猪流行性腹泻疫苗不同免疫程序的效果评估

为了探讨不同免疫程序对猪流行性腹泻疫苗免疫效果的影响,本试验选取猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗原、抗体双阴的怀孕母猪,随机分为5个组,每组25头,分别给予2次猪腹泻二联灭活苗、2次猪腹泻二联活苗、1次猪腹泻二联活苗+1次猪腹泻二联灭活苗、2次猪腹泻二联活苗+1次猪腹泻二联灭活苗和疫苗稀释液(对照组)免疫。母猪产仔当天收集初乳样本,采用ELISA法检测PEDV的IgA抗体,筛出优秀免疫组,同时进行母源抗体持续时间检测。结果显示：2次猪腹泻二联活苗+1次猪腹泻二联灭活苗免疫后抗体整齐度最好,乳汁中IgA抗体阳性率为97.5%,IgA抗体持续时间达12d以上;2次猪腹泻二联活苗免疫后乳汁中IgA抗体阳性率为93.75%,效果优于1次猪腹泻二联活苗+1次猪腹泻二联灭活苗免疫;2次猪腹泻二联灭活苗免疫后乳汁中IgA抗体阳性率为38.13%,抗体水平最差。结果表明,猪腹泻二联活苗单独2次免疫或与猪腹泻二联灭活苗组合使用效果优于猪腹泻二联灭活苗单独使用。     

基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDVIgA抗体间接ELISA方法的建立和评估

为快速准确地评价猪血清和乳汁中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体水平,本研究从4株PEDV单克隆抗体中筛选得到1株可高效捕获PEDV全病毒粒子(灭活的病毒细胞培养原液)的特异性IgG单克隆抗体8A3,将其用作检测孔内的包被抗体以捕获病毒粒子制备抗原板,从而建立了用于检测母猪血清和乳汁中PEDV特异性IgA抗体的间接ELISA方法。该方法中,单克隆抗体8A3的最适包被浓度为6.0μg/mL,阴性判定临界值(D_(450 nm))为0.34,且在检测中不与常见的猪病毒阳性血清反应。与传统的免疫过氧化物酶单层检测(immuno-peroxidase monolayer assay,IPMA)相比,所建立的ELISA方法检测阳性和阴性血清的符合率分别为98.7%(152/154)和98.0%(145/148);检测初乳和乳汁样品的阳性和阴性符合率分别为100%(60/60)和95.8%(23/24);检测初乳和泌乳期样品中的IgA水平与中和效价的趋势高度相关(kappa=0.835)。本研究建立的检测PEDV IgA的间接ELISA方法灵敏度、敏感性和特异性与传统方法高度一致,可简化检测步骤,适用于大规模评价临床样本乳汁和血清中PEDV IgA抗体的快速检测。     

猪病毒性腹泻(PED)疫苗免疫后母猪乳汁中PEDV IgA消长动态

为了解猪病毒性腹泻(PED)疫苗免疫后母猪乳汁中IgA抗体消长规律,筛选100头妊娠母猪,平均分为5组(4个试验组和1个对照组),采用"猪流行性腹泻病毒(PEDV)-猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)-猪轮状病毒(PoRV)三联弱毒疫苗"(PTR)和"PEDV-TGEV二联灭活疫苗"(PT)进行不同的免疫。其中,试验Ⅰ组产前40d和产前20d免疫PTR,试验Ⅱ组产前40d和产前20d免疫PT,试验Ⅲ组产前40d免疫PTR和产前20d免疫PT,试验Ⅳ组产前40d免疫PT和产前20d免疫PTR,对照组产前40d和产前20d注射生理盐水。通过PEDV IgA抗体检测试剂盒分别检测母猪分娩后0,1,2,3,5,7,10,14d各组乳汁中特异性PEDV IgA抗体水平。结果显示,试验组IgA水平明显高于对照组,其中试验Ⅰ、Ⅱ组与试验Ⅲ、Ⅳ组间差异极显著(P<0.01),而试验Ⅰ、Ⅱ组间以及试验Ⅲ、Ⅳ组间差异不显著(P<0.05)。结果表明,产前40d和产前20d交替使用PTR和PT的抗体滴度明显优于单一接种PTR或PT的抗体滴度。其中只注射PTR母猪分娩后10d乳汁对仔猪没有保护力,注射PT母猪分娩后7d乳汁对仔猪没有保护力。通过本试验基本上了解了PEDV母源抗体消长规律,为今后规模化猪场制定免疫程序提供理论支持。     

2016年春季山西部分种猪场乳猪暴发流行性腹泻的调查

2016年春季山西部分种猪场乳猪暴发腹泻,通过在山西太原、祁县、介休、昔阳、临汾、翼城、离石、朔州8个地市的10个临床表现腹泻症状的规模化种猪场进行调研,对乳猪病死情况进行了统计分析,并采集39份病死猪的小肠内容物进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)检测;同时采集109份血清和85份乳汁进行PEDV IgA抗体检测。结果显示:1—3月份10个猪场共有8 326头乳猪发生腹泻,死亡6 266头,死亡率为75.26%;病原检测PEDV阳性率为64.1%,TGEV阳性率为2.56%;血清中PEDV IgA抗体的阳性率为32.11%,乳汁中PEDV IgA抗体的阳性率为96.47%。病原检测结果表明,2016年春季山西省规模化种猪场乳猪腹泻的主要病原为PEDV,乳汁中PEDV IgA抗体水平与PEDV疫苗免疫效果或野毒感染呈正相关。     

乳汁中猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,研究以PEDV重组N蛋白和纯化全病毒作为包被抗原,方阵滴定法优化反应条件,建立了两种检测猪乳汁中PEDV IgA抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组N蛋白和纯化全病毒的最佳包被抗原浓度均为2μg/mL,检测样品最佳检测稀释度分别为1∶10和1∶30,重复性试验的变异系数均小于10%,PEDV阳性乳汁的最低检测稀释倍数分别为1∶320和1∶960,对猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病病毒等阳性乳汁均无交叉反应性,两种方法对临床样品检测符合率为97.48%。表明两种方法均具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于检测和评价乳汁中特异性PEDV IgA抗体的水平。     

猪流行性腹泻免疫抗体的ELISA检测及其与琼脂扩散试验相关性分析

为了解不同免疫程序对母猪初乳中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体水平的影响,以及PEDV抗体的ELISA与琼脂扩散试验(琼扩试验)检测相关性,选取5家免疫程序不同的大型猪场,用PEDV IgA抗体ELISA检测试剂盒对其初乳抗体水平进行检测,并根据检测结果,选OD值大小不同的5组初乳样本,琼扩法检测其PEDV抗体效价并分析。结果显示,5家猪场初乳PEDV IgA抗体阳性率均较高,阳性率为94.00%~100%,阳性样本平均OD值为1.858 8~2.148 0,差异不显著;PEDV抗体琼扩几何平均效价与ELISA检测的OD值存在正相关性。分析表明,母猪产前进行猪流行性腹泻活疫苗和灭活苗各一次的组合免疫较为合理;对PEDV抗体检测琼扩法一定程度上可做为ELISA法的替代。     

猪流行性腹泻抗体PPA—ELISA检测方法的建立及其应用

应用纯化猪流行性腹泻病毒抗原(PEDV)和酶标葡萄球菌A蛋白(PPA)建立的A-ELISA,通过对免疫猪血清PEDV抗体的动态测定及临床自然感染猪血清抗体水平的检测表明,该法敏感、特异、简便、快速,尤适于基层猪场大批血清样品抗体水平的普查与检测.     

猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)pET-32a-S1D重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-2l(DE3)感受态细胞,并成功表达目的蛋白S1D。以纯化后蛋白作为抗原,建立了针对乳汁中PEDV的IgA抗体间接ELISA检测方法。确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;乳汁最佳稀释度为1∶10。该检测方法敏感性高,可重复性好。该研究建立的间接ELISA方法为母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒IgA抗体的检测提供了一种快速简便的诊断方法。     

试验室评估猪流行性腹泻活疫苗与灭活疫苗免疫仔猪抗体反应

了解猪流行性腹泻疫苗免疫猪只后产生的抗体水平对防控猪流行性腹泻病有重要意义。本试验通过对未感染过 PEDV的猪只进行PED活疫苗和灭活疫苗免疫，综合评估所产生的中和抗体、IgA 和IgG 抗体水平。结果显示，PED活疫苗免疫可以产生低水平（约1∶10）的中和抗体，PED 灭活疫苗免疫可以产生较高（约1∶180）的中和抗体；PED 活疫苗和PED灭活疫苗免疫均不能产生IgA 抗体，免疫前后IgA 均为阴性；PED 活疫苗免疫产生IgG 抗体为阴性，PED 灭活疫苗免疫可以产生较高的IgG 抗体（S/P 值约3.0）。通过此项研究，可以对PEDV 预防提供一定指导。     

猪流行性腹泻病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究以原核表达的重组N蛋白作为检测抗原,优化ELISA反应条件,建立了PEDV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对PEDV血清检测为阳性,对猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒感染猪的阳性血清检测结果均为阴性;其批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。采用建立的ELISA方法检测了130份临床样品,其中78份血清样品为PEDV抗体阳性。表明建立的以重组N蛋白为包被抗原检测PEDV血清抗体的方法可以用于检测PEDV感染及相关的流行病学调查。     

母猪流行性腹泻返饲后免疫应答评估

当前,猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行广、危害严重。除进行疫苗免疫工作外,返饲常常做为猪场控制猪流行性腹泻的重要手段。笔者用6头育肥后期猪模拟母猪返饲(攻毒)实验,研究母猪返饲后排毒情况与血清抗体消长变化,来探究母猪返饲最佳时机以及如何避免返饲带来的风险。结果表明,试验猪在返饲后第2、3天相继发生腹泻并检测到PEDV,在返饲后11 d猪血清中IgG抗体明显上升,并在攻毒后第20天IgA与IgG检测值均达到峰值,在攻毒后第15天唾液与粪便均检测不到病毒。说明,生产上在产前15 d到30 d之间返饲效果较好,病毒感染仔猪的风险最低。为临床防控该病提供理论依据。     

猪体内PEDV病原含量与血清中PEDV抗体水平之间的关系初探

旨在探究猪体内猪流行性腹泻病毒(PEDV)病原含量与血清中PEDV抗体水平之间的关系。以浙江某规模猪场为例,用横截面模型,分别采集不同日龄阶段商品猪口腔液与血清样本,应用荧光定量PCR和ELISA方法,分别检测两种样本中PEDV的抗原和抗体。统计分析其消长规律,并对两种样本中病原含量和血清中抗体含量进行相关性分析。结果显示:消化道途径的感染是引发PEDV各种保护性免疫活动的起始点,当猪群PEDV感染强度达到一定限度(103copies/μL)时才会引起猪体内抗体水平的变化;在不同感染强度下,猪口腔液和血清中病原含量与抗体水平之间呈现不同的相关性。初步揭示了猪体内病原含量与血清中PEDV抗体水平之间存在的相关性,为猪流行性腹泻的临床诊断和防控监测提供了新的思路。     

检测猪流行性腹泻病毒S1蛋白抗体的间接ELISA方法

为了建立检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗体的间接ELISA方法,初步分析PED灭活疫苗免疫母猪所产仔猪的血清母源特异抗体动态,笔者应用重组PEDV部分纤突(spike,S)蛋白作为检测抗原,建立了基于PEDV S1蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并用该方法检测了产前4周用PED灭活疫苗免疫母猪的初乳、分娩当天血清及其仔猪1、7、14、21、28和35日龄(d)时血清中的PEDV抗体。结果显示:建立的间接ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒及猪轮状病毒的抗血清无交叉反应;敏感性高于免疫过氧化物酶单层试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),与IPMA检测结果的符合率为97.14%;批内和批间重复性试验的变异系数小于10%。免疫母猪初乳、分娩当天血清中的PEDV抗体阳性率为100%,初乳比血清中的平均抗体水平低;1d仔猪血清PEDV抗体阳性率为50%,平均抗体水平低,与初乳中的抗体水平接近,7d以后所有仔猪血清全部转为PEDV抗体阴性。建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法;产前用PEDV灭活疫苗给怀孕母猪免疫1次时,其所产仔猪血清中的母源特异抗体阳性率和抗体水平低,且维持时间短暂。     

猪流行性腹泻的防控实践

湖北某种猪场发生腹泻,经病原检测,确诊为猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染。进行猪流行性腹泻(PED)疫苗免疫、药物预防与对症治疗,结果表明,母猪产前免疫PED疫苗,可防止所产仔猪发生PED;而初产母猪对PED免疫力弱、最易感,其仔感染死亡更严重,需重点搞好后备猪预防;哺乳仔猪PED首发日龄与死亡率呈现高度负相关,10日龄内仔猪发病死亡率高达49.07%;发病仔猪口服补液剂配合静脉输液,对10日龄以上仔猪治愈效果明显。同时需搞好清洁卫生与消毒,阻止PED水平传播。     

猪PED疫苗不同免疫策略对经产母猪乳中IgA的影响

为探讨和评估猪PED疫苗不同免策略对经产母猪乳中IgA的影响,筛选出猪PED疫苗接种最佳方案,本试验以某规模猪场50头经产母猪及其商品后代为研究对象,分析比较了腹泻疫苗免疫后不同组别母猪产仔指标与母猪乳汁中的IgA抗体水平差异。结果显示,在产前25 d和产前10 d免疫腹泻疫苗可产生较好的免疫保护,对经产母猪推荐使用后海穴注射2次免疫灭活苗,保护力更好,保护时间更长,可保护仔猪在整个哺乳期免受PEDV的侵袭。     

从一个猪场的临床案例解析猪流行性腹泻的综合防制问题

案例猪场的临床表现和综合分析结果表明,猪流行性腹泻病毒(PEDV)通过胎盘垂直感染传播的机会不大;母源抗体对哺乳仔猪存在较坚强的免疫保护。由于猪流行性腹泻(PED)发病比较急,如果空栏消毒不到位,仔猪在母源抗体对其产生有效免疫保护之前就已经接触到PEDV,生产上试图加强免疫或返饲母猪以期通过母源抗体保护仔猪的目的很难实现。因此,对PED的综合防制,关键要抓好3个环节:1)提高母猪的抗体水平,为仔猪提供高效的母源抗体免疫保护。2)加强对哺乳仔猪周围环境的消毒和空气净化,避免仔猪在健全的母源抗体免疫保护体系建立之前接触PEDV。3)创造条件让初生仔猪尽早吮吸初乳,快速建立起母源抗体对仔猪的免疫保护体系。     

基于G1亚型的猪流行性腹泻病毒活疫苗对日本G2亚型田间毒株的效力观察

背景:猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种致死性传染病,其主要症状是哺乳仔猪水样腹泻。自20世纪90年代末以来,日本开始使用基于G1亚型的PED活疫苗,甚至在2013年新的基因亚型出现之后,G1亚型活疫苗仍在广泛使用。该研究我们评价了一种传统的PED活疫苗在试验和田间条件下对新流行的G2亚型野毒株的免疫效果。方法:两头怀孕母猪在分娩前接种了两次活疫苗。一头怀孕母猪作为阴性对照。所有新生仔猪攻毒G2亚型病毒,免疫后7 d监测临床症状。用病毒中和试验检测母猪血清和乳汁中PEDV特异性免疫应答。此外,该研究比较了接种和不接种PED活疫苗猪场的哺乳期仔猪PED发病后死亡率,以评价PED活疫苗的田间使用效果。结果:无论接种与否,受到攻击的仔猪都表现出水样腹泻。然而,来自接种疫苗的母猪所产仔猪攻毒后第4天临床评分有了明显的提高。试验结束时,免疫组仔猪存活率为80%,对照组为0。试验期间,未免疫母猪血清和乳汁中和抗体效价均为阴性,而免疫母猪的抗体效价较高。与未接种疫苗的饲养场相比,接种疫苗的饲养场在PED发病后显著降低了哺乳仔猪的死亡率。结论:传统的PED活疫苗在试验和田间条件下均能诱导母猪产生乳汁免疫,并对G2亚型病毒有部分保护作用。     

猪初乳中PEDV IgA抗体捕获ELISA检测方法的建立及其初步应用

为建立评价猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗免疫效力的方法，本研究利用纯化的PEDV免疫BALB/c小鼠，按照常规方法制备PEDV全病毒单克隆抗体(MAb)作为捕获抗体，PEDV细胞培养上清为夹心抗原，HRP标记的羊抗猪IgA为二抗，采用棋盘滴定法对各反应条件优化后建立了用于猪初乳中PEDV IgA检测的捕获ELISA方法，并确定其临界值为0.25。采用该捕获ELISA对PEDV、PCV2b、PRRSV、PRV、JEV、PPV、FMDV与CSFV IgA抗体阳性猪初乳进行检测，结果显示，除PEDV IgA抗体阳性猪初乳检测结果为阳性外，其他病毒抗体阳性猪初乳检测结果均为阴性，表明该方法特异性强。采用该方法和BIONOTE PEDV IgA试剂盒对从1∶10开始2倍倍比稀释的16个稀释度的阳性猪初乳样品检测，结果显示该方法对阳性样品检测的最大稀释度为1∶40 960，是BIONOTE PEDV IgA试剂盒敏感性的16倍(1∶2 560)，表明本研究建立方法的敏感性高。分别采用同一批次和不同批次制备的MAb包被的ELISA板分别检测5份PEDV IgA抗体阳性和1份PEDV IgA抗体阴性...     

猪流行性腹泻灭活疫苗的临床免疫效果评价

为防控猪流行性腹泻,筛选可靠的免疫方式,研究采用与猪流行性腹泻病毒毒株序列同源性最高的猪流行性腹泻灭活疫苗进行紧急免疫,于产前30、15 d分别免疫妊娠母猪,并检测免疫前后母猪的血清和初乳中猪流行性腹泻病毒中和抗体及免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)特异性抗体.结果表明,免疫后母猪的血清和初乳均产生高水平且...     

母猪健康度对哺乳仔猪腹泻的影响

为了研究母猪健康度对哺乳仔猪腹泻的影响,试验对4个发生哺乳仔猪腹泻猪场的母猪和仔猪血液样品、乳汁样品、仔猪肝脏组织样品及仔猪小肠内容物样品进行母猪健康指数、仔猪血液生化指标、黄曲霉毒素B_1(AFB_1)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测。结果表明:哺乳仔猪腹泻与母猪健康指数、中毒指数、免疫指数、过敏指数、营养过剩或不足、母猪乳汁和仔猪肝脏中AFB_1的含量、肝脏功能、体液免疫和细胞免疫、仔猪炎症及PEDV呈正相关。说明母猪中毒、免疫力低下和健康状况不良是引起哺乳仔猪腹泻的重要因素。