.06%,带蜱指数为0.066,犬体表寄生的蜱宠物种为血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus,R.sanguineus);病原学检测发现宠物犬携带犬埃立克体(Ehrlichia canis,E.canis),其在蜱和血液样品检出率分别为0.5%和2.29%,其他病原体如螺旋体(Borrelia.spp)和嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum,A.phagocytophilum)均未有检出。调查结果提示我们闵行区部分宠物犬体表存在血红扇头蜱和蜱传病原体感染,应加强媒介蜱及蜱传病原体的监测与防控。     

新疆地区绵羊品种TMEM154基因第2外显子G103A位点的多态性分析

绵羊跨膜蛋白154基因(Transmembrane protein 154,TMEM154)多态性与进行性肺炎的易感或抗性有关。本研究以绵羊TEME154基因第2外显子G103A(E35/K35)位点SNP为候选分子标记,利用PCR直接测序法检测TEME154基因型,对该基因在新疆地区8个绵羊品种(阿勒泰羊、哈萨克羊、巴音布鲁克羊、多浪羊、策勒黑羊、巴什拜羊、德国美利奴羊和中国美利奴羊)的遗传多态性进行分析。结果表明:绵羊TMEM154基因在第2外显子103bp处发生了G-A突变,PCR测序共检测到3种基因型;即AA、AG和GG,G103A位点的GG(E35)基因型与绵羊进行性肺炎的高敏感性相关,在阿勒泰羊、哈萨克羊、巴音布鲁克羊、多浪羊、策勒黑羊和巴什拜羊群体中属于优势基因型,而在中国美利奴羊和德国美利奴羊群体中比例较低。方差分析表明,该位点的基因型频率在阿勒泰羊、哈萨克羊、巴音布鲁克羊、多浪羊、策勒黑羊和巴什拜羊等进行性肺炎高敏感群体和中国美利奴羊和德国美利奴羊等低敏感群体间存在显著差异(P0.05)。本研究结果提示,绵羊TMEM154基因第2外显子G103A位点多态性在进行性肺炎高敏感与低敏感的绵羊群体中分布存在较大差异,该SNP可作为一个理想的分子标记应用于绵羊的抗病育种。     

陶赛特羊与策勒黑羊杂交效果分析

2016年在策勒县策勒乡进行了陶赛特公羊和策勒黑羊母羊杂交试验。为了评定陶赛特羊与策勒黑羊杂交F1代杂交效果，试验随机选择同圈舍杂交F1代公羔与策勒黑羊纯繁后代公羔各21只，测定初生至6月龄体尺、体重及屠宰性能指标。结果表明：在相同的饲养管理条件下，陶策杂交F1代羊6月龄体高、体长、胸围、管围等体尺指标极显著或显著高于策勒黑羊(P<0.01或P<0.05);陶策杂交F1代羊各年龄段体重均极显著高于策勒黑羊(P<0.01),出栏体重、屠宰率，以及兴、蹄、皮、血液、内脏器官重也极显著或显著高于策勒黑羊(P<0.01或P<0.05)。说明陶策杂交F1代具有较强的杂种优势，适应当地环境和饲养管理条件，可以推广。     

新疆昭苏县马感染嗜吞噬细胞无浆体血清学与分子生物学调查

马属动物是嗜吞噬细胞无浆体的重要天然宿主,旨在弄清新疆昭苏县马感染嗜吞噬细胞无浆体情况和病原特征。对采集的100份马血清进行间接免疫荧光(IFA)检测嗜吞噬细胞无浆体抗体,对阳性样品相对应的DNA样品通过PCR扩增、16S rRNA基因测序、序列比对、完成了分子分型分析。间接免疫荧光法(IFA)检出率为8%(8/100),通过对阳性样品的基因组进行16S rRNA扩增,序列分析进一步确定马存在嗜吞噬细胞无浆体感染情况。分子分型发现存在2种嗜吞噬细胞无浆体基因型,ZS23和ZS40这2种基因型在我国及周边其他国家均有分布,研究结果将为该地区的嗜吞噬细胞无浆体感染情况的调查和防治提供依据。