公山羊β防御素104a生物信息学分析及表达特性研究

旨在预测山羊β防御素104a蛋白质特性,研究其在成年公山羊生殖组织及其他组织中的表达特性及其定位。采用在线软件对gBD104a基因(KJ508074.1)进行生物信息学分析,用QRT-PCR法检测gBD104amRNA在睾丸、附睾及其他组织中的表达情况,用免疫荧光技术对生殖组织和精子中的gBD104a进行定位。结果,(1)生物信息学分析结果表明gBD104a基因cDNA全长324bp,编码107个氨基酸,第1~19个氨基酸为信号肽,第27~55个氨基酸为潜在的β防御素构象区域,在C端有7个潜在的O糖基化位点;(2)QRT-PCR结果表明,gBD104a在附睾体中表达量最高,在附睾头、气管、皱胃、空肠、回肠等组织中表达量较高,其他组织中表达量均较低;(3)免疫组化定位结果显示,在附睾头和体部的假复层纤毛柱状上皮细胞检测到较强的gBD104a阳性信号,在附睾尾部的纤毛柱状上皮细胞也检测到较强的阳性信号。gBD104a包裹在精子头部顶体和中段线粒体表面。gBD104a是一种分泌型糖蛋白,在成年公山羊机体各组织中广泛表达,但主要表达在附睾体,是精子表面的主要成分。推测可能与精子运动、顶体反应和获能有关。需要进一步深入研究其功能。     

1,25(OH)2D3以双向方式影响猪前体脂肪细胞增殖分化的研究

1,25（OH）₂D₃是维生素D的主要活性形式,影响人和动物脂肪形成,为探究其在猪脂肪细胞增殖分化中的作用,试验从3~5日龄仔猪皮下脂肪组织分离培养前体脂肪细胞,并以浓度为0、0.1、1、10、100和1 000 nmol/L的1,25（OH）₂D₃分别处理,在培养的0、1、2、4、6、8和10 d采用MTT比色法检测细胞增殖活性;在诱导分化后0、1、2、4、6、8和10 d,以油红O染色提取法和实时荧光定量PCR检测细胞成脂分化及分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和脂肪酸合成酶（FAS）表达。结果显示,0.1和1 nmol/L 1,25（OH）₂D₃显著促进猪前体脂肪细胞增殖（P<0.05）,而浓度为10~100 nmol/L时则抑制细胞增殖（P<0.05）;0.1和1 nmol/L 1,25（OH）₂D₃显著抑制猪前体脂肪细胞分化（P<0.05）,降低PPARγ和FAS mRNA表达水平（P<0.05）,但在浓度为10和100 nmol/L时,显著促进猪前体脂肪细胞分化（P<0.05）,上调PPARγ和FAS mRNA表达（P<0.05）;浓度达1 000 nmol/L时,可能对细胞有毒性作用。综合以上结果,低浓度1,25（OH）₂D₃促进猪前体脂肪细胞增殖,而通过下调PPARγ表达抑制分化;高浓度1,25（OH）₂D₃抑制猪前体脂肪细胞增殖,通过上调PPARγ表达促进分化。1,25（OH）₂D₃对猪前体脂肪细胞增殖和分化具有双向作用。     

β防御素124沉默通过p38MAPK/AP1通路调控山羊附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达

旨在研究山羊β防御素124(goat beta-defensin 124,gBD124)沉默对p38MAPK/AP1通路及下游细胞趋化因子和细胞因子表达的影响。本研究将设计的3条gBD124-shRNAs载入LV10-U6/RFPPuro质粒载体,与包装质粒共转染到293T细胞中,用梯度稀释法测定病毒原液的滴度;将构建的3个LV10-gBD124和LV10-gBD124-NC载体转染到山羊附睾头细胞中,筛选有效沉默载体;然后用有效沉默载体联合转染附睾头细胞,设置了空白细胞对照组、LV10-NC组、有效沉默载体组,用2μg·mL~(-1)嘌呤霉素筛选后分别收集细胞和培养液,采用qRT-PCR、Western blot和ELISA检测gBD124、MAPK信号通路关键蛋白、细胞因子及趋化因子基因及蛋白表达情况。本研究构建了gBD124沉默慢病毒载体,筛选出LV10-gBD124-51和LV10-gBD124-161两个有效载体,并成功构建了gBD124沉默稳定转染的附睾头细胞株。与NC对照组相比,gBD124沉默显著降低了山羊附睾头细胞MAPK通路中MAPK1以及AP1的两个亚型c-JUN和c-FOS基因表达(P0.05),显著增加了RASA1基因表达(P0.05);gBD124沉默显著降低了总p38MAPK、总c-JUN和总c-FOS蛋白表达,以及磷酸化p38MAPK和c-JUN蛋白表达(P0.05);gBD124沉默显著上调了MAPK通路下游IL-1β及其受体IL-1R2、IL-8和趋化因子CCL6和CCL21基因表达(P0.05),下调了CCL5和IL-1α基因表达(P0.05);gBD124沉默显著降低了细胞培养液中CCL5浓度(P0.05)。与空白对照组相比,gBD124沉默显著增加了培养液中IL-1β和IL-8浓度,降低了IL-1α浓度(P0.05)。gBD124基因沉默通过抑制p38MAPK/AP1信号通路调控附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达。     

山羊睾丸和附睾头β防御素家族的表达谱及生物信息学分析

为探明山羊睾丸和附睾头β防御素家族基因表达特点及其蛋白的特性。利用3只7日龄羔羊睾丸和3只成年种公羊睾丸和附睾头的Illumina HiSeqTM2000高通量转录组测序数据,筛选出β防御素家族基因并进行差异表达基因比较分析,利用生物信息学对β防御素家族蛋白特性进行预测。结果显示:在山羊7日龄睾丸、成年睾丸和附睾头中分别表达7、12和33种β防御素,其表达量最高的分别是gDB123、gDB119和gDB124,成年睾丸中特异性表达是gDB33,附睾头中特异表达有21种β防御素。山羊β防御素分子量在6.89~13.85ku,为小分子、极性、带正电荷、疏水性的强碱性多肽。山羊β防御素也是含高度保守6个半胱氨酸的空间构象,基本结构-C-X2-45-CX3-6-C-X3-13-C-X4-7-CC-,其中24种β防御素结构为-C-X5,6-C-X3,4-C-X9-C-X5,6-CC-。有16种β防御素是分泌型糖蛋白,除gDB126无磷酸化位点外,其余的β防御素蛋白均有磷酸化位点。山羊附睾头特异性高度表达有丰富β防御素,它们是一类抗微生物的阳离子肽,在精子成熟过程中形成精子膜上糖被,或精子运动获得的过程中发挥重要作用;也可作为信号分子,某些信号通路中发挥作用。     

公山羊β防御素124的表达谱分析及其在繁殖器官中的定位

旨在研究公山羊β防御素124(Goat beta-defensin 124,gDB 124)的表达谱及其蛋白在繁殖器官中的分布特点。采集1周龄、2~6月龄公羊各3只(体重相近)睾丸和附睾,以及18月龄公山羊睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、心、肝、脾、肺、肾和背最长肌组织。用qRT-PCR分析gDB124mRNA的表达情况;采用免疫荧光技术分析睾丸、附睾头、附睾体和附睾尾gDB 124分布特点。结果显示:除背最长肌中无表达外,gDB124mRNA在18月龄公山羊睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、心、肝、脾、肺和肾组织均有表达,且附睾头表达量极显著高于其他组织(P0.01);睾丸gDB124mRNA表达量6月龄时显著高于其他月龄;附睾头、附睾体和附睾尾gDB124mRNA表达量随月龄的增加呈上升趋势;1周龄公山羊睾丸和附睾gDB124mRNA表达量不存在显著差异,3、4、5、6、18月龄时附睾头gDB124mRNA表达量显著高于睾丸、附睾体和附睾尾(P0.05);免疫荧光定位技术分析显示:gDB 124在公山羊睾丸和附睾中均有分布,但主要是在附睾头上皮细胞中。根据荧光信号强度gDB 124的表达量顺序:附睾头附睾体附睾尾睾丸,该结果与qRT-PCR分析结果相一致。公山羊gDB124mRNA表达具有明显组织特异性和时间依赖性。     

牦牛附睾组织不同区段防御素家族基因的表达谱和生物信息学分析

牦牛是高原地区牧民收入的主要经济来源之一，如何提高牦牛的繁殖力一直备受关注。β-防御素是一类具有广谱抗菌活性的肽，研究牦牛β-防御素（Bos mutus β-defensins,bBD）家族在附睾的表达具有重要意义。本实验使用实时荧光定量PCR技术分析牦牛附睾不同区段β-防御素基因的表达情况。结果显示，共有9个β-防御素基因在附睾头、体和尾的表达存在极显著差异。bBD109、bBD119、bBD121、bBD123、bBD128、SPAG11基因集中于附睾头部表达；bBD125与bBD136集中于附睾体部表达；bBD15同时在附睾头部和体部高表达。结合生物信息学分析发现，这9种β-防御素均存在保守的氨基酸序列、反向折叠的β-转角；bBD136脂溶性最高、疏水性强，bBD125和SPAG11相反；β-防御素基因编码蛋白均为不稳定蛋白（bBD123除外），并且预测分析都存在SP型信号肽（除bBD125外）；β-防御素家族基因在附睾不同区段的差异性表达情况以及编码蛋白质的各种理化性质与结构组成等特征都表明其可能在精子成熟过程中发挥着重要作用。     

1,25-( OH)2D3及LPS对2型糖尿病肾病尿毒症患者单核细胞维生素D受体表达的影响

目的 探讨1,25-(OH)2D3及TLR4配体(脂多糖,LPS)对2型糖尿病(T2DM)和糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)尿毒症患者血清干预的单核细胞维生素D受体(VDR)表达的影响,进一步探索1,25-( OH)2D3在T2DM和DN炎症性免疫反应中的作用.方法 分离研究对象(健康对照组、T2DM组和DN尿毒症组)外周血血清,孵育THP-1单核细胞,然后于含或不含10-7 mol/L的1,25-(OH)2D3培养液中培养48 h后,再用终浓度为1μg/ml的LPS干预24h,收集单核细胞和培养上清.采用RT-PCR检测VDR mRNA表达,Western blot、免疫荧光检测THP-1单核细胞内VDR蛋白表达.ELISA法检测细胞培养上清IL-6和IL-10浓度.结果 与正常对照组比较,在LPS的刺激下T2DM组和DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR mRNA水平下调[对照组(0.99±0.25);T2DM组(0.65±0.24);DN尿毒症组(0.62±0.27),P＜0.05];DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR蛋白表达比正常对照组和T2DM组显著下调[对照组(0.48 ±0.05);T2DM组(0.50±0.06);DN尿毒症组(0.20±0.01),P＜0.01],且LPS增强以上患者血清孵育的THP-1单核细胞炎症细胞因子IL-6的分泌[对照组(15.13±1.61);T2DM组(24.06 ±2.92);DN尿毒症组(70.77 ±5.48),P＜0.05];而1,25-(OH)2D3可部分阻断上述作用.结论 LPS能下调T2DM和DN尿毒症患者单核细胞VDR mRNA和蛋白的表达,引起促炎和抗炎细胞因子失调.1,25-(OH)2D3可部分逆转LPS的作用,对T2DM和DN尿毒症可能具有一定的保护作用.     

As2O3对大鼠BRL-3A和RH-35细胞TRβ1和Cyclin D1因子的影响

为了探明As₂O₃对大鼠肝脏细胞系BRL-3A和肝癌细胞系RH-35中TH信号通路的关键调控因子TRβ1和TRβ1的下游因子Cyclin D1的影响，采用qRT-PCR、Western blot技术检测2种细胞中TRβ1和Cyclin D1的基因和蛋白表达变化。结果显示：(1)与对照组相比，As₂O₃作用BRL-3A细胞12 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达显著降低(P<0.01)、Cyclin D1表达显著升高(P<0.01);6.250μmol/L组TRβ1表达明显降低(P<0.05)、Cyclin D1表达显著降低(P<0.01)。As₂O₃作用24 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达明显升高(P<0.05);6.250μmol/L组TRβ1显著升高(P<0.01),Cyclin D1的表达显著降低(P<0.01)。As₂O₃作用48 h,...     

维生素D的免疫功能

维生素D是动物所必需的营养素,除对钙和骨代谢具有重要影响外,对免疫系统也有重要作用。1,25(OH)2维生素D3是维生素D的活性形式,1,25(OH)2维生素D3的生物学效应是由维生素D3受体(VDR)介导的。淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞都有VDR的表达,这表明,维生素D对免疫系统功能有重要调节作用。     

前列腺素E2受体激动剂和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中转化生长因子β3表达的影响

本试验旨在观察前列腺素E₂受体激动剂(布他前列腺素(butaprost))与雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中转化生长因子β₃(TGFβ₃)表达的影响,阐明butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞TGFβ₃有无协同调控作用.采用胰酶消化法及机械法分离培养奶牛输卵管上皮细胞,分别将butaprost和雌激素作用于体外培养的奶牛输卵管上皮细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中TGFβ₃ mRNA表达的影响.结果显示,与0 h作用组相比,雌激素作用16、24和48 h时对奶牛输卵管上皮细胞TGFβ₃的表达量均极显著升高(P< 0.01),4 h的表达量极显著降低(P< 0.01);且受体激动剂butaprost和雌激素有协同调控TGFβ₃的效应;加入吲哚美辛后能有效抑制内源性前列腺素对TGFβ₃表达的作用.结果表明,butaprost和雌激素可调控奶牛输卵管上皮细胞TGFβ₃ mRNA 的表达.     

营养、大肠杆菌和氨基酸对猪小肠上皮细胞抗菌肽和信号通路蛋白表达的影响

为了研究应激和氨基酸对上皮抗菌肽表达的作用和分子机制,试验选用猪小肠上皮细胞系IPEC-J2作为研究对象,饥饿和大肠杆菌感染分别作为营养应激和细菌应激,丙氨酸和异亮氨酸作为氨基酸处理,收集细胞mRNA,利用荧光定量PCR测定β防御素和相关信号通路蛋白表达水平。结果表明:与对照组(DMEM/F12培养基)相比,饥饿显著降低了小肠上皮细胞猪防御素2(p BD-2)、猪防御素3(p BD-3)和猪防御素EP2c(p EP2c)及沉默信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)、叉头转录因子1(Fox O1)和叉头转录因子4(Fox O4)的表达(P0.05),大肠杆菌对β防御素表达无显著影响(P0.05)。与对照组(饥饿培养基)相比,丙氨酸处理未显著影响p BD-2和p BD-3的表达(P0.05),但显著提高了p EP2c表达水平(P0.05);异亮氨酸处理使p BD-2、p BD-3和p EP2c表达水平显著升高(P0.05)。与对照组相比,丙氨酸和异亮氨酸处理不同程度影响信号通路蛋白转录,丙氨酸处理显著提高了Sirt1和Fox O4的表达水平(P0.05),异亮氨酸处理显著促进了Sirt1、Fox O1和Fox O4的表达(P0.05)。由此得出,营养应激降低猪小肠上皮细胞中β防御素的表达,而氨基酸的补充可促进其表达,该调控作用可能与Sirt1和叉头转录因子(Fox O)信号通路蛋白有关。     

β防御素124沉默通过p38MAPK/AP1通路调控山羊附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达

旨在研究山羊β防御素124（goat beta-defensin 124,gBD124）沉默对p38MAPK/AP1通路及下游细胞趋化因子和细胞因子表达的影响。本研究将设计的3条gBD124-shRNAs载入LV10-U6/RFP&Puro质粒载体,与包装质粒共转染到293T细胞中,用梯度稀释法测定病毒原液的滴度;将构建的3个LV10-gBD124和LV10-gBD124-NC载体转染到山羊附睾头细胞中,筛选有效沉默载体;然后用有效沉默载体联合转染附睾头细胞,设置了空白细胞对照组、LV10-NC组、有效沉默载体组,用2 μg·mL^-1嘌呤霉素筛选后分别收集细胞和培养液,采用qRT-PCR、Western blot和ELISA检测gBD124、MAPK信号通路关键蛋白、细胞因子及趋化因子基因及蛋白表达情况。本研究构建了gBD124沉默慢病毒载体,筛选出LV10-gBD124-51和LV10-gBD124-161两个有效载体,并成功构建了gBD124沉默稳定转染的附睾头细胞株。与NC对照组相比,gBD124沉默显著降低了山羊附睾头细胞MAPK通路中MAPK1以及AP1的两个亚型c-JUN和c-FOS基因表达（P<0.05）,显著增加了RASA1基因表达（P<0.05）;gBD124沉默显著降低了总p38MAPK、总c-JUN和总c-FOS蛋白表达,以及磷酸化p38MAPK和c-JUN蛋白表达（P<0.05）;gBD124沉默显著上调了MAPK通路下游IL-1β及其受体IL-1R2、IL-8和趋化因子CCL6和CCL21基因表达（P<0.05）,下调了CCL5和IL-1α基因表达（P<0.05）;gBD124沉默显著降低了细胞培养液中CCL5浓度（P<0.05）。与空白对照组相比,gBD124沉默显著增加了培养液中IL-1β和IL-8浓度,降低了IL-1α浓度（P<0.05）。gBD124基因沉默通过抑制p38MAPK/AP1信号通路调控附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达。     

小尾寒羊β2微球蛋白的表达及其二级结构预测分析

为研究小尾寒羊绵羊白细胞抗原Ⅰ（Ovis aries leukocyte antigen classⅠ,OLAⅠ）轻链四聚体前体链β₂微球蛋白（β₂-microglobulin,β₂m）的结构和功能,根据GenBank中公布的绵羊β₂m基因设计特异性引物,提取小尾寒羊全血中的RNA并运用RT-PCR方法扩增绵羊β₂m基因,将扩增的绵羊β₂m基因克隆到pMD18-T载体,筛选出阳性克隆菌pMD18T-OLAⅠ-β₂m,经双酶切后与表达载体pET-28a（+）连接,再转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中构建pET-28a（+）-OLAⅠ-β₂m重组表达菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况;运用SOMPA在线软件预测OLAⅠ-β₂m蛋白的二级结构。PCR扩增结果显示,目的基因大小为357 bp,与理论值相符,扩增片段成功克隆到pMD18-T载体,经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切筛选及测序,成功获得阳性克隆菌株pMD18-T-OLAⅠ-β₂m,插入的目的片段大小为357 bp。阳性克隆菌株与表达载体pET-28a（+）经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后连接,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后获得pET-28a（+）-OLAⅠ-β₂m重组表达菌,经IPTG诱导表达,Western blotting检测目的蛋白大小为17.3 ku,目的蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式表达,经洗涤、变性、纯化、初步获得SDS-PAGE纯化的OLAⅠ-β₂m蛋白;PORTER在线软件预测OLAⅠ-β₂m蛋白的二级结构元件α-螺旋（Hh）、β-折叠（Ee）和无规则卷曲（Cc）分别占22.03%、22.03%和55.93%。本研究成功构建了小尾寒羊β₂m基因的pET-28a（+）重组表达体系,运用SOMPA在线软件预测OLAⅠ-β₂m的二级结构,为下一步绵羊OLAⅠ类分子四聚体的构建奠定基础。     

肝脏X受体(LXRα)对奶牛子宫内膜炎调节机制的研究

为了探索肝脏X受体(LXRα)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的调节机制，研究采用小鼠体内试验及奶牛子宫内膜上皮细胞体外试验，用LXRα激动剂T0901317激活LXRα,子宫灌注0.2 mg/mL LPS 50μL,检测奶牛子宫内膜上皮细胞活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、亚硝酸盐、前列腺素E₂(PGE₂)等炎性细胞因子的表达情况，对核因子κB(NF-κB)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)-重组与合成蛋白(Nrf2)信号通路的影响。结果表明：10,20,40μmol/L的T0901317对奶牛子宫内膜上皮细胞没有毒性作用，对TNF-α、IL-1β、亚硝酸盐、PGE₂的表达具有极显著的抑制作用(P<0.01),可降低磷酸化蛋白65(p-p65)、磷酸化蛋白ⅠκB(p-ⅠκB)的磷酰化水平，提高磷酸化葡萄糖合成激酶3β(p-GSK3β)、Nrf2及Nrf2调控的抗氧化因子血红素氧化酶-1(HO-1)的表达。说明LXRα可以通过调节GSK3β-Nrf2信号通路抑...     

前列腺素D2对山羊黄体细胞内分泌功能及其凋亡相关基因表达的影响

旨在研究前列腺素家族中生殖领域鲜有报道的PGD₂成员对单一环境下黄体细胞内分泌功能及其凋亡相关基因表达的影响，并解析其在黄体退化中的作用机理，为全面探析前列腺素家族成员的生物学作用提供新的理论依据。采集空怀母山羊黄体中期的卵巢组织，通过胶原酶II消化和胰酶差速离心法分离纯化以获得山羊黄体细胞。采用DMEM/F12进行离体培养，观察不同离体培养时间的黄体细胞生长状态；采用免疫组化法和细胞形态特征鉴定黄体细胞，将PGD₂设置三个不同梯度确定其对黄体细胞作用效果的剂量依赖性关系。最后，通过PGD₂最佳依赖性剂量处理黄体细胞，利用ELISA法检测黄体细胞的内分泌功能变化，流式细胞术测定黄体细胞的凋亡率及qRT-PCR/Western blot法检测凋亡相关基因mRNA/蛋白表达水平。结果显示，经突触素(synaptophysin, SYP)特异性表达蛋白鉴定，成功分离并获得了山羊原代黄体细胞。细胞形态实时观察和ELISA检测结果显示，离体培养5 d时黄体细胞胞质饱满、外形紧凑、形态清晰可见，并且黄体细胞的内分泌P₄     

白屈菜碱对H2O2诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤的预防作用

集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重,致使小肠上皮屏障功能受损,影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用,本试验使用H₂O₂构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型,采用MTT法筛选适宜的白屈菜碱浓度,采用ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β1)以及NO含量,采用qPCR法和Western blot检测上述炎症因子及iNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果发现,在2.5～100.0 mg/L质量浓度范围内,白屈菜碱对IPEC-J2细胞无毒性;2.5、5.0、10.0 mg/L白屈菜碱可显著恢复H₂O₂诱导的IPEC-J2细胞存活率下降(P<0.05)。经H₂O₂造模后,NO含量极显著升高(P<0.01)、IL-10含量显著降低(P<0.05)、其余炎症因子含量显著升高(P<0.05),iNOS及上述炎症因...     

Regulation of bone phosphorus retention and bone development possibly by related hormones and local bone-derived regulators in broiler chicks

Background:Phosphorus is essential for bone mineralization in broilers,however,the underlying mechanisms remain unclear.We aimed to investigate whether bone phosphorus retention and bone development might be regulated by related hormones and local bone-derived regulators in broilers.Methods:Broilers were fed diets containing different levels of non-phytate phosphorus(NPP)0.15%,0.25%,0.35%,0.45% and 0.55% or 0.15%,0.22%,0.29%,0.36% and 0.43% from 1 to 21 or 22 to 42 days of age.Serum and tibia samples were collected for determinations of bone phosphorus retention and bone development parameters,related hormones and local bone-derived regulators of broiler chickens on d 14,28 and 42,respectively.Results:Tibia ash phosphorus,total phosphorus accumulation in tibia ash(TP_TA),bone mineral concentration(BMC),bone mineral density(BMD),bone breaking strength(BBS),and ash on d 14,28 or 42,serum 1,25-dihydroxyvitamin D₃(1,25(OH)₂D₃)on d 28 and 42,mRNA expressions of tibia fibroblast growth factor 23(FGF23)and dentin matrix protein 1(DMP1)on d 14 and 28 increased linearly or quadratically(P<0.05),while serum parathyroid hormone(PTH)on d 28,tibia alkaline phosphatase(ALP)on d 14,28 and 42,bone gal protein(BGP)on d 14,and mRNA expression of tibia phosphate-regulating gene with homologies to endopeptidases on the X chromosome(PHEX)on d 14 and 28 decreased linearly or quadratically(P<0.04)as dietary NPP level increased.TPTA,BMC,BMD,and ash on d 28 and 42,BBS on d 28,and ash phosphorus on d 42 were positively correlated(r=0.389 to 0.486,P<0.03)with serum 1,25(OH)₂D₃.All of the above parameters were positively correlated(r=0.380 to 0.689,P<0.05)with tibia DMP1 mRNA expression on d 14,28 and 42,but negatively correlated(r=?0.609 to?0.538,P<0.02)with serum PTH on d 28,tibia ALP on d 14,28 and 42,and BGP on d 14.TP_TA,BMC and ash on d 14 and BMD on d 28 were negatively correlated(r=?0.397 to?0.362,P<0.03)with tibia PHEX mRNA expression,and BMD on d 28 was positively correlated(r=0.384,P=0.04)with tibia FGF23 mRNA expression.Conclusions:These results suggested that bone phosphorus retention and bone development parameters had moderate to strong correlations with serum PTH and 1,25(OH)2D3 and tibia DMP1,PHEX,FGF23,ALP and BGP in broilers during the whole growth period,and thus they might be partly regulated by these related hormones and local bone-derived regulators.     

Toll样受体7/8在公猪生殖系统中的表达及其配体对猪X/Y精子分选效果评价

旨在分析Toll样受体7/8(TLR7/8)在公猪精子及生殖器官中的表达情况，并探讨是否能通过其配体处理的方式分离猪X精子和Y精子。本研究采用qRT-PCR分析3头健康成年公猪睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾以及精子中TLR7和TLR8基因的mRNA表达水平，利用免疫组化检测公猪睾丸和附睾中TLR7和TLR8蛋白的表达，并通过细胞免疫荧光分析其在不同物种(健康成年小鼠、公牛和公猪)精子中的表达情况，将其配体R848与猪精子共孵育，研究其对精子活力以及X/Y精子分离的影响。结果表明，TLR7和TLR8 mRNA在公猪睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾组织以及精子中均表达；免疫组化结果显示，TLR7/8蛋白在睾丸中主要表达于生殖细胞，在附睾中主要表达于柱状细胞微绒毛中；细胞免疫荧光结果表明，TLR7和TLR8蛋白只表达于小鼠和牛X精子尾部，Y精子中不表达，但TLR7和TLR8蛋白在公猪X和Y精子中都表达且表达模式无显著差异，TLR7蛋白主要表达于猪精子头部顶体区域，TLR8蛋白主要表达于猪精子尾部；与对照组相比，用TLR7和TLR8配体R848孵育猪精子后，精子活力降低，但上层精子的性别比例无显著差...     

不同剂量25羟基维生素D3对断奶前犊牛血液生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响

为研究不同剂量25羟基维生素D₃[25(OH)VD₃]对断奶前犊牛血液水平、抗氧化能力和免疫功能的影响,选取18 头健康状况良好的新生荷斯坦犊牛,随机分成3 组,每组6 头进行为期56 天的饲养试验。分为对照组[不添加25(OH)VD₃]、低剂量组[25(OH)VD₃添加量6 000 IU/头·天]和高剂量组[25(OH)VD₃添加量12 000 IU/头·天]。结果表明,与对照组相比,随着25(OH)VD₃添加剂量增加,血浆生长激素、胰岛素样生长因子-1、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、总抗氧化能力以及免疫球蛋白G(IgG)含量显著增加(P<0.05),而丙二醛含量随剂量增加而存在降低趋势(P=0.079)。与对照组和低剂量组相比,高剂量组血浆免疫球蛋白A(IgA)含量有增加趋势(P=0.059)。综上所述,断奶前犊牛饲喂高剂量25(OH)VD₃有利于促进体内生长激素和胰岛素样生长因子-1分泌,可提高犊牛抗氧化能力,增强免疫功能。     

不同维生素D3和25羟基维生素D3水平对强制换羽后产蛋后期蛋鸡产蛋性能、蛋壳品质以及骨质量的影响

为研究不同维生素D₃和25羟基维生素D₃水平对强制换羽后产蛋后期蛋鸡产蛋性能、蛋壳品质以及骨质量的影响，随机选取1728只健康631日龄海兰褐蛋鸡，分为6组，每组4个重复，每个重复72只鸡。试验Ⅰ组饲粮添加3300 IU/kg维生素D₃，试验Ⅱ组添加3300 IU/kg 25羟基维生素D₃，Ⅲ组添加1650 IU/kg维生素D₃与1650 IU/kg25羟基维生素D₃，Ⅳ组添加4950 IU/kg维生素D₃，Ⅴ组添加4950 IU/kg 25羟基维生素D₃，Ⅵ添加1650 IU/kg维生素D₃与3300 IU/kg 25羟基维生素D₃。试验总共105 d。结果表明：(1)饲喂不同维生素D₃水平对蛋鸡产蛋性能、蛋壳品质以及骨质量均无显著影响(P> 0.05)。(2)1650 IU/kg维生素D₃与1650 IU/kg 25...