牛奶和山羊奶中乳脂球膜蛋白的比较研究

试验旨在分析牛奶与山羊奶中乳脂肪球膜（milk fat globule membrane,MFGM）蛋白组成及潜在的生物学功能。采集牛奶和山羊奶各30份,离心分离牛奶和山羊奶中脂肪,提取MFGM蛋白,液相色谱串联质谱分析结合数据库搜索鉴定,比较了奶牛和山羊MFGM蛋白的差异,分析了MFGM蛋白参与的生物过程、分子功能及相关代谢通路。结果显示,奶牛和山羊MFGM中分别鉴定了284和334个蛋白,奶牛和山羊中蛋白参与的生物学过程的模式非常相似,主要涉及生物调控、定位、转运、信号转导和应激反应等。分子功能方面二者存在一定的差异,奶牛MFGM蛋白主要涉及蛋白结合和核苷酸结合,而山羊MFGM蛋白主要涉及蛋白结合和结构分子活性。奶牛和山羊中差异表达的MFGM蛋白主要涉及结构分子活性。通路分析发现,奶牛和山羊MFGM蛋白涉及的生物学通路稍有差异,其中紧密接头、轴突导向、抗原加工与递呈、补体和凝血级联反应通路在奶牛MFGM蛋白中得到富集,而调节肌动蛋白细胞骨架通路在山羊奶中得到富集。研究结果展示了奶牛和山羊MFGM蛋白的表达模式及差异,为进一步探索两种奶畜乳腺合成脂肪球的分子机制的异同提供科学依据。     

基于网络药理学探究中药黄连抗菌作用机制

试验旨在基于网络药理学方法探究中药黄连主要活性成分的抗菌作用机制。从TCMSP数据库筛选黄连有效成分及作用靶点，利用Uniprot数据库转化成相应靶点基因，将活性成分和靶点基因导入Cytoscape 3.6.1软件，构建活性成分-靶点网络图。再结合GeneCards数据库检索黄连抗菌相关靶点，将核心靶点基因上传至STRING平台，构建蛋白相互作用网络，最后，利用DAVID数据库对关键靶点进行GO生物学过程分析和KEGG通路富集分析。结果显示，黄连9种有效成分作用于105个抗菌靶点参与22条生物学过程（生物过程18条、分子功能3条、细胞组成1条）和19条相关信号通路。其中黄连的主要有效成分为槲皮素、氢化小檗碱、氧化小檗碱、小檗碱和巴马汀等；抗菌作用靶点为IL2、VCAM1、STAT1、NOS2、TGFB1、CASP9、MMP1、NFKBIA和CXCL10等；参与的生物学过程主要包括炎症反应、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调节、对脂多糖的反应、凋亡过程的负调节、细胞黏附等；主要作用于Toll样受体信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、NF-κB信号通路等。本试验结果表明，黄连可能通过槲皮素、小檗碱、巴马汀等活性成分作用于IL2、VCAM1、STAT1等关键靶标参与Toll样受体信号通路、TNF信号通路联合发挥抗菌作用，充分体现了黄连多成分、多靶点、多通路的抗菌作用机制，为进一步深入阐明黄连抗菌机制提供理论参考。     

获能前后绵羊精子的差异蛋白质组学分析

为了探索获能前后绵羊精子蛋白质的动态变化，通过串联质谱标签结合液质联用分析技术，对获能前后绵羊精子的总蛋白进行定量分析。结果显示：获能前后绵羊精子的差异表达蛋白共有203个，获能后表达上调蛋白质27个，表达下调蛋白质176个。差异表达参与解剖结构发育、生殖等生物学进程；从细胞组分看，差异表达蛋白定位在细胞溶质、质膜中；从分子功能看，主要参与氧化还原等过程。差异表达蛋白也参与蛋白酶体、Hedgehog和cAMP等信号通路。通过差异蛋白表达结合文献分析，筛选出乳铁蛋白。Western blot结果表明，乳铁蛋白在绵羊精子中存在，且在获能后表达量极显著降低(P<0.000 1);RT-qPCR结果表明，乳铁蛋白在获能前后绵羊精子中均存在，且差异极显著(P<0.001),说明乳铁蛋白对绵羊精子获能有一定的影响。     

GST pull-down联合质谱分析技术筛选鸡NOS2的互作蛋白

为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到316个与鸡NOS2相互作用的候选蛋白质,其中12个高评分蛋白具有相同的功能注释,参与精子运动调控,且主要分布在细胞质、细胞核等细胞组分中,可能通过与其它蛋白质、核酸等分子结合而参与MAPK、Notch等信号通路;质谱分析还发现GOT1蛋白与NOS2互作最为明显,该蛋白参与Notch信号通路,后续将作为重点候选互作蛋白以探究其与NOS2蛋白的互作方式。该结果为进一步探究NOS2在鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化中的调控机制奠定了实验基础。     

鞭毛蛋白诱导表达差异基因的分析

试验旨在分析鞭毛蛋白刺激机体基因表达谱的特征，揭示鞭毛蛋白佐剂的作用机制。从GEO数据库筛选目标微阵列GSE46421和GSE72016及其差异表达基因（DEGs），经DAVID分析DEGs参与的GO功能注释和KEGG信号通路、String构建DEGs的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络、Cytoscape可视化PPI网络并筛选高连通度的PPI子模块和hub基因。结果显示，共筛选出182个DEGs，包含上调基因161个、下调基因121个。DEGs参与GO生物过程主要有信号转导、免疫应答、炎症反应、细胞凋亡等，参与分子功能包含激酶激活、受体结合、细胞因子激活、膜信号转导。DEGs参与KEGG通路涵盖细胞因子-细胞因子受体相互作用、TNF信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路等免疫相关途径。分析DEGs的PPI网络发现，2个重要的PPI子模块和10个关键基因（IL-10、IL-6、CCL2、CXCL2、NFKBIA、MyD88等）。研究表明，鞭毛蛋白通过识别TLR5和NOD样受体，触发MyD88依赖性和MyD88非依赖性途径发出信号，激活转录因子NF-...     

人初乳与牛初乳中乳清蛋白组成的对比研究

通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)将人初乳与牛初乳中乳清蛋白进行分离并结合液质联用技术鉴定,在人初乳乳清蛋白中鉴定出477种蛋白质,牛初乳乳清蛋白中鉴定出325种蛋白质,其中人初乳中有343种特异性表达蛋白质,牛初乳中有191种特异性表达蛋白质,两者有134种相同表达蛋白质。通过基因本体(gene ontolpgy,GO)功能注释分析发现,人初乳乳清蛋白在生物过程中发挥的作用高于牛初乳,尤其表现在应激反应功能上;在分子功能上,人初乳乳清蛋白主要体现在结合作用方面;在细胞组成上,与牛初乳乳清蛋白相比,人初乳乳清蛋白参与的细胞组成均较多,其中在细胞胞外区的组成上参与最多。通过京都基因与基因组百科全书系统(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路分析可知,人初乳乳清蛋白中有23种蛋白参与了与消化吸收相关的KEGG通路-酶酵解。     

西藏牦牛卵母细胞蛋白质组表达谱的构建与分析

用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术构建西藏牦牛生发泡(GV)期去透明带卵母细胞的蛋白质组表达谱并进行生物信息学分析。结果显示:共鉴定到550种蛋白质,相对分子质量主要分布在200 000以下,等电点集中在4~12,穹隆蛋白(MVP)是丰度最高的蛋白质;聚类(GO)分析表明:与细胞组分相关的蛋白质主要集中在细胞质(125种),与分子功能相关的蛋白质中发挥多聚A结合RNA功能的蛋白质最多(54种),生物学进程相关的蛋白质中参与内肽酶活性的负调节过程的蛋白质最多(26种);调控通路富集(KEGG Pathway)分析发现,参与的有代表性的通路有补体系统通路,核糖体代谢通路,磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号通路,碳代谢通路等;通过蛋白质互作网络分析,筛选出与网络稳定性关系最密切的10种蛋白质。总之,构建的西藏牦牛GV期卵母细胞蛋白质组表达谱及分析结果,将为探索西藏牦牛卵母细胞成熟机理及关键基因的研究等奠定基础。     

药用槐花抗炎活性的网络药理学分析

【目的】 基于网络药理学方法探究中药槐花主要活性成分的抗炎作用机制。【方法】 依托TCMSP数据库筛选槐花有效成分及相应靶点，利用Uniprot数据库和Cytoscape 3.6.1软件构建有效成分-靶点网络图；结合NCBI、GeneCards、OMIM等数据库检索槐花抗炎相关靶点，上传至STRING平台，构建蛋白互作网络图；利用DAVID数据库对关键靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】 槐花中主要有槲皮素、异鼠李素、山奈酚、β-谷甾醇、N-[6-9-吖啶基氨基己基]苯甲酰胺和槲皮素-3-甲基醚6种有效成分，可作用于IL10、NFKBIA、ICAM1、MMP2、BCL2L1、STAT1、VCAM1、IFNG、MAPK14和IL2等152个抗炎靶点。与生物过程相关的条目16个，即RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、正调控转录DNA模板、凋亡过程的负调控、基因表达的正调控、炎症反应和细胞对脂多糖的反应等；与分子功能相关的条目6个，即酶结合、转录因子结合、蛋白结合等；与细胞组分相关的条目2个，即细胞外间隙和细胞质基质；21条相关信号通路，即TNF信号通路、Toll样受体信号通路、T细胞受体信号通路、NOD样受体信号通路、癌症通路、乙型肝炎、HTLV-Ⅰ感染、甲型流感等。【结论】 槐花可能通过槲皮素、异鼠李素、山奈酚、β-谷甾醇等活性成分作用于RB1、CDKN1A、IKBKB、CHUK、IL2和CXCL10等关键靶标，参与TNF信号通路、Toll样受体信号通路、T细胞受体信号通路、NOD样受体信号通路联合发挥抗炎作用，揭示了槐花多成分、多靶点、多通路的抗炎作用机制。     

营养素和激素对乳蛋白合成过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路调节作用的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是mTOR信号通路的重要分子。mTOR可整合氨基酸、能量和激素等多种细胞外信号,参与基因转录、蛋白质翻译等生物过程。本文总结了mTOR信号通路特点及信号途径,重点介绍了营养素(氨基酸、能量底物)和激素(主要是胰岛素)在乳蛋白合成过程中对mTOR信号通路的调节作用。     

乳脂球膜结构、化学组成与潜在生物活性功能研究进展

乳脂球膜(MFGM)是乳脂球的保护膜,是泌乳过程和泌乳后储藏过程中维持乳的乳化稳定状态的主要功能成分。MFGM类似细胞膜结构,主要由脂类和蛋白质构成。MFGM具有潜在的生物活性功能,包括抗炎、调节免疫、抗癌、抗菌和抗病毒等。本文综述了MFGM的形成与结构、化学组成和潜在生物活性功能的研究进展,并讨论了未来研究趋势,旨在为进一步研究与应用MFGM营养生理作用提供参考。     

Comparison of Milk Fat Globule Membrane Proteins in Milk Samples of Dairy Cow and Goat

In order to compare the difference of milk fat globule membrane（MFGM）proteins between dairy cow and goat milk,30 milk samples were collected in a dairy farm and a goat farm from Anhui area,respectively.Extracted proteins from the MFGM-enriched fractions were identified and quantified by LC/MS approach.The results showed that 284 and 334 proteins of MFGM from dairy cow and goat were identified,the biological processes of MFGM proteins were similar between dairy cow and goat which were mainly related to biological regulation,localization,transport,signal transduction and response to stimulus.Meanwhile,there were some differences in molecular functions,and protein binding and nucleotide binding were the most prevalent molecular functions in dairy cow MFGM proteins,while protein binding and structural molecule activity were the most prevalent molecular functions in goat MFGM proteins.And structural molecule activity was the main molecular functions among the difference proteins.Pathway analysis revealed that tight junction,axon guidance,antigen processing and presentation,complement and coagulation cascades were enrichment in dairy cow MFGM proteins,and regulation of actin cytoskeleton was enrichment in goat MFGM proteins.Those results revealed the protein expression pattern difference between MFGM protein of dairy cow and goat milk,and provide reference data for further exploring the molecular mechanism of synthetic milk fat globule.     

基于蛋白质组学分析羊乳、牛乳和人乳的蛋白质功能特性

为进一步了解羊乳、牛乳和人乳3 种乳样蛋白质相关信息,对其基本成分进行测定,并通过蛋白质组学技术对所含蛋白质进行生物信息学分析。结果表明：羊乳和牛乳的蛋白质含量高于人乳,人乳的脂肪和乳糖含量较高;3 种乳中共鉴定出3 370 种蛋白质,乳中蛋白质的生物过程主要集中在细胞和代谢过程,细胞定位主要分布在腔体和细胞器上,分子功能表现为结合功能和催化活性;KEGG通路在3 种乳中富集程度和种类有明显差异,共有的高富集通路为蛋白质在内质网的加工过程;蛋白质相互作用网络中的共有蛋白质（307 种）主要集中在碳代谢、糖     

过滤器辅助样品前处理法测定乳脂肪球膜蛋白质的研究

牛乳是世界上消费最广泛的乳类,并为消费者提供必需的营养物质。牛乳包括蛋白质,脂肪,糖类,维生素和矿物质。蛋白质是牛乳的重要组成部分,包括酪蛋白、乳清蛋白及乳脂肪球膜蛋白质。牛乳乳脂肪球被乳脂肪球膜覆盖,乳脂肪球膜是一个含有3层膜的膜结构,其上附着或者包含蛋白质。近些年来,对于乳中蛋白质的鉴定成为新的研究热点。随着蛋白质组学技术的发展,鉴定出的蛋白质的种类和数量都在增加。但是由于乳脂肪球膜的特殊性质,在牛乳乳脂肪球膜蛋白质的鉴定中,缺乏方便快捷及效果好的方法。作者运用过滤器辅助样品前处理法（FASP）结合纳升液相质谱（NanoLC-MS/MS）测定牛乳乳脂肪球膜蛋白质的种类和数量,共鉴别出169种蛋白质,是目前鉴别数量最大的一种方法。此方法的建立为今后乳脂肪球膜蛋白质研究领域提供一种方便快捷准确的试验工具。     

人初乳与牛初乳中乳脂肪球膜蛋白质组成的对比研究

通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)将人初乳与牛初乳中乳脂肪球膜蛋白进行分离并结合液-质联用技术鉴定,在人初乳乳脂肪球膜蛋白中鉴定出l 076种蛋白质,牛初乳乳脂肪球膜蛋白中鉴定出682种蛋白质,其中人初乳中有757种特异性表达蛋白质,牛初乳中有363种特异性表达蛋白质,两者有319种相同表达蛋白质.通过基因本体(gene ontolpgy,GO)功能注释分析发现,人初乳乳脂肪球膜蛋白在生物过程中发挥的作用高于牛初乳,尤其表现在细胞组成组织功能上;在分子功能上,人初乳乳脂肪球膜蛋白主要体现在结合作用方面:在细胞组成上,与牛初乳乳脂肪球膜蛋白相比人初乳乳脂肪球膜参与的细胞组成均较多,其中在细胞胞内区的组成上参与最多.通过京都基因与基因组百科全书系统(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路分析可知,人初乳乳脂肪球膜蛋白中有15种蛋白参与了与消化吸收相关的KEGG通路-酶酵解.     

基于Label-free技术比较马和驴血清蛋白质组分差异

旨在探究马和驴血清蛋白质生物学特征,为马属动物种间生理特征比较和健康保障提供理论依据。本研究选取辽宁省大连市某集约化养殖场的9匹蒙古马和9头辽西驴,雌性,年龄4~10岁,均处于正常发情周期的间情期,健康无病、精神状态及采食状况良好,分别提供相同的饲养条件。采集马和驴各9份血清样品分别随机分成3组,每组内的3份血清样品均匀混合成1个生物学重复,各获得3个生物学重复的血清样品。利用Label-free蛋白质组学技术及生物信息学方法对马和驴的血清蛋白质组分进行比较研究,提取血清蛋白质,再对蛋白质进行酶解,液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）进行蛋白质组分分析,数据库检索分析马和驴血清样品中蛋白质表达情况,并应用生物信息学方法筛选马和驴血清差异关键调控蛋白质。结果显示,本研究共鉴定出361种蛋白质,其中,马血清中表达288种蛋白质,分子量范围为1.52~511.24 ku;驴血清中表达244种蛋白质,分子量范围为1.53~611.47 ku;共获得231种显著差异表达蛋白质（差异倍数≥1.5,P≤0.05）。差异表达蛋白质主要参与蛋白质激活、补体激活、免疫应答、凝血和脂蛋白氧化调控等生物学过程。显著富集的KEGG通路为补体和凝血级联,吞噬体,内质网蛋白质加工,抗原加工递呈,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢,癌症蛋白多糖等。通过差异蛋白互作分析显示,差异表达蛋白质紧密相连富集最为显著的功能模块主要为代谢途径、补体和凝血级联、吞噬体,HSP90AA1、HSPA8、APOD、APOM、SERPING1、MASP1、CALR、TUBA1B、TUBB等处在关系互作网的重要节点。马和驴在生理条件下的血清蛋白质组成特征存在一定差异,该研究为进一步揭示马属动物种间生理特征差异和有效保障健康提供数据支撑。     

牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成及功能的对比研究

利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)将牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成部分进行分离鉴定,发现牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成存在较大的差异,且在牛初乳中鉴定出628种乳脂肪球膜蛋白质,牛常乳中鉴定出487种乳脂肪球膜蛋白质.由基因本体(gene ontology,GO)功能注释分析发现,在生物过程中生物调控作用是牛初乳和牛常乳中乳脂肪球膜的主要生物过程.在分子功能上,牛初乳的乳脂肪球膜蛋白质的绑定作用大于牛常乳.在细胞组成上,牛初乳乳脂肪球膜蛋白质参与细胞外区域远远大于牛常乳.通过京都基因与基因组百科全书系统(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路分析可知,牛初乳和牛常乳乳脂肪球膜蛋白质参与的代谢途径不同,表明牛初乳在日后的生产加工中更具有利用价值.     

日粮组成对牛奶中乳成分合成与调控机制影响的研究

牛奶中乳蛋白和乳脂肪含量的高低直接关系到牛奶的品质和风味。牛奶中乳蛋白主要可以分为酪蛋白和乳清蛋白两种类型,其合成代谢过程均受到mTOR信号分子通路、JAK-STAT信号分子通路、GCN2-eIF2a信号分子通路的影响。牛奶中乳脂肪主要为三酰基甘油酯、磷脂等,对于牛奶的营养和风味均有重要影响,其受到脂肪酸相关酶ACACA、FAS、SCD1的调控。饲料营养是影响牛奶中乳蛋白和乳脂肪的关键因素之一,包括精粗饲料配比及饲料添加剂的应用等方面。本文对牛奶中乳蛋白和乳脂肪的合成调控机理,及日粮组成对其的影响机制进行阐述,为改善乳品质提供参考。     

乳脂肪球膜组成及分离提取技术研究进展

乳中的脂肪以脂肪球的形态存在，被3 层膜包裹，称之为乳脂肪球膜（milk fat globule membrane，MFGM）。由于MFGM生物学功能和乳化潜力的相关报道，MFGM引发了广泛研究。本文综述MFGM的结构、组成、分离提取方法以及不同分离提取方法中工艺参数变化对MFGM组成的影响。     

德州驴乳清蛋白差异蛋白质组学研究

驴奶的营养成分比例与母乳相近,是牛奶的最佳替代乳品。为研究影响驴产奶量的分子机制,采用非标记质谱法对不同产奶量德州驴的乳清蛋白进行了定量分析。结果表明:德州驴奶共鉴定出216个乳清蛋白,其中19个在高产样本中存在显著差异(P<0.05);在这些蛋白质中,有16个上调,3个下调。对差异表达蛋白(DEPs)生物信息学分析表明,大多数DEPs参与了内质网蛋白合成、雌激素信号通路、孕酮介导卵母细胞成熟和PI3K-Akt信号通路。文章首次对高产驴和低产驴奶样中乳清蛋白质谱进行分析,并确定了与德州驴产奶量性状相关的分子机制的候选蛋白质,为高产奶驴的选育提供了生物标记。