微酸性电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌的杀灭效果及机制研究

微酸性电解水作为一种安全、高效、广谱的新型消毒剂,具有制备简单、成本低、使用后无残留、对人体无毒无害等优点.研究微酸性电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌的杀灭效果及其杀菌机制,为其在蚕桑生产中的应用奠定基础.体外抑菌试验结果表明,有效氯质量浓度为40 mg/L、pH5.5、氧化还原电位(ORP)为1100 mV的微酸性电解水处理5 min即可全部杀灭家蚕黑胸败血芽孢杆菌.生物学试验结果表明,该电解水对家蚕黑胸败血芽孢杆菌处理5 min后,家蚕黑胸败血芽孢杆菌的灭活率达到90％;处理15 min时,灭活率为100％.经微酸性电解水处理后,家蚕黑胸败血芽孢杆菌的外部形态发生改变,菌体膨胀、逐渐伸长,之后出现孔洞,最后菌体破裂、死亡;胞外电导率、可溶性蛋白含量和可溶性糖含量逐渐增加;菌体DNA发生降解.试验结果表明微酸性电解水主要通过破坏家蚕黑胸败血芽孢杆菌细胞外部形态,改变细胞膜通透性,导致细胞内容物外渗,DNA结构受到破坏,达到杀菌目的 .     

拮抗放线菌BS-112的鉴定及抗菌物质粗提物对家蚕主要病原菌的抑制作用

以绿僵菌(Nomuraea rileyi)和黑胸败血病菌(Bacillus sp.)为靶标,从泰山林地土壤中分离获得一株对多种家蚕病原菌具有强烈拮抗作用的放线菌BS-112。根据该菌株的形态特征、培养特征、理化性质、细胞壁组分及16S rDNA序列分析结果,将其鉴定为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。该菌株抗菌谱广,抗菌物质耐高温,在酸、碱环境比较稳定,抗菌物质粗提物对黑胸败血病菌和绿僵菌的最小抑菌浓度分别为19.53μg/mL和78.13μg/mL,最小杀菌浓度分别为78.13μg/mL和156.25μg/mL,表明在较低浓度下即可达到杀菌效果。     

三种氟喹诺酮类药物体外抗家蚕病原菌活性的对比实验

为筛选新的抗生素替代氯霉素防治家蚕细菌病 ,采用试管二倍稀释法研究了盐酸诺氟沙星、盐酸蒽诺沙星、盐酸环丙沙星 3种药物对家蚕黑胸败血病菌、苏云金杆菌的体外抗菌活性。盐酸诺氟沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的最低抑菌浓度MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 19,最低杀菌浓度MBC分别为 3 12 5和 0 78。盐酸蒽诺沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 39,MBC为 3 12 5和 12 5。盐酸环丙沙星对黑胸败血病菌和苏云金杆菌的MIC(mg/L)分别为 0 78和 0 39,MBC为 12 5和 6 2 5     

家蚕类钙粘蛋白BtR-175基因敲除突变体创制和抗性检测

家蚕类钙粘蛋白BtR-175不仅是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)晶体毒素蛋白的受体蛋白,也是黑胸败血芽孢杆菌(Bacillus bombysepticus)晶体毒素蛋白的受体分子。为建立对黑胸败血芽孢杆菌具有抵抗能力的家蚕品系,采用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术,设计引导RNA(gRNA)对家蚕BtR-175基因进行精确定点编辑,对蚕卵显微注射重组质粒pU C57-hA 4-Cas9和T-U6-BtR-175后,筛选获得2个碱基插入导致蛋白质翻译提前终止的BtR-175基因敲除突变体,命名为ΔBtR-175。4龄起蚕经口添食黑胸败血芽孢杆菌,结果ΔBtR-175突变体家蚕的死亡率为34.4%±5.8%,野生型家蚕的死亡率为57.8%±8.4%,表明ΔBtR-175对黑胸败血芽孢杆菌的侵染抵抗性显著提高。饲养试验显示ΔBtR-175突变体和野生型家蚕的茧层量没有显著性差异。该突变体有望进一步培育为家蚕抗性育种素材。     

七种抗菌药品对家蚕病原细菌的抗菌试验

为了解市场上一些蚕药对家蚕细菌病的防治效果,采用琼脂平板滤纸片法研究蚕服康一号、天丝克毒灵、氯霉素、盐酸多西环素、蚕用菌克、蚕食健、强氯添食康等七种药品对家蚕黑胸败血病菌、灵菌败血病菌、苏芸金杆菌、葡萄球菌和杀螟杆菌的体外抗菌活性。结果表明蚕服康一号和蚕用菌克对各种病原细菌的抗菌活性最强,氯霉素对各种病原的抗菌作用表现中等,天丝克毒灵对病原细菌基本没有抗菌活性。蚕服康一号对灵菌败血病菌的抑菌圈面积比盐酸多西环素的大3倍以上、比氯霉素的大242．25 %、比蚕用菌克的大52．11%、比蚕食健抑菌圈面积大42．45%,蚕服康一号对黑胸败血病菌的抑菌圈面积比氯霉素抑菌圈面积大44．00%,结果显示蚕服康一号对家蚕的灵菌败血病菌、黑胸败血病菌有很强的抗菌效果。     

家蚕细菌病防治新药配方筛选试验

采用7种抗菌药物对黑胸败血菌及灵菌进行体外抑菌试验,筛选出对上述病菌具有显著效果的2种药物。联合抑菌试验,显示2种药物具有协同作用;剂量筛选试验,筛选出2种药物的合理剂量配比。     

盐酸左旋氧氟沙星的筛选及其对家蚕主要细菌病的防治效果!

为寻找防治家蚕细菌病的有效药剂,通过体外抑菌试验从盐酸左旋氧氟沙星、盐酸蒽诺沙星、强力霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考5种常用兽用抗生素药剂中,筛选出对苏云金芽孢杆菌、黑胸败血菌和粘质沙雷氏菌(灵菌)抑菌效果较好的盐酸左旋氧氟沙星,并进一步研究了其对家蚕细菌病的防治效果。试验结果表明,盐酸左旋氧氟沙星对苏云金芽孢杆菌、黑胸败血菌和粘质沙雷氏菌3种病原菌引起的细菌病都有较好的防治效果,优于对照药物氟苯尼考;并且盐酸左旋氧氟沙星对家蚕生长、茧质均无不良影响(P>0.05),表明盐酸左旋氧氟沙星是防治家蚕细菌病的一种理想药剂。     

杆菌肽锌在畜禽养殖中的应用

肝菌肽锌 (ＺｉｎｃＢａｃｉｔｒａｃｉｎ)对畜禽能够起到显著的抑菌促生长作用 ,主要源于其独特的三重抑菌机理 :①杆菌肽锌是类脂质焦磷酸的特异性抑制剂 ,能抑制细菌细胞壁合成的脱磷酸化过程 ,影响磷脂载体的运转及向细胞壁支架输送粘肽 ,从而抑制细胞壁的合成 ;②与敏感菌的细胞膜相结合 ,损伤细胞膜 ,使细胞膜通透性增加 ,导致膜内物质外流 ;③干扰敏感菌细胞内原浆蛋白的合成。因此 ,杆菌肽锌是一种强杀菌剂 ,能强烈抑制革兰氏阳性菌 ,特别是梭状芽孢杆菌、葡萄球菌、链球菌、棒状杆菌等病原菌对之极为敏感 ,对耐青霉素的金黄色葡萄…     

载铜蒙脱石体外杀菌效果及其机理

选用断奶仔猪肠道中的大肠杆菌K88和猪霍乱沙门菌作为指示菌。杀菌性能的测定采用最低抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）,并绘制杀菌曲线。原子吸收光谱仪测定Cu2＋在肉汤和生理盐水中的释放量;透射电镜观察细菌细胞壁的变化;全自动生化分析仪测定细菌胞内酶的活性;通过K＋电极测定K＋释放量;采用SP-2型溶氧仪测定菌体悬浮液中的溶氧量。结果显示,载铜蒙脱石对E.coli K88的MIC为64mg/L,MBC为256mg/mL;对S.choleraesuis的MIC为128mg/L,MBC为512mg/L。而蒙脱石未显抗菌活性。透射电镜下观察细菌与载铜蒙脱石作用后形态发生了变化,细菌细胞膜受损,内容物外漏;细菌胞内酶活性结果显示,胞内酶的大量外漏,与对照组相比,均差异极显著（P〈0.01）;大量自由的K＋从细菌细胞内释放出来;呼吸代谢结果显示,载铜蒙脱石抑制了细菌呼吸代谢的三羧酸循环途径。结果表明,载铜蒙脱石具有强大的杀菌作用。     

兽用抗菌药物使用要点(一)

<正>抗菌药物主要是指抗生素和合成抗菌药。抗菌药物能干扰病原微生物细胞壁的合成、损伤菌体的细胞膜、影响菌体的蛋白质合成及核酸合成。合理应用抗菌药物指在明确指征的情况下选用适宜的药物,采用适宜的剂量和疗程,达到杀灭致病微生物和控制感染的目的。应用抗菌药物的同时应采取相应措施增强畜禽免疫力,防止发生各种不良反应。     

益生芽孢杆菌脂肽类抑菌成分的高效液相色谱-电喷雾串联质谱分析

本文旨在探明一株具有益生潜质的枯草芽孢杆菌N2-10对肠道菌的抗菌作用及其活性成分,为深入评价该菌株的益生功能和益生机理奠定基础。以常见的肠道致病菌和有益菌为指示菌,采用抑菌圈法对该菌株发酵液成分的抑菌活性进行测定,并通过高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)对其中的活性成分进行分析。结果表明:枯草芽孢杆菌N2-10发酵液的氯仿和正丁醇提取液对供试菌无明显的抑制作用;脂肽类对大肠杆菌、痢疾杆菌和沙门氏菌等肠道致病菌表现出明显的抑菌作用,而对肠道有益菌保加利亚乳杆菌抑制作用很弱,对嗜热链球菌则无抑制作用。脂肽粗提物的HPLC-ESI-MS/MS分析结果显示,脂肽粗提物中的脂肽类抗生素为伊枯草素家族中的C14~C17抗霉枯草菌素(Mycosubtilin)的同系物。因此推断,枯草芽孢杆菌N_2-10对肠道致病菌产生抑制作用依赖于其产生的脂肽抗生素Mycosubtilin。     

1株黄曲霉颉颃菌的鉴定及其抑菌活性成分分析

【目的】 筛选黄曲霉颉颃菌,探究其最佳培养条件及有效抗菌成分,为实际生产中应用生物防治方法抑制黄曲霉污染提供新的理论依据。【方法】 通过平板对峙法及分子生物学鉴定方法对待测菌株进行筛选鉴定。以抑菌率作为衡量标准,判断所得黄曲霉颉颃菌的最佳培养温度、培养时间、接种量、转速、pH及装液量。通过硫酸铵沉淀法从颉颃菌无菌发酵上清液中提取蛋白,观测粗提物对黄曲霉菌丝生长的影响。通过离子交换色谱和凝胶过滤色谱进一步纯化粗提蛋白,并进行质谱测序及序列对比分析,筛选鉴定颉颃菌产生的有效抑菌成分。【结果】 筛选到1株解淀粉芽孢杆菌B10(菌种保藏号CCTCCNO:M2018353)。最佳培养条件为温度40 ℃,培养时间36 h,接种量3%,转速120 r/min,pH 6.0,装液量30 mL,最大抑菌率可达46.56%。其粗提蛋白能有效抑制黄曲霉生长,破坏菌丝正常形态,并从中筛选出几丁质结合蛋白、壳聚糖酶、葡聚糖酶等8种可能的有效抑菌成分。【结论】 本试验分离鉴定出1株抑制黄曲霉正常生长发育的解淀粉芽孢杆菌B10,其产生的多种蛋白成分对黄曲霉有显著抑菌活性。     

发酵饲料中抑菌菌种筛选及抑菌性能评估方法的初步研究

试验通过牛津杯法筛选出抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌性能较强的一株乳酸菌L3和两株芽孢杆菌D9、K9。将其用于制作发酵饲料,提升发酵饲料的抑菌性能。试验初步研究发酵饲料的体外抑菌性能评估方法。结果表明,用80%的乙醇溶液作为发酵饲料的前提取溶剂可增加抑菌物质的溶解,浓缩提取液的浓度可使发酵样品的抑菌效果更加明显。     

猪源芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

从自然生长的健康猪肠道中分离到13株芽孢杆菌,通过生理生化试验初步鉴定其中9株为枯草芽孢杆菌,2株为巨大芽孢杆菌,1株为地衣芽孢杆菌,1株为凝结芽孢杆菌;对这13株芽孢杆菌分别进行了耐酸性试验、耐胆盐试验、体外抑菌试验和动物安全性试验。结果表明,其中1株地衣芽孢杆菌B7株和1株枯草芽孢杆菌B9株均有较强的耐酸、耐胆盐能力,对致病性大肠杆菌具有较好的体外抑制能力,且均安全无毒,可作为动物用益生菌制剂的候选菌种。     

固态发酵银杏叶生产蛋白饲料的研究

试验选择地衣芽孢杆菌作为发酵菌种,以粗蛋白含量为考查指标,通过L9(34)正交试验优化固态发酵银杏叶蛋白饲料工艺。结果显示,固态发酵银杏叶生产蛋白饲料的最佳工艺参数为接种量8%、含水量50%、发酵温度31℃、发酵时间84 h。经固态发酵后,银杏叶的粗蛋白、粗灰分、粗脂肪、总氨基酸含量分别提高102.16%、49.03%、20.34%、40.30%,粗纤维、总黄酮含量降低55.68%、10.26%,更适合作为饲料使用。     

猪源枯草芽孢杆菌BL-Y9益生特性研究及小鼠安全试验

本研究对实验室自行分离保存的猪源枯草芽孢杆菌BL-Y9进行抑菌、产酶、体外消化率等益生特性研究,并测定了其对小鼠的安全性。结果表明：菌株BL-Y9对猪大肠杆菌K88、鸡大肠杆菌O78、鸡白痢沙门氏菌CVCC533及金黄色葡萄球菌C56011有较好的抑菌效果,抑菌圈直径均可达到10 mm以上,发酵上清液中性蛋白酶及纤维素酶活性分别可达184.94、9.68 U/mL|经模拟动物体消化道的试验结果表明：菌株BL-Y9对三种不同饲料组合的消化效果较好,其中以对玉米面+豆粕组合消化效果最好,经作用后,消化液粗纤维消化率、游离氨基酸增加幅度、可溶性氨基酸增加幅度、还原糖增加幅度及酸溶蛋白增加幅度分别为37.79%、152.94%、438.11%、325.62%、131.39%。动物试验结果显示,每只小鼠灌胃1 ~ 100亿剂量菌体是安全的。菌株BL-Y9可作为畜禽饲料添加剂使用。 [关键词] 枯草芽孢杆菌|产酶特性|抑菌特性|消化率|小鼠安全性     

Identification and purification of a novel adhesion-associated protein in a new strain of Lactobacillus, L15, from flounder (Paralichthys olivaceus)

Adhesion is a crucial and prerequisite step for Lactobacillus colonization in the digestive tract which subsequently confers its probiotic effects on the host. The aim of this report was to identify and purify a novel adhesion-associated protein which mediates the adherence of a new strain of Lactobacillus, L15, to intestinal mucus from flounder. It was shown that surface proteins were involved in the adhesion of L15 to flounder mucus. The adhesion efficiencies of this strain were significantly decreased from 16.0% to 5.8% after extraction of L15 with 5 M LiCl and were further inhibited to 3.6% by blocking with an L15 cell extract containing surface proteins. The adhesion-associated protein in the cell extract was visualized by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and was identified by Western blotting with sulfo-N-hydroxysuccinimide-biotin (B-NHS)-labeled crude mucus as a 61.8 kDa protein. The identical protein could be purified from L15 whole cell proteins by affinity chromatography using Sepharose, covalently coupled with crude mucus. It was demonstrated that the adhesion-associated protein was a new adhesive protein. Its characteristics and similarities with other known adhesive proteins need further investigation.     

一株解淀粉芽孢杆菌的特性及抑菌活性研究

试验旨在对一株牛瘤胃源解淀粉芽孢杆菌的生长曲线、耐酸性和耐胆酸盐性等特性进行分析，同时对该菌发酵产物的抑菌活性和抑菌活性稳定性进行测定。采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定耐酸性和耐胆酸盐性等特性，牛津杯法测定抑菌活性和抑菌活性稳定性。结果显示，该菌生长4 h时进入对数生长期，20 h后生长趋于稳定，进入生长稳定期；同时该菌表现出较好的耐酸性，在pH 3.0~7.0时存活率为23.8%~90.6%；有较好的耐胆酸盐性，在0.1%~0.4%的胆酸盐中存活率为64.2%~83.6%。以大肠杆菌（Escherichia coli）、副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）、藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）和产气杆菌（Aerogenes）等细菌和黑曲霉（Aspergillus niger）、黑根霉（Rhizopus nigricans）等霉菌作指示菌进行抑菌试验发现，该菌的发酵产物具有抑菌活性，同时其抑菌活性物质的耐热性和耐酸性较好。本试验通过对该解淀粉芽孢杆菌的特性进行研究发现，该菌具有耐酸、耐胆酸盐等特性；其抑菌活性及抑菌稳定性较好，具有耐酸碱及耐高温特性。     

Characterization of Mycobacterium paratuberculosis antigenic proteins

The characterization of a purified antigen from Mycobacterium paratuberculosis, recently made commercially available for use in serodiagnosis by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), of paratuberculosis in cattle was described. This assay had 89% specificity and 83% sensitivity for M paratuberculosis infection. The protein/polypeptide composition of the purified antigen was compared with that of a crude protoplasmic extract of strain 18 M paratuberculosis used in the agar-gel immunodiffusion test and ELISA and with that of sonicated strain 19698 M paratuberculosis organisms grown on Dorset-Henley synthetic liquid medium. The sonicated M paratuberculosis contained 27 major proteins/polypeptides; the crude protoplasmic extract, 18; and the purified antigen contained 14 proteins/polypeptides, using sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide-gel electrophoresis analysis. The serologic reactivity of these proteins/polypeptides were defined, using the enzyme-linked immuno-electrotransfer blot technique. The sonicated M paratuberculosis contained 20 serologically reactive proteins/polypeptides (34,000 to 84,000 daltons); the crude protoplasmic extract contained 3 (37,000 to 45,000 daltons); and the purified extract contained a diffuse polypeptide band (34,000 to 38,000 daltons). Identification by enzyme-linked immuno-electrotransfer blot technique of M paratuberculosis antigens reactive in the ELISA will allow us to further study these antigens in the ELISA to improve sensitivity and specificity of the diagnostic test.     

复合芽孢杆菌对桑叶发酵品质的影响

现有的饲料添加剂目录中,枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌均被允许用于养殖动物。因此,本研究选择实验室收藏的枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌按不同比例制成复合菌液协同发酵桑叶饲料,并检测发酵第7天、第28天和56天的桑叶品质。桑叶青贮发酵后,发现枯草芽孢杆菌/地衣芽孢杆菌都具有降解纤维、分解脂肪,提高粗蛋白含量的能力,其中,H2组的粗纤维含量在发酵第56天较对照组下降了12.69%,只占(12.217±0.039)%,说明地衣芽孢杆菌分解纤维的能力可能相对较强,H3组的粗脂肪含量在发酵第56天较对照组下降了20.99%,只占(5.884±0.003)%,说明枯草芽孢杆菌分解脂肪的能力可能相对较强,不同比例的复合芽孢杆菌H1、H2和H3组的粗蛋白含量在发酵第56天分别增加8.96%、7.24%和3.72%,说明两种芽孢杆菌均具有提高青贮桑叶蛋白质含量的能力,能够提高饲料营养品质的效果。