一株弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及致病性研究

为确定导致罗非鱼患病的原因,本试验对濒临死亡的罗非鱼进行无菌解剖,从心脏部位分离得到1株细菌,通过形态学观察、生理生化鉴定和16SrDNA分析,确定菌株为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)。药敏试验结果显示,该菌株具有很强的多重耐药性,测试的20种药物中,该菌株对恩诺沙星、青霉素等13种药物具有完全耐药性,仅对头孢曲松、头孢他啶、头孢拉定、哌拉西林、舒巴坦5种药物敏感。人工感染试验结果显示,该菌对草鱼、黄颡鱼、罗非鱼、禾花鲤具有较强的致病性。本试验结果阐明了罗非鱼患病的原因,同时在养殖过程中可指导养殖户合理用药。     

匙吻鲟致病性豚鼠气单胞菌的分离鉴定和致病性研究

为了确定匙吻鲟发病的原因,从患病匙吻鲟的表皮组织中分离病原菌,对其进行形态学观察、生理生化试验和16S r DNA基因的扩增并经序列分析构建系统发育树,同时测定该菌株的致病能力和对药物的敏感性,结果表明,该菌株为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)。人工感染试验结果显示,分离菌株对匙吻鲟具有很强的致病性,并同时对禾花鲤和罗非鱼也有较强的致病性。药物敏感结果显示,分离菌株对磺胺二甲嘧啶、多黏菌素B、氟苯尼考等5种药物完全耐药,对左氧沙星、链霉素、恩若沙星等10种药物的敏感性较强。     

罗非鱼竖鳞病病原维氏气单胞菌的分离鉴定与致病性研究

为研究罗非鱼竖鳞病病原菌的致病性,本试验从出现竖鳞症状的患病罗非鱼不同部位分离得到1株病原菌,命名为GXKJDX01,采用16S rDNA基因序列分析、细菌的形态学观察、生理生化鉴定、药敏试验和人工感染试验的方法对其研究。结果显示,致病菌株GXKJDX01为维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）;该菌株对青霉素G、红霉素、万古霉素等5种药物有高度的耐药性;对罗非鱼、黄颡鱼、泥鳅和禾花鲤均有较强的致病性。使用恩诺沙星、左氧沙星、头孢曲松等11种药物可有效对其进行防制。本试验首次报道维氏气单胞菌作为竖鳞病的案例,为其有效防控提供理论依据。     

早春季节罗非鱼源嗜水气单胞菌的分离鉴定

2012年早春季节广西柳州市某罗非鱼养殖场出现暴发性疾病,从患病罗非鱼的肝脏、肾脏和脾脏组织中分离到1株革兰氏阴性杆菌。通过生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定该菌为嗜水气单胞菌。人工感染试验结果显示,分离菌株对罗非鱼有很强的毒力,该菌注射浓度为1×10⁹ CFU时,可使健康罗非鱼在24 h内全部死亡;药物敏感试验结果显示,分离菌株仅对氨苄西林耐药,对氨曲南、氧氟沙星等15种抗生素敏感。本研究为早春季节罗非鱼疾病防控提供试验依据。     

胡子鲶致病性摩氏摩根菌的分离鉴定与致病性研究

本研究从患病胡子鲶体内分离得到一株菌,通过菌体形态观察、生理生化试验、16S rDNA分析及构建系统发育树对其进行分析,得出该致病菌为摩氏摩根菌。人工感染试验结果显示,该致病菌对胡子鲶具有较强的致病能力,同时对罗非鱼、泥鳅和禾花鲤也有很强的致病能力。药敏试验结果显示,KD01菌株对青霉素G、氨苄青霉素和新生霉素等药物有高度的耐药性,对复方新诺明、恩诺沙星和环丙沙星等药物敏感。本试验结果对胡子鲶出血性肠道坏死疾病研究提供有力的依据,同时可指导养殖户合理用药。     

广西罗非鱼主养区致病性链球菌及其耐药性调查

为了解致病性无乳链球菌在广西罗非鱼主养区的分布及其耐药性情况,对广西各地区发病罗非鱼进行现场采样,以常规方法从患病罗非鱼的脑、心脏和肝脏等组织分离细菌,人工回归感染试验确定分离菌株的致病性,以API 20 Strep和16S rRNA分别对菌株进行生化鉴定和分子鉴定,K-B药敏纸片扩散法检测菌株的耐药性。调查结果,从广西8个市12个县/区采集的672个罗非鱼病样中,有30个病样共检出致病性强的革兰氏阳性球菌30株,参考株总检出率4.46%,百色市和来宾市的病样中未分离到革兰氏阳性球菌;经鉴定,分离到的30株球菌均为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),与无乳链球菌(S.agalactiae)参考株JF423947、JQ039375、KF111315和JQ99015616SrRNA核苷酸的同源性最高(98.5%~100%);28种药物的药敏试验结果显示,对所有菌株敏感的药物只有盐酸沙拉沙星1种,对所有菌株耐药的药物有磺胺-6-甲氧嘧啶(钠)、磺胺对甲氧嘧啶和复方磺胺嘧啶3种。     

养殖型吉富罗非鱼暴发性死亡的病原菌分离鉴定及药敏测定

为查明广西全州县养殖吉富罗非鱼大批死亡的病原及其药物敏感性,为生产中有效防治该病提供参考。按常规方法从患病罗非鱼的腹水、肝脏和心脏中分离细菌,人工感染确定病原菌,以API 20NE生化鉴定和16S rRNA分子鉴定相结合的方法鉴定病原菌并确定其系统发育地位,K-B纸片扩散法检测病原菌的药物敏感性。试验结果,从患病吉富罗非鱼中分离到1株优势菌株GXQZ1,经API 20NE生化鉴定和16S rRNA分子鉴定为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides),与Plesiomonas shigelloides HRS12816L株的同源性最高(99.3%)。根据人工感染试验结果,认为该菌株是引起广西全州县养殖吉富罗非鱼大批死亡的病原菌。该菌对先锋Ⅴ、先锋Ⅵ、复方新诺明等12种药物高度和极度敏感,对苯唑青霉素等3种药物耐药。     

山羊临床型乳房炎主要病原菌分离鉴定及药敏试验

为调查四川省资阳市某规模化羊场暴发乳房炎的主要病原菌,无菌采集患病羊乳样45份,然后进行细菌分离、纯化及PCR鉴定,同时对分离菌株进行耐药性试验。共分离、鉴定出5株大肠埃希菌、30株金黄色葡萄球菌和25株链球菌。药敏试验结果显示,分离菌株对青霉素、氨苄西林、庆大霉素、红霉素及四环素类等多种药物有耐药性。本研究为该场山羊乳房炎的防控提供了依据。     

中华草龟恶臭假单胞菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为探明海口某龟鳖养殖场送检的发病中华草龟的病原，本试验从患病中华草龟体内分离得到一株优势生长菌（命名为J1）。经菌落培养、革兰氏染色观察、生理生化鉴定及16S rRNA序列比对分析，并进行攻毒及耐药性试验验证其致病性及药物敏感性。结果显示，该分离菌株在普通营养琼脂培养基上形成圆形、光滑、湿润黏稠、灰黄色、不透明的菌落；革兰氏染色镜检结果显示，该分离菌为革兰氏阴性短杆状；生理生化试验结果显示，分离菌具有运动性，果糖、柠檬酸盐、硝酸盐、氧化酶、接触酶和精氨酸双水解酶呈阳性，而葡萄糖产气、葡萄糖产酸、鸟氨酸脱羧酶、乳糖、麦芽糖、V-P试验等呈阴性；16S rRNA基因序列分析显示，该分离菌株与GenBank中登录的假单胞菌同源性最高；系统进化树显示，该分离菌与恶臭假单胞菌聚为一簇；人工攻毒试验证实分离菌可使中华草龟发病并死亡，临床症状和病理变化与自然发病龟相似；耐药性分析发现，分离菌株对妥布霉素、头孢拉定、庆大霉素等药物敏感，对克林霉素、四环素、氨苄西林、头孢克洛等多种药物耐药。本试验结果可为龟鳖疾病的诊断、预防和治疗提供有力的技术支撑和实践指导。     

一株罗非鱼无乳链球菌的分离鉴定及药敏试验

为确定东莞市某养殖场罗非鱼发病的原因,有针对性制定防治措施,采集发病罗非鱼的脑、肝脏、脾脏、肾脏等组织样品进行细菌分离培养鉴定,通过VITEK-2 Compact进行生化鉴定和16S rRNA基因序列分析以及系统进化树构建,并对分离菌株（DG210721）进行药敏试验。结果显示：分离纯化培养的菌株特征、形态和生化鉴定结果均与无乳链球菌相符;16S rRNA基因序列分析发现,分离菌株与罗非鱼无乳链球菌（JQ039371）同源性高达100%且亲缘关系最近;分离菌株对药物的敏感性由高到低依次是盐酸多西环素、恩诺沙星、甲砜霉素、氟苯尼考、氟甲喹、磺胺甲噁唑+甲氧苄啶、磺胺间甲氧嘧啶钠、硫酸新霉素。结果表明：该养殖场罗非鱼发病的原因之一是无乳链球菌感染;分离菌株遗传序列较稳定,并对部分临床使用的药物产生了一定的耐药性。结果提示,需要加强罗非鱼无乳链球菌感染的防控,定期采样检测,及时确诊,选用敏感药物进行科学防治。     

肉鸽大肠杆菌的分离与鉴定

为研究肉鸽大肠杆菌的生化特性、药敏情况、血清型和致病性。2010年1月江苏省某肉鸽场鸽群出现呼吸困难,死亡增多现象。对病死鸽剖检发现,以气囊炎和肺部坏死为主,无菌采集病料分离到1株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性鉴定,确定为大肠杆菌,微量凝集试验表明其血清型为O2。经过肺结节压片镜检,没有发现霉菌的菌丝;检测健康鸽和患病鸽各10只的鸽新城疫抗体,发现其抗体效价比较高且整齐度较好,两者之间的抗体无明显差异。对分离菌株进行药敏试验,结果表明对恩诺沙星等7种药物敏感,对阿莫西林等16种药物已产生了耐药性。将分离到的菌株接种21日龄雏鸽进行动物回归试验,死亡率达80%,说明该分离菌株对雏鸽具有较强的致病性。     

黄颡鱼迟钝爱德华菌的分离鉴定及其致病性研究

为了确定黄颡鱼发病的原因,试验从患病黄颡鱼体内分离得到1株病原菌,命名为GDYM20160809,通过形态学观察、生理生化特性鉴定、16S rDNA分析及系统进化树构建等方法对分离菌进行鉴定,采用滤纸片扩散法对分离菌进行药敏试验。结果显示,该分离菌为革兰氏阴性短杆菌,PCR扩增其16S rDNA片段,经测序及BLAST比对,显示其与迟钝爱德华菌（Edwardsiella tarda）的同源性达100%,结合生理生化鉴定结果确定分离菌为迟钝爱德华菌。药敏试验结果显示,分离菌对磺胺类药物、头孢类药物、青霉素、复方新诺明等药物敏感,对磺胺间甲氧嘧啶钠、新生霉素、多黏菌素B、阿米卡星、卡那霉素和万古霉素6种药物耐药;人工感染试验结果证实,菌株对罗非鱼、禾花鲤、草鱼和黄颡鱼都有很强的致病性。本试验结果为有效防控黄颡鱼细菌性疾病提供了理论依据,并可指导养殖户合理用药。     

一株鸭源维氏气单胞菌的分离鉴定与致病性的初步研究

江苏某养殖场种鸭突然发生散发性死亡,为了探究其死亡原因,本研究通过临床解剖观察、病原分离、生化试验、药敏试验、雏鸭人工感染试验和致病性试验对分离菌株进行检测。结果显示该分离菌为革兰阴性短杆菌,在麦康凯培养基和LB培养基中呈现圆形灰白色菌落,在血琼脂培养基中呈现出β溶血;16S rRNA基因序列分析结果显示该菌为维氏气单胞菌(A.veronii);药敏结果显示该菌对头孢氨苄、氨苄西林等10种抗生素敏感;人工感染试验显示该菌可造成雏鸭的死亡;小鼠的致病性试验显示该菌对小鼠的LD50为5.0×10^6.5cfu。总之,本实验从病鸭中分离到1株A.veronii,并筛选出敏感药物,为A.veronii病的诊断和治疗提供了参考依据。     

狐狸源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

本研究通过生物学特性、16S rRNA基因和4种等看家基因的序列测定与分析,对分离自北京动物园死亡狐狸病变组织的1株细菌进行鉴定,并对其进行小鼠致病力试验及药物敏感性试验。结果显示:该细菌为革兰氏阴性杆菌,培养特性、理化反应与维氏气单胞菌温和生物型基本相同;根据16S rRNA基因和dnaJ、rpoD、gyrB、cpn60等看家基因的系统进化及其同源性分析,确定所分离的细菌与维氏气单胞菌属于同一系统发育分支,各基因同源性最高分别为97.6%～99.9%。分离菌株对CD-1小鼠有较强的致病作用,其半数致死量为2.8×105cfu/只;对氧氟沙星、头孢他啶等14种抗菌药物敏感,对青霉素G、克林霉素等9种抗菌药物耐药。     

肉鹅大肠杆菌病的病原分离与鉴定

本试验旨在研究肉鹅大肠杆菌的生化特性、药敏情况、血清型和致病性。2010年12月江苏省某肉鹅场鹅群出现呼吸困难,死亡增多现象,对病死鹅剖检发现以气囊炎和肺部坏死为主,无菌采集病料分离到一株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性鉴定,确定为大肠杆菌,微量凝集试验表明其血清型为O₂。经过肺结节压片镜检,没有发现霉菌的菌丝;检测健康鹅和患病鹅各10只的鹅新城疫抗体,发现其抗体滴度比较高且整齐度较好,两者之间的抗体无明显差异。对分离菌株进行药敏试验,结果表明对氟苯尼考等7种药物敏感,对先锋Ⅴ等16种药物已产生了耐药性。将分离到的菌株接种21日龄雏鹅进行动物回归试验,引起80%死亡率,说明该分离菌株对雏鹅具有较强的致病性。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定、耐药性分析及毒力基因检测

为确定屠宰场发病猪死亡原因,本研究对从死亡猪内脏中分离到的细菌,进行革兰染色镜检、生化鉴定和16S rRNA基因测序鉴定,并进行药敏试验、毒力基因检测及小鼠攻毒试验。结果显示,革兰染色镜检为细小或中等短杆状或丝状革兰阴性杆菌;生化试验特性分析及16S rRNA基因测序鉴定为奇异变形杆菌,命名为GZ2-2株。药敏试验结果显示,分离菌对哌拉西林、头孢呋辛、头孢他啶等11种药物敏感,对卡那霉素和米诺环素2种药物为中敏,对氨苄西林、头孢唑林、四环素等6种药物耐药;毒力基因检测结果显示,该分离菌携带rsbA、atfA、pmfA、mrpA、zapA、ureC、atfC和ucaA 8种毒力基因;小鼠攻毒试验表明,该分离菌有较强致病力。本试验成功分离到一株具有多重耐药性并携带8种毒力基因的奇异变形杆菌,为该菌感染的防治及其分子流行病学研究奠定了基础。     

1株奶牛源约翰逊不动杆菌的分离鉴定

旨在了解从奶牛垫料中分离得到1株革兰阴性菌的病原特征,本研究通过形态学观察、生化试验、染色镜检、16S rDNA同源性分析等方法对分离菌进行鉴定,并采用药敏试验测定药物敏感性,小鼠攻毒试验确定分离菌株毒力情况。结果表明,分离菌为革兰阴性菌;扩增的16S rDNA序列长度为1 283 bp,与约翰逊不动杆菌的核苷酸相似性大于99%;分离菌株对小鼠有较强的致病性,试验组小鼠死亡率达80%。分离菌对链霉素、复方新诺明等6种药物敏感,对头孢噻肟、头孢呋辛中度敏感,对青霉素、红霉素等4种药物耐药。本研究从奶牛垫料中分离到1株约翰逊不动杆菌,为奶牛源约翰逊不动杆菌的防治和研究提供了参考依据。     

1株鸭源奇异变形杆菌的分离鉴定与毒力基因检测

试验旨在研究鸭源分离菌的耐药性及致病性,通过细菌分离鉴定、药敏试验、耐药基因和毒力基因PCR检测及动物致病性试验,成功分离到1株细菌,经纯化和革兰氏染色,显微镜下显示两种形态：短杆状以及细长如发丝,革兰氏染色为阴性菌,将其命名为GZGY2020。生化反应显示,分离菌具有明显的运动性,M-R试验、V-P试验均为阳性,生化特性符合奇异变形杆菌。分离菌16S rDNA进化树结果显示,其与奇异变形杆菌处于同一分支。药敏试验结果发现,分离菌对多种药物耐药,对18种药敏纸片中羧苄西林、头孢氨苄、苯唑西林等16种药物耐药,耐药率高达88.9%,仅对头孢他啶和环丙沙星敏感;PCR检测其含有磺胺类耐药基因基因sul1和sul2及β-内酰胺类耐药基因VIM,并含有hpmA、rsmA、atfA、ucaA、ureC、zapA、pmfA、fliL和mrpA 9种毒力基因。动物回归试验结果显示,分离菌对雏鸭致病力强,即1×10⁸ CFU/mL菌液能使雏鸭1 d内全部死亡。在药敏特性上,从病死鸭中分离到的菌株GZGY2020与以往报道的奇异变形杆菌有一定差异,表明该菌可能发生变异,导致毒力增强,而检测的10种毒力基因中仅有1种毒力基因没有出现相应的条带,表明奇异变形杆菌是引起该鸭死亡的重要致病菌,应引起高度重视。     

兔源大肠杆菌耐药表型分析

从9个规模化兔场分离到50株大肠杆菌,选取了16种抗生素对这50株大肠杆菌运用Kirby-Barer法进行药敏试验,结果表明：先锋霉素、新霉素、痢特灵、丁胺卡那霉素的抑菌作用比较强;而细菌对氨苄青霉素、阿莫西林、强力霉素、林可霉素则表现出极其高的耐药性,对四环素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、复方新诺明、恩诺沙星、诺氟沙星、链霉素也有很高的耐药性。所分离的大肠杆菌以耐药8～12种居多,占细菌总数的78％,未发现不耐药的菌株与全部耐药的菌株。