11株瘤胃源芽孢杆菌生理学特性研究

试验对已筛选的11株瘤胃源芽孢杆菌的产酶活力、耐酸、耐胆盐和抑菌活性及菌株间相容性进行研究。采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)测定纤维素酶的活力,涂布平板计数法测定菌株的耐酸性、耐胆盐等特性,牛津杯法测定抑菌活性,滤纸片法进行室内相容性试验。结果显示,菌株T-2、T-3和T-10产纤维素酶的酶活力较高;菌株T-2、T-5、T-7、T-8和T-9表现较强的耐酸能力;菌株T-4、T-5、T-9和T-11表现较强的耐胆盐能力。菌株T-4和T-7对副溶血弧菌的抑菌活性较强,T-7对产气杆菌的抑菌活性最强,T-5、T-9、T-10对大肠杆菌抑菌活性较强,而T-3对藤黄八叠球菌指示菌的抑菌性最强。室内相容性试验结果表明,11株芽孢杆菌部分菌株之间存在颉颃作用,由此筛选出优良菌株的复配组合,抑菌可能的最优复配组合为T-3、T-4、T-5;T-3、T-4、T-10;T-4、T-5、T-10;T-3、T-7、T-10。纤维素酶活力较强时可能的最优复配组合为T-2、T-3、T-5;T-2、T-3、T-10;T-2、T-5、T-10;T-3、T-5、T-6;T-3、T-5、T-10。本试验可为动物饲料的研究和开发提供一定的参考依据。     

驴源枯草芽孢杆菌分离鉴定及生物学特性

为分离驴源具有抑菌活性的优良芽孢杆菌,本试验通过分离培养和形态观察,从健康驴新鲜粪便样品中分离芽孢杆菌,采用牛津杯法初步筛选具抑菌活性目标菌株,并进行生理生化和分子鉴定,研究其产酶活性、抑菌活性、耐酸性和耐胆盐性能、药物敏感性。结果显示：筛选到两株对金黄色葡萄球菌有强抑制作用的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,编号分别为LV1和LV2。两菌株具有很强的耐酸、耐胆盐特性,能产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶,并对检测用9种抗生素都敏感。结果表明,两株驴源枯草芽孢杆菌LV1和LV2具备良好的抑制金黄色葡萄球菌、产酶和耐酸、耐胆盐等益生活性,可作为研发驴用微生态制剂的潜在益生菌菌株。 [关键词] 驴|枯草芽孢杆菌|金黄色葡萄球菌|微生态制剂     

几种商用益生芽孢杆菌特性的比较研究

为比较几种商用益生芽孢的菌株特性,为芽孢杆菌的选育提供理论基础,本试验收集整理了15种药用(Y1~Y6)和饲用益生芽孢杆菌(S7~S15)产品,对其芽孢杆菌进行分离鉴定,分别从产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶等酶活特性,抗菌活性,耐酸和耐0.3%胆盐稳定性,抗生素敏感性,耗氧及生长速率测试等方面对芽孢杆菌特性进行了比较研究。结果显示,分离的15株芽孢杆菌均能产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶,但不同菌株产酶能力差异较大,S9菌株表现出较高的产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶活力;所有分离的芽孢杆菌均能对金黄色葡萄球菌及藤黄微球菌产生显著抑制活性,但只有7株芽孢杆菌(Y2、Y6、S7、S9、S10、S11、S12)可对大肠杆菌产生抑制作用,尤其是S9菌株综合抗菌能力最强。S9、Y2和S8的营养体细胞具有较高的耐酸能力,S9、Y2菌株在0.3%胆盐环境中存活率超过90%。15株芽孢杆菌中有3株饲用来源菌株(S10、S12、S13)表现出对红霉素的耐受,S10菌株对四环素耐受。此外,S9菌株具有较快的耗氧速率和生长速率。上述结果表明,S9菌株(解淀粉芽孢杆菌)的益生特性更为优良,本试验结果可为芽孢杆菌益生菌的选育及活性评价提供参考依据。     

几种商用益生芽孢杆菌特性的比较研究

为比较几种商用益生芽孢的菌株特性，为芽孢杆菌的选育提供理论基础，本试验收集整理了15种药用（Y1~Y6）和饲用益生芽孢杆菌（S7~S15）产品，对其芽孢杆菌进行分离鉴定，分别从产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶等酶活特性，抗菌活性，耐酸和耐0.3%胆盐稳定性，抗生素敏感性，耗氧及生长速率测试等方面对芽孢杆菌特性进行了比较研究。结果显示，分离的15株芽孢杆菌均能产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶，但不同菌株产酶能力差异较大，S9菌株表现出较高的产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶活力；所有分离的芽孢杆菌均能对金黄色葡萄球菌及藤黄微球菌产生显著抑制活性，但只有7株芽孢杆菌（Y2、Y6、S7、S9、S10、S11、S12）可对大肠杆菌产生抑制作用，尤其是S9菌株综合抗菌能力最强。S9、Y2和S8的营养体细胞具有较高的耐酸能力，S9、Y2菌株在0.3%胆盐环境中存活率超过90%。15株芽孢杆菌中有3株饲用来源菌株（S10、S12、S13）表现出对红霉素的耐受，S10菌株对四环素耐受。此外，S9菌株具有较快的耗氧速率和生长速率。上述结果表明，S9菌株（解淀粉芽孢杆菌）的益生特性更为优良，本试验结果可为芽孢杆菌益生菌的选育及活性评价提供参考依据。     

肉鸡盲肠中芽孢杆菌的分离、筛选与鉴定

通过形态学研究、革兰氏染色、抑菌试验、耐酸和耐胆盐等方法的测试研究,从健康肉鸡的盲肠中分离、筛选出1株芽孢杆菌。它对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌均有较强抑制作用,且有较强的耐酸和耐胆盐能力,再利用16S r DNA序列同源性比较分析,确定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。     

猪源芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

从自然生长的健康猪肠道中分离到13株芽孢杆菌,通过生理生化试验初步鉴定其中9株为枯草芽孢杆菌,2株为巨大芽孢杆菌,1株为地衣芽孢杆菌,1株为凝结芽孢杆菌;对这13株芽孢杆菌分别进行了耐酸性试验、耐胆盐试验、体外抑菌试验和动物安全性试验。结果表明,其中1株地衣芽孢杆菌B7株和1株枯草芽孢杆菌B9株均有较强的耐酸、耐胆盐能力,对致病性大肠杆菌具有较好的体外抑制能力,且均安全无毒,可作为动物用益生菌制剂的候选菌种。     

猪源益生芽孢杆菌的分离鉴定与生物学特性分析

本研究旨在从健康猪肠道正常菌群中筛选出性能良好的芽孢杆菌,以用于提高饲料利用率、减少猪消化道感染及减少感染后抗生素的使用。本研究精选重庆偏远山区从未添食配合饲料且生产性能优良的经产母猪,从其新鲜粪便中分离耐酸、耐胆盐的芽孢杆菌,进一步筛选能同时产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶的菌株,最后进行生化鉴定和基于16S r DNA序列的分子鉴定。结果表明,试验共筛选出7株能同时分泌淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶的芽孢杆菌,它们在p H3.0条件下处理2 h存活率为30%~90%,在0.5%胆盐中处理2 h存活率为40%~100%。经生化鉴定与分子鉴定为1株嗜热脂肪芽孢杆菌,1株地衣芽孢杆菌,5株枯草芽孢杆菌。由结果可知,本研究筛选的7株芽孢杆菌能耐受低p H和高胆盐环境,且具备同时分泌淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶3种胞外酶的能力。     

一株藏绵羊源短小芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为获得来源于藏绵羊的益生菌菌株,对健康母藏绵羊新鲜粪便进行90 ℃水浴处理5 min以筛选具有抗逆性的芽孢杆菌,再综合形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析进行鉴定,通过抑菌试验、耐酸、耐胆盐试验及产水解酶试验等方法对其生物学特性进行研究。结果显示,从新鲜粪便样品中分离到的芽孢杆菌菌株SWUN-G43对大肠杆菌和沙门氏菌有明显的抑菌效果,通过分析鉴定其为短小芽孢杆菌,该菌株在pH 2.0的环境中存活率为50.43%,在0.3%胆盐环境中存活率为44.35%,可产生蛋白酶和纤维素酶,对12种常用的抗生素具有很高的敏感性。从试验结果可分析出该短小芽孢杆菌(SWUN-G43)有一定的抗逆性和潜在的益生能力,且该菌株不含耐药质粒,不会在动物肠道微生态系统中造成抗生素抗性的水平传递,具有作为微生态添加剂开发的潜力。     

鸡源抗逆性芽孢杆菌的分离鉴定

试验通过对健康肉鸡盲肠内容物高温处理后,筛选获得3株芽孢杆菌疑似菌,并对其进行耐酸、耐胆盐及抑菌试验,最终获得1株抗逆性最强的菌株Y1,并对其进行形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列同源性分析,最终确定其为凝结芽孢杆菌。     

发酵饲料用具有潜在益生功能芽孢杆菌的筛选及性质研究

试验旨在筛选1株发酵饲料用拮抗大肠杆菌、沙门氏菌、痢疾杆菌的益生芽孢杆菌菌株。通过十字划线法和平板扩散法进行拮抗大肠杆菌、沙门氏菌、痢疾杆菌菌株的筛选,将筛选出的具有较强抑菌活性的菌株进行菌种鉴定,研究其在不同pH值、温度、胆盐浓度下的生长势,以及代谢产物的酶活力。结果表明:筛选得到3株可同时拮抗大肠杆菌、沙门氏菌以及痢疾杆菌的芽孢杆菌菌株,分别为B-1d、B-2d、A14,经过形态学观察和16S rDNA序列分析初步确定B-1d为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),B-2d、A14为莫哈韦芽孢杆菌(Bacillus Mojave)。3株菌均可以在27～47℃正常繁殖,在pH值4.5～6.5之间能正常生长,在0.6 g/L的胆盐下仍可以生长,还代谢产生蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶。试验得到了3株具有潜在益生功能的发酵饲料用芽孢杆菌菌株。     

唾液乳杆菌的生长特性及抑菌作用

为了探讨唾液乳杆菌的生长特性及抑菌作用,测定2株唾液乳杆菌的生长曲线,并选用口腔变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌及金黄色葡萄球菌为指示菌,采用牛津杯法进行体外抑菌实验.结果表明:2株唾液乳杆菌分别在接种2h和4h进入对数生长期,8h进入对数生长末期,14h和16h进入稳定期;2株唾液乳杆菌菌液及代谢产物对口腔变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌及金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,对口腔变形链球菌及牙龈卟啉单胞菌的抑菌作用强于金黄色葡萄球菌;2株唾液乳杆菌菌体及调整pH值为7.0的代谢产物没有抑菌作用;2株唾液乳杆菌的抑菌能力主要来自菌体的代谢产物,代谢产物中起抑菌作用的成分为酸或酸依赖性物质.     

Study on the Isolation,Identification and Biological Characteristics of a Strain of Bacillus pumilus Isolated from Tibetan Sheep

In order to select probiotic strains with probiotic potential isolated from Tibetan sheep,fresh excreta of the healthy female Tibetan sheep was processed with 90 ℃ water-curing treatment for 5 min,and Bacillus with resistance were screened.The morphological,physiological and biochemical characteristics and 16S rDNA sequence of the Bacillus were comprehensively analyzed and identified.Biochemical characteristics were studied by using antimicrobial test,acid resisting tests and bile salt resisting tests,hydrolytic enzyme test and other methods.The results showed that the Bacillus SWUN-G43 isolated from fresh excreta of Tibetan sheep had a significant antibacterial effect on E.coli and Salmonella.Through analysis and identification,the Bacillus SWUN-G43 was Bacillus pumilus.Its survival rate was 50.43% under the environment of pH 2.0 and 44.35% under the environment of 0.3% bile salt.It could produce protease and cellulase and was sensitive to 12 kinds of commonly used antibiotics.By studying,the Bacillus pumilus(SWUN-G43) had a certain degree of resistance and potential probiotic ability.Besides,the strain didn't contain R-plasmid and would not cause horizontal transmission of antibiotic resistance in the intestinal microecosystem.It also had the potential to be developed as a micro ecological additive.     

燕麦根腐病拮抗菌的筛选及抑菌特性研究

本研究采用平板对峙法从健康燕麦根际筛选能够拮抗燕麦根腐病致病菌(禾谷镰刀菌)的菌株,同时,将早期研究获得的生防菌株纳入筛选范围。采用透明圈法测定菌株产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶以及产铁载体的能力,对菌株进行复筛,并将产酶能力优良的菌株进行定量测定;利用酸沉淀法进行脂肽类物质粗提并验证其抑菌能力,对生防特性优良的菌株进行16S rRNA分析鉴定。结果表明,共得到4株综合特性优良的菌株,抑菌率均达到65%以上;铁载体活性34.33%～59.57%、蛋白酶活性36.88～70.12 U·mL^-1、纤维素酶活性7.68～22.28 U·mL^-1、淀粉酶活性80.56～167.26 U·mL^-1;菌株分泌的脂肽类物质对病原菌抑菌率最高为68%。通过16S rRNA鉴定,4株菌分别为枯草芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、萎缩芽孢杆菌和皮尔瑞俄类芽孢杆菌。本研究筛选的4株生防细菌均可分泌多种抑制菌物质,具有进一步开发为生物杀菌剂的潜力。     

健康奶牛子宫颈乳酸菌筛选方法的建立及其抑菌活性分析

为筛选用于防制奶牛子宫炎的乳酸菌菌株,本试验选取产后30~50 d的健康奶牛,采集子宫颈口处分泌物,利用MRS选择性培养基进行乳酸菌初步筛选。纯化后的菌株进行革兰氏染色镜检,将具有乳酸球菌或乳酸杆菌典型形态的疑似菌株进行针对性生化鉴定。提取分离菌株的基因组DNA,扩增其16S rDNA全序列并测序,将所得序列与NCBI数据库中的相应序列进行同源性比对分析。采用琼脂扩散法检测分离菌株对致病性金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性,并检测分离菌株对山羊上皮细胞的黏附活性。结果显示,经染色镜检、生化鉴定和16S rDNA测序分析,得到13株乳酸菌,其中5株具有较强抑菌活性,6株具有较强黏附上皮细胞的能力,7、12和23号3株兼有良好的抑菌活性和黏附上皮细胞能力。综上,本试验建立了健康奶牛子宫颈中乳酸菌的筛选方法,得到3株具有良好益生特性的乳酸菌,为制备微生态制剂提供了基础材料,对防制奶牛子宫炎具有重要意义。     

一株解淀粉芽孢杆菌的特性及抑菌活性研究

试验旨在对一株牛瘤胃源解淀粉芽孢杆菌的生长曲线、耐酸性和耐胆酸盐性等特性进行分析，同时对该菌发酵产物的抑菌活性和抑菌活性稳定性进行测定。采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定耐酸性和耐胆酸盐性等特性，牛津杯法测定抑菌活性和抑菌活性稳定性。结果显示，该菌生长4 h时进入对数生长期，20 h后生长趋于稳定，进入生长稳定期；同时该菌表现出较好的耐酸性，在pH 3.0~7.0时存活率为23.8%~90.6%；有较好的耐胆酸盐性，在0.1%~0.4%的胆酸盐中存活率为64.2%~83.6%。以大肠杆菌（Escherichia coli）、副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）、藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）和产气杆菌（Aerogenes）等细菌和黑曲霉（Aspergillus niger）、黑根霉（Rhizopus nigricans）等霉菌作指示菌进行抑菌试验发现，该菌的发酵产物具有抑菌活性，同时其抑菌活性物质的耐热性和耐酸性较好。本试验通过对该解淀粉芽孢杆菌的特性进行研究发现，该菌具有耐酸、耐胆酸盐等特性；其抑菌活性及抑菌稳定性较好，具有耐酸碱及耐高温特性。     

鸡源乳杆菌的分离鉴定及其益生特性研究

利用选择性培养、革兰氏染色、芽孢染色、糖发酵试验、经典生理生化试验、耐酸和耐胆盐试验等方法,成功地从健康鸡的肠道中分离、鉴定并筛选出1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳杆菌,命名为乳杆菌L3株。采用雏鸡安全性试验和肠黏液糖蛋白黏附性试验对乳杆菌L3株的安全性和黏附能力进行检测,证明所筛选的乳杆菌不仅对酸和胆盐的耐受性较好,且具有良好的安全性和肠道黏附能力。     

Screening and Identification of Laccase Fungi in Alpine Meadow北大核心CSCD

Nine strains of fungi that isolated from alpine meadow were used as research objects. The laccase-producing strains were identified by rDNA-ITS method. According to the strains, guaiacol, anthrone, catechol and neighbors were identified. Growth on selective medium of toluidine, o-toluidine, crnaphthol, benzidine, gallic acid as substrate, colony size, size of the color circle produced by laccase-catalyzed redox reaction, and the degree of color depth, the laccase-producing fungus is firstly screened, and the laccase activity is determined by the liquid-producing enzyme fermentation method using ABTS as a substrate for re-screening. The results showed that strain 1. 9 was Uncultured fungus clone. 2. la was Scytalidium, 310b was Marasmius tricolor, 2.1c was Saccharicola, 2. 3a was fungal sp, 2. 4d was Saccharicola. 10a was Marasmiusrotalis, 3. 7c was Alternaria. WB was Verticilliumlongisporum. The screening results showed that except for strain 3. 7c, the other 8 strains basically produced oxidative bands on the culture medium with guaiacol, anthrone, ortho-toluidine and benzidine as substrates, and cultured in gallic acid substrate. No oxidative bands were produced on the culture medium; strains 1. 9, 2. la, 310b, 2. 4d, 10a, 2. lc, and 2. 3a all had laccase activity, and strain 310b had stronger laccase activity than the other strains. © 2019 China Agricultural University. All rights reserved.