鸡新城疫病毒的研究 (一)Ⅱ系、印度系、北京系强毒三株病毒的血清学研究及其免疫血清电泳的观察

作者循前人方法,初步进行了三株鸡新城疫病毒的血清学試驗,认为經过高速离心,血球吸附法,可以分离出病毒株的可溶性抗原和病毒抗原。并試用补体結合反应和琼脂扩散沉淀反应呈現特异抗原性。試用紙上电泳法說明免疫血清抗体可能存在于乙种及丙种球蛋白。作者通过抑制紅血球凝集反应和血球吸附試驗,认为强毒株和弱毒株之間存在相互关系,同时表示株特异性。但通过交叉吸附血清抑制血球凝集試驗,所出現的抑制价变化,认为三株病毒的所謂株特异性,似乎不是质的不同而是量的差异。     

新城雞疫病毒之血球凝集診斷法

新城鷄疫病毒,經感染鷄胚后,Burnet證明胚胎中之羊膜尿襄液能便鷄之紅血球凝集,並證明賦有新城鷄疫抗體之血清,能抑止此項凝集反應之發生。Lush之试验结果亦同。國內之學者如朱維正等亦證實我國之新城鷄疫病毒,亦能凝集鷄之紅血球。利用新城鷄疫病毒之此種性能,美國農部曾頒發新城鷄疫之診斷法,Brandly等之研究,亦曾證明其可靠。玆就筆者之工作經驗,予以介紹:並作說明、補充及討論。希學者指示之。     

猪腎虫病(stephanuriasis)皮內反应試驗报告

(1) 本文报告了猪腎虫冷浸和热浸两种抗原的制备方法及其皮內反应試驗的初步結果。(2) 根据尿液检查与皮內反应丘疹直径的大小以及剖检部分受检猪对比的結果分析,初步定出皮內反应标准为:注射抗原0.1毫升,經10—15分钟后观察,丘疹直径扩大至1.2厘米或1.2厘米以上者为阳性;丘疹直径在1.2厘米以下者为阴性反应。(3) 1:100冷浸抗原和1:100热浸抗原分别試驗猪只53例和49例,与尿液检查符合率各为90.6%和83.8%,平均符合率为87.2%。根据試驗后剖检12例受試猪証明:抗原皮內反应出現早于虫卵,即早期病例亦能出現阳性結果,因此皮內反应实际阳性检出率可达99%。(4) 对所謂“假阳性”反应作了分析,指出由于尿液检查不能检出早期病例。經剖检証明:这种所謂“假阳性”反应的12例受試猪都有猪腎虫的幼虫感染,故所謂“假阳性”反应,实际上并不假,說明抗原皮內反应敏感性很高,具有早期診断的价值,給猪腎虫病早期治疗提供了依据。(5) 在兽医临床診疗工作中,皮內反应可以协助兽医师迅速判断疾病,节約时間,提高效力。     

經驗點滴

精液凝集反應 布氏桿菌病血清凝集反应陽性公牛的精液是否能用於人工授精,要看公牛的生殖器是否為布氏桿菌所感染為斷。因為陽性公牛,它的生殖道並不一定被侵害。為了診斷這一點,丹麥的學者近發明精液凝集試驗,頗有實際意義。其操作方法是取1％檬檸酸鈉2滴置入離心管中,加入精液1毫升,於3,000r.p.m.之速度離心20分鐘,取出上清液,按照血清凝集反應操作方法進行試驗。如生殖器未被感染,則即1:10之稀釋度亦不發生凝集現象。     

家畜布氏杆菌病高度免疫血清之试制及其免疫效果的观察

按照作者略加修改的氏法,利用马牛各二头进行布氏杆菌病高度免疫血清的试制,所制备之血清应用小白鼠和绵羊作被动免疫试验,在注射血清24—48小时后,注射强毒布氏杆菌,然后观察小白鼠的发病死亡与绵羊体内的保菌情况;结果小白鼠保护力在牛源血清效果良好,马源血清效果较逊;用牛源血清免疫的6只绵羊中,检出病菌者仅2只,未免疫者2只,则全部检出病菌。试验结果表明所制备之血清有一定之被动免疫效果,牛源血清之效果较马源血清为高。     

兎化猪瘟与猪丹毒弱毒混合冻干疫苗研究

1.在我院研究猪丹毒弱毒冻干菌苗的基础上,試制成功一种猪瘟、猪丹毒弱毒混合冻干疫苗,經用小动物和猪进行試驗,証明安全有效。 2.一次肌肉注射混合冻干疫苗2毫升,已知免疫期可达9个月,免疫猪对猪瘟或猪丹毒均有良好的抵抗力。 3.混合冻干疫苗性质稳定,在—8°—35℃的不同溫度条件下,保存6个月后对猪安全并仍有坚强的效力。 4.疫苗在江苏省鎮江等地大面积推广应用16,374剂,反应率仅占0.22%,7个月后調查沒有猪再感染猪瘟或猪丹毒病例。 5.报告内对混合冻干疫苗的制造方法,保护剂的选择等亦作了介紹。     

应用各种血清学反应診断馬付伤寒性流产的比較試驗

以大批地发生过馬流产的某些畜牧場的馬血清226头分,应用平板凝集反应試管凝集反应和补体結合反应进行了比較診断試驗,另外并对补体結合反应的操作及抗原制作做了某些改进,将其結果摘要如下。(一) 血清学反应阳性結果者平板凝集反应为82头分占被检头分的36%、試管凝集反应为85头分占37.1%、补体結合反应为68头分占30.1%,疑似結果者平板凝集反应为7头分占3%、試管凝集反应为16头分占7.1%、补体結合反应为4头分占1.8%;余下均为阴性。(二) 对診断馬付伤寒性流产的补体結合反应做了以下几項試驗;首先,抗原是利用低摻透压,振蕩、冷浸漬及离心沉淀等程序处理純培养物获得的,通过效价測定,确定本抗原的工作效价为1:60;其次,应用耐热力試驗,毒性試驗和色反应的检查結果証明,本抗原具有內毒素的特性;最后,将226头分血清的每一分均以四种用量进行了对比检查,結果认为进行本試驗时血清用量以0.05毫升为适宜。     

血清培养凝集试验诊断急性猪丹毒

用黄牛制备的抗猪丹毒高免血清,以马丁肉汤稀释作为试剂,接种病猪的耳静脉血一滴或死猪的脾、肾一铂金耳,36℃培养12小时以上,如果病料内含有猪丹毒杆菌,则在试管底部出现明显的乳白色凝集团块。用本法试测分离到的猪丹毒菌株及国外引进菌株共55个,均可出现凝集反应。对猪体常见的病原菌,如:巴氏杆菌、副伤寒杆菌、葡萄球菌、链球菌及溶血性大肠杆菌均不能凝集,证明这种凝集反应具有特异性与敏感性。用本法检验人工发病猪耳静脉血31头次,检出阳性者28头次,检出率为90.32%;检验死猪的脾、肾5份,全部为阳性;检查可疑病料93份,经几种方法确定为猪丹毒的共45份,用本法检出42份,检出率为93.33%,用琼脂平板划线培养检出37份,检出率为82.22%,前者的检出率比后者高。用猪、兔制备的高免血清对猪丹毒菌有凝集反应,但对葡萄球菌有非特异性凝集,故不宜于作诊断之用。     

健康猪只布氏桿菌凝集价增高三例分析

目前我国对猪布氏桿菌病的主要診断方法是試管凝集試驗。一般判定标准:在1∶50稀释度出現“++”号及其以上的凝集現象时,被检血清判定为阳性反应;在1∶25稀释度出現“++”号及其以上的凝集現象时,被检血清制定为疑似反应。但越来越多的病例使兽医工作者相信病猪不一定有凝集現象发生;而在1∶50稀释度出現“++”号及其以上的凝集現象时,是否即为病猪,則研究的文献尚少。根据作者4年来在广州市畜牧場对猪布氏桿菌病的观察研究,发現某些与本病有接触史的健康猪只,其凝集价有不同程度的增高。本文試以对此現象加     

猪喘气病血清蛋白成分的电泳分析試驗

近几年来,关于喘气病病猪血清蛋白各成分間的变动問題,国內、外作者报导不一(見表一),这可能与各家所用不同病型的血清有关,为澄清这一問題,我們曾利用各种病型的猪只进行了血清蛋白的紙上电泳試驗。現将試驗方法和結果介紹如下,以供参考,不妥之处,希同道者予以指正。(一)病猪場的流行病学簡况:該猪場的猪只,80%以上为杂种猪,半年前,曾对所有的猪只进行过猪瘟、猪丹毒和猪肺疫的預防注射。在5个月前,曾因由外地引入純种病公猪后,經过1个月     

苏联畜牧兽医文摘

本文首先概述蘇聯微生物學發展經過,然後分兩方面論述关於病毒和微生物本質之新資料:一為病毒轉變為微生物方面,一為微生物之濾過形态轉變為不濾過形態方面。关於病毒轉變为微生物方面之研究,主要以馬传染性貧血病毒為對象。此种病毒為一特異之核蛋白,可以在病馬血清中分离出純净之產物。血清分離出病毒後,該血清即无引起马传貧之能力,而所分離出之病毒則可引起標準之馬传貧。病毒可由濾過形態轉變为顆粒形態,此種形態即不能通过濾器。在普通顯微镜下观察,馬传貧病毒之顆粒形态首先無規則的散佈在培养基上,後來聚集成圓形或橢圓形球体,外圍形成薄膜。中部之顆粒逐渐密集形成同一性物體,類似微生物。同時密集的中央球體縮小,內面构成一個、二个或三個小     

水禽新城疫血凝抑制试验存在的问题

新城疫病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象,这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制,即红细胞凝集抑制试验(HI)。由于血凝反应可被特异性抗体所抑制,抗体与病毒结合后,血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上,出现凝集抑制现象。该方法具有以下优点:①敏感性强,可以检测到微量的抗体,结果也较为准确,是较敏感的血清学反应之一;②特异性强,病毒凝集红细胞只能被特异的抗体所抑制;③检测速度快,1次HI试验只需2 h左右,即可判定结果;④HI试验对环境要求不高,操作简单,1次还可检测大量的样品。因此血凝抑制试验用于水禽血清,可以检测血清中的抗…     

兽医卫生檢驗中发现猪炭疽的一些体会

我們在肉类加工厂中,曾一次在宰前感观檢查中,見有二头猪,其一在腮部肿大而偏于一侧,另一側則稍肿脹而不显著;另一头頸部和垂肉都有严重的肿脹,声音嘶哑。經隔离屠宰后,第一例腮部肿大的猪只,經取材涂片发現炭疽杆菌。第二例的抹片中仅发現了巴氏杆菌,因之可以說明該猪的病状乃是由于胸型的出血性敗血病所致。由此可以判明,宰前的感观檢查中对腮部、頸部以及达到耳根垂肉等部位的肿脹,也应当加以重点的观察,以期及时控制炭疽病。前言猪会吃土中的草根或死亡畜体的骨骼,所以有很多感染炭疽病的机会。猪的炭疽大部由于摄     

猪丹毒杆菌的血清学特性

近年来,不断发现猪丹毒杆菌新血清型菌株,对不同血清型菌株的致病性、诊断与免疫等,引起了研究者的重视。我国对丹毒杆菌血清型的研究,早在五十年代马闻天等以Dedie,k的方法,检查了从我国各省区搜集的丹毒杆菌107株,其中A型46、B型40、N型21株。以各型的代表株经琼扩沉淀反应检查结果,证明有不同的抗原构造,崔治中1979年报告在河北省馆陶县除分离到A、B、N型外,并有他命名的G_1,G_2及G_3型。1980—1982年中监所搜集到了国外现有的22个血清型的参考菌株,经分别制成了免疫血清,初步检查我国各地从急性病例分离的丹毒杆菌148株,结果1a型占81.0%,2型占18.2%,但从15头健康猪分离的菌株,除1a型和2型外,还有5、6、8、3、11及21型。而且出现有用同一菌株制的抗原对2或3个型血清有反应。据荣昌畜牧兽医学院佘永建等人用免疫血清作培养凝集试验,对1及2型均有凝集。R.L.Wood报告用1型茵制的菌苗,对9及10型免疫力低或无免疫力。为此,猪丹毒杆菌的血清型与流行病学和免疫的关系如何有待深入研究。为了有助于开展这方面的工作,我们将阐述较全面的1975年Howard.w.Dunne的《猪病学》第四版猪丹毒杆菌血清学特性一章全文译出,供参考。     

威宁草海黑颈鹤灰鹤新城疫病毒的分离鉴定

本文首次从黑颈鹤和灰鹤自然病例中分离出新城疫病毒(NDV),病毒代号:NDV—C_1(黑颈鹤分离)。NDV—C_2,NDV—C_3(灰鹤分离)。NDV—C_1、C_2、C_3适应鸡胚细胞,并在鸡胚细胞上传代至5代,其毒力致死7日龄雏鸡(非免疫鸡),毒价10~(-7)LD_(50)/ml能致死8日龄鸡胚其毒价为10~(-8)ELD_(50)/0.1m,对鸡胚细胞能产生病变:胞浆膨大,核浓缩并有细胞集落现象。病毒的生物学特性:形态呈球形,有囊膜,纤突和核,病毒粒子大小直径113毫微米,纤毛长约8毫微米。对酸不稳定,核酸型为RNA,能与鸡豚鼠和人的“O”型血球凝集。血清学鉴定结果:新城疫高免血清和康复鹤血清能抑制NDV—C对鸡血球的凝集,禽流感免疫血清则不能抑制,抑制效价分别为128~x和32~x。通过8日龄鸡胚中和试验。鸡新城疫免疫血清中和NDV—C,其中和指数为1862,用50％终点中和计算法,中和指数>50。用新城疫Ⅰ系苗免病40日龄鸡测对NDV—C和保护率,结果对NDV—C_1 9/10保护,对NDV—C_2~10 O/10,对NDV—C_3 10/10保护。鉴定结果:NDV—C_1、C_2、C_3均属副粘病毒属中的新城疫病毒。     

猪丹毒灭活疫苗效力检验血清学方法建立

建立了猪丹毒丝菌抗体竞争ELISA检测方法,用于猪丹毒疫苗效力检验。用SpaA蛋白(纯度90%)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的SpaA蛋白单克隆抗体,建立猪丹毒丝菌竞争ELISA抗体检测方法,确定检测结果的判定标准,并对该方法的特异性、敏感性、重复性(批间重复性和批内重复性)等进行评价。建立效力检验血清学方法与免疫攻毒法的平行关系,并对两种方法符合率进行评价。结果表明,SpaA的最佳包被浓度为2.0 ng/μL,阴阳性对照血清的最佳稀释倍数为1∶75,HRP标记的单克隆抗体的最佳工作浓度为0.2 ng/μL。ELISA结果判定标准为血清样本抑制率PI≥8.0%时判定为阳性,PI<8.0%判定为阴性。该方法特异性良好,与空白小鼠阴性血清及A型和B型猪多杀性巴氏杆菌阳性血清均不发生交叉反应;敏感性良好,与敏感性血清样品可呈现不同梯度抑制率;重复性良好,批内重复和批间重复性试验结果变异系数均小于10%;与效力检验免疫攻毒法具备平行关系,小鼠血清效价≥1∶100时可抵抗1000 MLD强毒攻击;对用不同冻干代次菌种制备的4批猪丹毒丝菌灭活抗原和来自4家企业的7批猪丹毒灭活疫苗进行检测并...     

关于家兔人工誘发排卵的研究

于1963年4月—1964年7月共观察了以下三种不同处理对母兎誘发排卵的效果:1.强迫配种,2.注射人絨毛膜促性腺激素(国产),3.注射孕馬血清(自制)。于繁殖旺季(4—6月)进行强迫配种試驗,共用73只母兎,首先剖腹观察了8只发情母兎和11只休情母兎卵巢上卵泡存在的情况,其大卵泡平均数差异不显著(P>0.05),而发情兎的小卵泡平均数多于休情兎者,差异显著(P<0.05)。8只經强迫配种的休情兎 中,有5只排卵占62.5％),平均排卵数为6.4土1.9;8只发情母兎經配种后全部排卵,平均排卵数为7.4土2.3,两者排卵数差异为不显著(P>0.05)。另20只强迫配种母兎有12只产仔(占60％),平均产仔5.5个。18只发情配种的母兎,有17只妊娠(94.4％)平均产仔数为6.7个,据解剖观察,卵巢中有黄体存在的休情母兎,經强迫配种后未曾引起排卵,这样就降低了强迫配种休情母兎的排卵率。于繁殖淡季(1963.10—1964.1)用国产人絨毛膜促性腺激素(簡称HCG)30,60,100或150单位处理了19只休情母兎,6只发情前期及8只发情期母兎,在19只休情母兎中,除用150单位HCG处理的5只外,其他(包括5只有黄体存在的母兎)全部排卵,在冲出的36个卵子中无受精者。其他14只发情前期和发情期母兎經处理后全部排卵,在冲得的56个卵子中,除三个卵子因母兎子宫角有肉瘤堵塞而未能受精外,其他卵子全部为受精卵。于繁殖旺季(1964.5)用HCG处理的10只休情母兎,除卵巢上有黄体存在的两只母兎的卵子未受精外,其他母兎所排的卵子全部受精,初步說明用HCG誘发母兎排卵的受精效果和季节及母兎的生理状态有关,所用HCG的剂量以每只30—100单位效果較好,而150单位效果不佳。 1964年6—7月对25只休情母兎用孕馬血清(簡称PMS)进行誘发排卵試驗,以120—140小白鼠单位PMS先行激发注射(皮下),再用60单位PMS加100单位HCG做排卵注射(靜脉)者效果較好,中型兎平均排卵数为14—16.7(个別达22个);大型兎平均排卵数为27.8个(个別可达34—39个),說明适量的PMS可以引起母觅超数排卵,比一般正常排卵数提高一倍以上。过大剂量的PMS(如用360小白鼠单位以上做激发注射)則降低排卵数和影响受精效果。     

牛血清中非特异性因子对貉传染性肠炎病毒增殖的抑制作用

7例从丹麦进口的成牛血清,5例本地成牛血清、3例初生犊牛血清及1例胎牛血清对貉传染性肠炎病毒核内包涵体形成抑制率(平均值)分别为71.6％、77.1％、5.8％及23.4％,30例从丹麦进口成年牛血清、12例本地成年牛血清、12例初生犊牛血清及1例胎牛血清对REV的红细胞凝集抑制价平均分别为1:72.4、1:68、1:54.6及1:64。在有牛血清存在的情况下,应用组织培养增殖病毒时,REV的红细胞凝集价明显下降。牛血清中的抑制因子对猫胎肾细胞株具有亲和性。该抑制因子不是来自抗REV或者与REV有交叉反应的某种病毒的抗体,而是种非特异性抑制因子。     

甲硝唑对鸡新城疫病活疫苗免疫效果影响的观察

目的:分析甲硝唑对鸡新城疫病活疫苗免疫效果的影响。方法:选取30只1日龄黄羽鸡雏,随机分为3组:甲硝唑A组、甲硝唑B组和空白对照组。甲硝唑A组采用10 mg/kg甲硝唑免疫,甲硝唑B组则采用100 mg/kg甲硝唑免疫,空白对照组则不采用任何药物免疫。并采用微量鸡新城疫红细胞凝集抑制实验来测定各组血清抗鸡新城疫病抗体滴度。结果:三组免疫前血清抗鸡新城疫病抗体滴度差异无统计学意义,在免疫14 d、28 d之后,甲硝唑A、B组血清抗鸡新城疫病抗体滴度明显高于空白对照组(p 0.05),且B组血清抗鸡新城疫病抗体滴度明显高于A组(p 0.05)。结论:甲硝唑的使用能够提高鸡血清抗鸡新城疫病抗体滴度,有助于提高免疫效果。     

禽流感病毒NP基因的真核表达及抗体检测芯片的建立

为建立一种检测A型禽流感病毒(AIV)抗体的蛋白芯片,本研究以AIV总RNA为模板,RT-PCR方法扩增NP基因,与真核表达载体pFastBacHTa连接,并在昆虫细胞中表达.重组蛋白经纯化及western blot鉴定,点样于醛基包被的载玻片上,制备检测AIV抗体的蛋白芯片.确定芯片反应最佳条件为:点样浓度2 mg/mL,固定24 h,1%BSA进行封闭,一抗稀释度1:100,二抗稀释度1:2000.利用蛋白芯片分别对15个亚型流感病毒免疫血清、SPF鸡血清、抗新城疫病毒血清、抗法氏囊病毒血清和现地血清样品进行检测,通过与血凝抑制试验比较,表明建立的蛋白芯片方法具有良好的灵敏性和特异性,为AIV抗体检测及制备检测AIV不同亚型或多种病原抗体的蛋白芯片提供方法.