山羊促性腺激素释放激素1基因外显子克隆及序列分析

促性腺激素释放激素1(gonadotropin-releasing hormone 1,GnRH1)是GnRH存在于脑下垂体的主要形式,它在调节生殖内分泌系统产生促性腺激素方面起着主要作用。根据牛GnRH1基因全序列设计3对引物,采用PCR-SSCP技术检测GnRH1基因外显子2、3和4在高繁殖力山羊品种（济宁青山羊）、中等繁殖力山羊品种（波尔山羊）和低繁殖力山羊品种（内蒙古绒山羊和安哥拉山羊）中的单核苷酸多态性,分析该基因对山羊高繁殖力的影响;并对山羊GnRH1基因3个外显子进行克隆测序,推导出编码的氨基酸序列,然后将山羊核苷酸和氨基酸序列与牛、人、狗、黑猩猩、猴、大鼠和小鼠7个物种的序列进行同源性比较。结果表明,在4个山羊品种中均未检测到GnRH1基因3个外显子的多态性;8个物种的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为73.6%～99.3%和62.0%～97.8%。可见,哺乳动物GnRH1基因外显子2、3和4序列保守性较强,该区域可能不是影响山羊高繁殖力的功能结构域。     

京海黄鸡促性腺激素释放激素受体基因密码子特性分析

为了了解鸡促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR)基因的密码子特性,以便于为GnRHR基因的表达选择合适的外源表达系统,本研究使用在线工具CUSP、CHIPS及CodonW软件对鸡GnRHR基因的密码子特性进行分析,并与鸡、模式动物基因组和其他动物GnRHR基因密码子特性进行比较.结果显示,京海黄鸡GnRHR基因的ENc值较小,具有较强的密码子偏好性,且偏好以G/C结尾的密码子, GnRHR基因CDS序列中,GC含量大于AT含量;CodonW软件计算结果表明,京海黄鸡GnRHR基因密码子中,密码子GCC、ATC、CTC、CTG、CGC、CGG、AGC、TCC和GTG(RSCU>2)偏好性较强,且均以G/C结尾.对31条鸡基因分析表明鸡偏好密码子中有12种G/C结尾的密码子.与大肠杆菌、酵母菌和小鼠基因组密码子使用频率比较显示,京海黄鸡GnRHR基因密码子偏好性与3种生物相差很大,不适合进行外源表达.与其他动物GnRHR基因密码子偏好性比较显示,禽类GnRHR基因偏好含有或以G/C结尾的密码子,而其他物种的GnRHR基因无强烈的偏好性.聚类分析结果表明,亲缘关系近的物种之间倾向于拥有相同的密码子偏好性.     

鹅GnRH基因CDS区克隆、序列分析及原核表达

本研究旨在了解鹅GnRH基因的CDS区序列及其蛋白表达情况,研究鹅GnRH蛋白的生理功能,为进一步阐明GnRH蛋白影响鹅繁殖性能的调控机制提供理论基础。采用RT-PCR方法从溆浦鹅下丘脑扩增获得GnRH基因的CDS区序列,将测序正确的DNA序列定向克隆到pET28a(+),构建表达载体pET28a-GnRH,并转化至BL21(DE3)大肠杆菌表达目的蛋白,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测和Western blot分析。结果显示:获得的溆浦鹅GnRH基因CDS区部分序列,含有270个核苷酸,编码前体蛋白中的90个氨基酸;溆浦鹅GnRH基因CDS区在大肠杆菌中得到高效表达,GnRH基因CDS区的目的蛋白为9 900,最终测得菌体湿重为0.6g/L,纯化后得到的蛋白为20~30mg/L;清晰检测到GnRH基因表达的蛋白特异带,试验获得的抗体对原核表达的GnRH蛋白具有特异性反应;鹅GnRH基因在动物进化中高度保守,研究得到的鹅GnRH前体蛋白可为进一步研究GnRH基因的生物功能以及其对鹅就巢、产蛋等繁殖性状的影响奠定基础。     

初情期启动过程中小尾寒羊下丘脑GnRH基因甲基化状态及表达量关系研究

初情期启动的早晚关系到雌性动物的繁殖性能,GnRH是动物初情期启动过程中的关键基因,其启动子区甲基化状态与GnRH mRNA表达量之间的关系尚不清楚。本研究选择初情期前、临近初情期和初情期雌性小尾寒羊的下丘脑作为样本,利用亚硫酸氢盐测序(BSP)技术和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了初情期不同阶段小尾寒羊GnRH启动子区的甲基化状态和GnRH mRNA的表达量,并分析二者之间的关系。结果表明:小尾寒羊到达初情期时,GnRH基因启动子区甲基化水平显著降低(P0.05),尤其是在启动子区-570位点降低最明显,而随着初情期的启动GnRH mRNA表达量呈上升趋势。结果提示,初情期启动过程中,GnRH mRNA表达量升高可能与下丘脑GnRH基因启动子区特定位点甲基化水平降低存在一定的关系。     

山羊GnRHR基因部分序列PCR-SSCP分析

采用PCR-SSCP技术分析GnRHR基因外显子1、外显子2和外显子3部分序列在建昌黑山羊、努比亚山羊2个山羊品种中的多态性。结果表明,外显子2、3的扩增片段中,2个山羊品种都无多态性。而在外显子1的扩增片段中,2个山羊品种均检测到CC、CD基因型;建昌黑山羊的CC、CD基因型频率分别为0.62和0.38,努比亚山羊CC、CD基因型频率分别为0.64和0.36。多态片段测序分析表明,GnRHR基因c DNA序列的第85处碱基发生C→A的突变,突变导致编码的氨基酸由亮氨酸(Leu)→异亮氨酸(IIe);第156处碱基发生A→G的突变,该突变没有导致氨基酸的突变,为沉默突变。     

促性腺激素释放激素及其类似物在母猪繁殖中应用的研究进展

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH))是下丘脑分泌的生殖激素,主要通过下丘脑-垂体-性腺轴参与调控动物的生殖活动,也可直接作用于性腺或其他器官发挥重要功能。哺乳动物的GnRH具有相同的十肽结构,通过改变十肽结构中第六、九、十位氨基酸可合成不同的GnRH类似物。GnRH及其类似物可通过刺激促黄体素(LH)分泌、抑制雌激素受体二聚化及调节胚胎附植期相关蛋白质的合成来影响动物的繁殖性能。GnRH及其类似物已被证明可提高猪的繁殖力。在母猪生产中,GnRH类似物的应用仍存在受胎次影响、促进排卵但不能增加产仔数等问题。文章主要从GnRH的来源与功能、GnRH及其类似物的结构、GnRH受体(GnRHR)的结构与功能、GnRH及其类似物对母猪繁殖性能的影响,以及存在的问题与展望五方面介绍了GnRH及其类似物在母猪繁殖中的应用研究进展。     

GnRH免疫去势研究进展

促性腺激素释放激素 (GnRH)是由丘脑下部产生并贮存于该腺体内 ,当机体受到一定的刺激时通过血液循环到达靶组织 ,调节丘脑 垂体 性腺轴 ,影响生殖内分泌和生殖细胞的发育。随着生物学、免疫学以及生殖内分泌等多学科的发展 ,出现了一个新的边缘性学科———激素免疫学 ,并由此出现了激素免疫技术 ,即外源的激素作用于机体使机体产生抗体并利用抗体中和机体的内源性激素使其失去生物活性 ,进而使丘脑 垂体 性腺轴的正常生理活动受破坏。文章对GnRH免疫去势在生产中的可行性、作用机制、影响因素、免疫制剂研究及其存在问题等作了综述     

促性腺激素释放激素及其在母牛繁殖上的应用

<正> 促性腺激素释放激素(GnRH)主要由下丘脑神经内分泌小细胞分泌,能刺激垂体前叶分泌促黄体素(LH)和促卵泡素(FSH)。在70年代以前,由于GnRH的分子结构不清楚,故根据其生理效应将GnRH分别命名为促黄体素释放因子(LH-RF或L-RF)和促卵泡素释放因子(FSH-RF)。1971年,Sc-hally和Guillemin等从数十万头猪和羊的下丘脑中     

常见生殖激素名称、符号及作用

在动物繁殖方面的科技文献中．时常遇到一些激素的字母符号，为便于读者理解，现将其归纳如下。     

大鼠GTH细胞PKC对FSH-β mRNA表达的影响

为研究大鼠促卵泡素(FSH)分泌的受体后信号转导机制,将GTH细胞用PMA或H7处理后,用GnRH脉冲刺激,再用实时荧光定量PCR方法测定细胞FSH-βmRNA表达的Ct值,并与空白对照组比较。结果表明,PMA能显著降低GTH细胞FSH-βmRNA表达的Ct值,H7则曾能显著升高,说明GTH细胞PKC活性显著影响FSH-βmRNA的表达,FSH-βmRNA的表达随着PKC活性的升高而显著升高,随着PKC活性的降低而显著降低。因此,PKC-Ca2+是GnRH脉冲刺激所引起的FSH-βmRNA表达的受体后的信号转导途径。     

GnRH脉冲对体外原代培养大鼠GTH细胞中FSHβ mRNA表达水平的影响

为了从分子水平阐述不同脉冲频率促性腺激素释放激素(GnRH)对促性腺激素(GTH)分泌促卵泡素(FSH)的影响,采用细胞体外培养技术结合荧光定量PCR技术,研究体外培养大鼠原代垂体细胞在不同脉冲频率GnRH刺激下,细胞FSHβ mRNA的变化.在相同振幅条件下,低频刺激(120 min间隔)时,FSHβ mRNA表达水...     

牦牛生长激素释放激素基因的克隆及序列分析

本文对牦牛GHRH基因进行PCR产物T—A克隆测序。通过GenBank中的Blastn分析表明：牦牛GHRH基因与普通牛同源性为98％，与猪同源性为89％。在所测序列中共有7个变异位点，变异率为1．6％，其核酸变异类型包括转换、颠换和插入，以转换最为常见。     

Heifers express G‐protein coupled receptor 153 in anterior pituitary gonadotrophs in stage‐dependent manner

We recently found that orphan G‐protein‐coupled receptor (GPR)153 is expressed in the anterior pituitary (AP) of heifers, leading us to speculate that GPR153 colocalizes with gonadotropin‐releasing hormone receptor (GnRHR) in the plasma membrane of gonadotrophs and is expressed at specific times of the reproductive cycle. To test this hypothesis, we examined the coexpression of GnRHR, GPR153, and either luteinizing hormone or follicle‐stimulating hormone in AP tissue and cultured AP cells by immunofluorescence microscopy. GPR153 was detected in the gonadotrophs, and was colocalized with GnRHR in the plasma membrane. GPR153 was also detected in the cytoplasm of cultured gonadotrophs. Real‐time PCR and western blot analyses found that expression was lower (P < 0.05) in AP tissues during early luteal phase as compared to pre‐ovulation or late luteal phases. The 5′‐flanking region of the GPR153 gene contained a consensus response element sequence for estrogen, but not for progesterone. These data suggest that some, but not all GPR153 colocalizes with GnRHR in the plasma membrane of gonadotrophs, and its expression changes stage‐dependently in the bovine AP.     

妊娠期奶山羊下丘脑GnRH和OT免疫反应双标记细胞的分布

为了探讨促性腺激素释放激素（GnRH）和催产素（OT）是否在下丘脑细胞中共存,采用免疫组织化学双标记法对妊娠期奶山羊下丘脑中GnRH与OT的分布进行了检测。结果显示：室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等核团（区）有GnRH和OT免疫反应双标记细胞,在妊娠的不同时期,GnRH和OT免疫反应双标记细胞数量有显著差异。这些结果为GnRH与OT相互调节提供了形态学证据。     

青年期及产蛋期绍兴鸭和康贝尔鸭血清促性腺激素释放激素浓度的比较

采用放射免疫分析法 (RIA)测定了不同日龄 (60 ,10 0 ,2 0 0和 380日龄 )绍兴鸭和卡基 康贝尔鸭 (KhakiCampbellDuck)血清中促性腺激素释放激素 (GnRH)浓度 ,试图通过比较不同品种、性别和日龄鸭之间GnRH浓度的变化 ,探讨GnRH与产蛋性能的关系。结果表明 :绍兴鸭和康贝尔鸭母鸭血清中GnRH浓度呈现类似的年龄性变化 ,60日龄时GnRH浓度较低 ,10 0日龄时最高 ,2 0 0日龄时显著下降 ,380日龄时回升至较高水平。公鸭血清中GnRH浓度的年龄性变化与母鸭相似 ,10 0日龄时最高 ,2 0 0日龄时最低     

GnRH类似肽主动免疫对公猪生产性能的影响

将30头公猪分成3组,给免疫组的 10头公猪注射促性腺激素释放激素并列体二 聚体 卵清蛋白复合物,初次免疫时间是3月 龄,5月龄加强免疫1次。同时阉割10头公 猪作为阴性对照组,其余的10头注射卵清蛋 白作阳性对照组。试验期间,统计每头公猪 的平均饲料消耗量和日增重。7月龄时屠宰, 测其活重、屠宰率、料肉比指标。结果表明, 免疫组公猪平均日增重、最终活重(P< 0.05)、屠宰率、料肉比均高于阴性对照组,略 低于阳性对照组。提示GnRH并列体二聚体主动免疫能提高公猪的生产性能。     

Injection of porcine growth hormone releasing hormone gene plasmid in skeletal muscle increases piglets'' growth and whole body protein turnover

The aim of the current study was to investigate the effects of a porcine growth hormone releasing hormone (pGHRH) gene plasmid injection in piglets on growth performance and whole body protein turnover. Sixty male Canadian Landrace × Chinese Taihu piglets were assigned to an intramuscular injection of 0 (control), 0.25, 0.5, 1 and 2 mg. All pigs were fed with the same diet (crude protein: 239.8 g/kg, digestible energy: 14.28 MJ/kg) at ad libitum intake. Protein turnover was determined on the 22nd day with a three-pool model by using a single-dosage, end-product analysis method with ¹⁵ N-glycine as a tracer. Injection of the pGHRH gene plasmid increased the piglets' growth rate, altered feed intake and decreased feed conversion ratio. It increased plasma growth hormone releasing hormone (GHRH), growth hormone (GH), insulin-like growth factor-I (IGF-I) and somatostatin but reduced serum urea and triglyceride. It reduced the urinary nitrogen excretion and led to higher nitrogen retention as well as the efficiencies of nitrogen retention and digestible N utilization. It increased the rates of protein synthesis, protein breakdown and net protein gain. Excretion of endogenous urinary nitrogen was reduced and nitrogen reutilization rate was improved. Conclusions: Injection of the pGHRH gene plasmid in skeletal muscle stimulated GHRH, GH and IGF-I excretion in piglets. Protein deposition was increased by an increase in protein synthesis and a smaller increase in protein breakdown, which was accompanied by reducing amino acid oxidation and increasing nitrogen reutilization.