巨型艾美耳球虫不同地理株交叉免疫保护性研究

筛选出与巨型艾美耳球虫(E.maxima)山东分离株(Msd)免疫原性差异大的早熟弱毒株,为研制具有良好免疫原性的高效多价鸡球虫疫苗提供理论依据。4日龄雏鸡免疫E.maxima山东分离早熟株(PMsd),免疫后7 d分别攻击E.maxima Msd、上海分离株(Msh)、北京分离株(Mbj)、山西分离株(Msx);14日龄雏鸡分别免疫E.maxima Mbj和Msx,免疫后7 d,Mbj免疫组分别攻击Msh和Msx,Msx免疫组分别攻击Msh和Mbj。免疫PMsd攻击Msd组鸡只达到良好的免疫保护,而免疫PMsd攻击Msx组鸡只除病变记分减少率(28.6%)高于Mbj组(23.8%)外,相对增重率(74.3%)、卵囊减少率(9.7%)、抗球虫指数(159.3)均低于其他各组;免疫Msx攻击Mbj和Msh组鸡只卵囊减少率、抗球虫指数、相对增重率均大于免疫Mbj攻击Msx和Msh组。4种不同地理株的巨型艾美耳球虫中,Msx与Msd的免疫原性差异最大,且较Mbj更为广谱。     

GC02鸡球虫病疫苗免疫效果的观察

试验研究了GC02鸡球虫病疫苗免疫预防鸡球虫病的效果.试验一选择100只肉杂鸡,饲养至21日龄时,随机分为A、B、C、D四组,其中A组免疫肉鸡球虫病疫苗,B组免疫GC02鸡球虫病疫苗,C组为不免疫攻虫组,D组为不免疫不攻虫组,A、B组于21日龄口服免疫球虫苗,A、B、C三组于28日龄时口服接种1×105个孢子化卵囊攻虫,于36日龄捕杀A、B、C、D组全部鸡只,以比较肉鸡球虫病疫苗与GC02鸡球虫病疫苗的预防效果.结果表明两种球虫病疫苗均能有效的抗雏鸡艾美耳球虫感染,且是安全有效的.试验二选择100只肉杂鸡,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ五组.研究了GC02鸡球虫病疫苗不同免疫次数的保护作用,Ⅰ组于14日龄免疫GC02鸡球虫病疫苗(4 000个卵囊),Ⅱ组分别于7日龄(4 000个卵囊)、21日龄(8 000个卵囊)免疫GC02鸡球虫病疫苗,Ⅲ组分别于7日龄(4 000个卵囊)、14日龄(8 000个卵囊)、21日龄(12 000个卵囊)免疫GC02鸡球虫病疫苗,Ⅳ组为不免疫攻虫组,Ⅴ组为不免疫不攻虫组,于28日龄时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均口服接种1×105个孢子化卵囊攻虫,36日龄捕杀全部鸡只,观察GC02鸡球虫病疫苗不同免疫次数的免疫效果.结果表明2次免疫的效果优于1次免疫和3次免疫,2次免疫能有效的控制球虫病的发生,对雏鸡有明显的促生长作用.     

CpG-DNA对AA肉鸡新城疫疫苗免疫增强效果的研究

为探讨CpG-DNA对AA肉鸡新城疫疫苗的免疫增强作用,本研究分别将生理盐水、新城疫Ⅳ系抗原(DNV-IV)、白油加NDV-Ⅳ、白油加NDV-Ⅳ加CpG-DNA四组试剂接种一定数量的随机分组的AA肉鸡体内,观察不同日龄的AA肉鸡免疫器官指数、细胞因子产生及抗体的分泌情况。结果显示,新城疫Ⅳ系疫苗在白油存在的条件下,对AA肉鸡免疫增强作用效果较为明显,而CpG-DNA有进一步增强该效果的作用。试验结果表明,CpG-DNA可以作为潜在的免疫佐剂应用于疫苗生产。     

H5N1亚型禽流感变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫原性研究

本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究.将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72 h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1 mL(106.0EID50/0.1 mE)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7 d后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re-4重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后,3周后平均HI抗体效价达8.75 log2:免疫鸡对亲本强毒株CKSX/06,以及变异株CKNX/06和流行株GSGD/96攻击提供完全保护.以上结果表明变异株灭活疫苗种毒Re-4株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,并且以该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是研制预防H5N1亚型禽流感病毒山西变异株的理想疫苗种毒株.     

重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)对传染性法氏囊灭活疫苗的免疫增强机理研究

为了评价重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)蛋白在鸡体内的免疫增强作用机理,本研究将40只7日龄健康SPF鸡随机平均分为4组以进行rChIL-6蛋白对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)灭活疫苗免疫增强作用试验,于14日龄时进行免疫接种和rChIL-6蛋白注射。分别检测4组鸡免疫前和免疫后不同时间血清中IBDV抗体水平、不同细胞因子表达水平、脾淋巴细胞增殖活性和外周血T淋巴细胞增殖活性等指标以揭示rChIL-6蛋白在机体内对疫苗的免疫增强机理。结果表明:免疫后7⁴9d,rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共免疫组(第4组)鸡血清中IBDV抗体水平极显著高于IBDV灭活疫苗对照组(P<0.01);免疫后749d,rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共免疫组(第4组)鸡血清中IBDV抗体水平极显著高于IBDV灭活疫苗对照组(P<0.01);免疫后7³5d,第4组鸡血清中的白细胞介素-4、6、2(ChIL-4、ChIL-6、ChIL-2)和γ干扰素(ChIFN-γ)等4种细胞因子的表达水平极显著高于其他3组对照组(P<0.01),α干扰素(ChIFN-α)的表达水平于免疫后1435d,第4组鸡血清中的白细胞介素-4、6、2(ChIL-4、ChIL-6、ChIL-2)和γ干扰素(ChIFN-γ)等4种细胞因子的表达水平极显著高于其他3组对照组(P<0.01),α干扰素(ChIFN-α)的表达水平于免疫后14³5d期间极显著高于其他3组对照鸡(P<0.01);rChIL-6蛋白单独应用后可显著提高机体的ChIL-4、ChIL-6和ChIL-2的表达水平,但对ChIFN-γ、ChIFN-α的表达水平无明显影响。免疫后735d期间极显著高于其他3组对照鸡(P<0.01);rChIL-6蛋白单独应用后可显著提高机体的ChIL-4、ChIL-6和ChIL-2的表达水平,但对ChIFN-γ、ChIFN-α的表达水平无明显影响。免疫后7¹4d,第4组鸡的脾淋巴细胞增殖活性显著高于其他3组对照鸡(P<0.01);免疫后714d,第4组鸡的脾淋巴细胞增殖活性显著高于其他3组对照鸡(P<0.01);免疫后7²1d,第4组鸡的外周血T淋巴细胞的增殖活性稍高于其他3组对照组(P>0.05)。结果表明,rChIL-6在体液免疫和细胞免疫水平对鸡传染性法氏囊灭活疫苗免疫后均具有免疫增强作用;对机体体液免疫应答的增强能力高于细胞免疫应答。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡病毒载量和免疫效果的比较研究

为比较鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡法氏囊及外周血淋巴细胞(PBMC)中的病毒载量及免疫效果,本研究采用IBD免疫复合物疫苗和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,于免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d采用SYBRGreenI荧光定量PCR、ELISA方法及中和试验检测免疫鸡法氏囊和PBMC中IBDV载量和免疫鸡血清中IBDV抗体滴度,并攻毒,计算两种疫苗的保护率。结果显示,活疫苗免疫7d时IBDV在法氏囊和PBMC中的载量均比其它时间点的高,在14d时到达到最高,之后逐渐下降;两种疫苗刺激产生的IBDV抗体滴度随免疫时间的延长呈升高趋势;在免疫后7d攻毒两种疫苗的保护率均为0,其它时间的攻毒保护率均为100%。本研究结果表明,IBD免疫复合物疫苗与活疫苗免疫后病毒在鸡体内开始大量复制的时间并不相同,但免疫效果基本相同。本实验为IBD免疫复合物疫苗的研发提供实验依据。     

家禽注射免疫的操作要点

家禽注射免疫有皮下与肌肉注射两种方法.肌肉注射抗体上升快,但对鸡的应激大,容易造成残鸡,且抗体维持时间短,常用做紧急免疫;皮下注射对鸡只免疫应激小、抗体维持时间长,是实际生产中较常用的免疫接种方法.     

鸡传染性法氏囊病的诊治

鸡传染性法氏囊病又称鸡传染性腔上囊病.鸡传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)所引起的一种急性,高度接触性传染病.发病率高,病程短.幼鸡感染后,可导致免疫抑制,并可诱发多种疫病或使多种疫苗免疫失败.本病病原为传染性法氏囊病毒(IBDV).     

较高母源抗体对雏鸡ND Ⅳ系苗首次免疫效果的影响

8日龄雏鸡 70只随机分为 A、B组 ,每组 35只。A组 ,转移因子稀释 ND 系苗。B组 ,生理盐水稀释 ND 系苗。免疫途径为点眼、滴鼻。分别在免疫前 (0 d)和免疫后 2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 ,14 d和 16 d采用 β-微量法测各组鸡 ND抗体效价。免疫后 2 6 d用 F48E9毒株攻击各组鸡。试验结果表明 ,各组鸡免疫后的抗体水平均呈下降趋势 ,且 A组鸡与 B组鸡免疫后抗体效价在整个免疫期间差异不显著 (P >0 .0 5 )。攻毒试验结果显示 :A组的死亡率为 4 2 .3% ,B组的死亡率为 5 9.3%。 A组与 B组的保护率呈极显著差异 (P <0 .0 1)。     

党参多糖对鸡IL-2活性和淋巴细胞增殖反应的促进作用

为了筛选有效增强鸡免疫功能的中药单体,采用体外鸡脾淋巴细胞增殖试验和体外诱导白细胞介素2(IL-2)产生试验观察了党参多糖对鸡免疫功能的影响.结果表明党参多糖可明显增强鸡脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生.     

interactions between escherichia coli and Newcastle disease virus in chickens

We investigated the interaction between Newcastle disease virus (NDV) and Escherichia coli in cell cultures, embryonated eggs, and 8-wk-old chickens. We measured the interactions on the basis of bacterial adherence and NDV hemagglutination titer in chickens, chicken embryos, and chicken embryo cell culture. Depending on the inoculation order of E. coli, a significant alteration of the growth of NDV was observed in both chickens and chicken embryos. When certain strains of E. coli were given before NDV exposure, the virus titers were lowered. In chickens, the mean virus titer was significantly (P < 0.05) lowered in the crop, the proventriculus, the gizzard, and the jejunum. However, there were no significant differences (P < 0.05) between the two groups for NDV titers in the duodenum, ileum, and cecum. In chicken embryos, when E. coli serotypes O78 and O119:B14 were inoculated before NDV exposure, the mean NDV titers were significantly (P < 0.5) lowered. However, there were no significant differences (P < 0.05) in NDV titer between the two groups when E. coli serotypes O78:K80:NM and O1ab:K NM were inoculated 24 hr before NDV exposure. When NDV was given prior to E. coli exposure, NDV titer was higher in both chickens and chicken embryos. In chickens, when NDV was given 48 hr before E. coli inoculation, NDV was detected in the proventriculus, gizzard, jejunum, ileum, and cecum, whereas no virus was detected in the control groups (NDV only). In the crop, NDV was detected at a significantly (P < 0.05) higher titer in the E. coli-inoculated group when compared with the control group that received NDV alone. In chicken embryos, virus titer was significantly (P < 0.05) higher when NDV was given 24 hr before E. coli inoculation for all three NDV strains used (Ulster and V4 strains). Adherence of E. coli to chicken embryo kidney (CEK) cells was significantly higher (P < 0.05) when the CEK cells were infected first with NDV and then by E. coli. The mean bacterial count per microscopic field in NDV-uninfected monolayers was eight compared with 112 for the NDV-infected monolayers. In approximately 10% of the fields in NDV-infected monolayers, the bacteria were too numerous to count.     

鸡新城疫流行毒株与标准毒株的交叉免疫保护试验

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫母源抗体平均为2 log2的12日龄公雏。免疫后每隔1周采集血清，用微量血凝抑制试验检测HI抗体。免疫后21 d抗体水平达到峰值，抗体水平在6log2以上，维持30 d以上。免疫40 d后，用ND分离强毒株和NDVF48E9分别进行攻毒试验，2种疫苗的保护率均为100％，攻毒结果表明，ND分离强毒株和NDVF48E9株的免疫原性差异不显著。     

Clinical epidemiologic and experimental evidence for the transmission of Newcastle disease virus through eggs

Sporadic outbreaks of Newcastle disease (ND) occurred in Taiwan during 1998-2000. In some cases, the disease occurred in broilers less than 2 wk old that originated in a broiler breeder farm, so spread of the ND virus (NDV) from the infected breeder farm to broiler ranches was suspected. The purpose of the present study was to examine the possibility of the transmission of NDV through eggs. Both clinical and experimental evidence were used to prove that this is possible. From epidemiological investigation, the possibility of transmission through eggs was suggested in two separate ND cases from a breeder farm and its progeny because two identical NDVs were isolated from both cases. In order to clarify the possibility of the transmission through eggs, one mean egg lethal dose (ELD50) of NDV was inoculated into the allantoic cavity of 155 9-to-11-day-old specific-pathogen-free (SPF) chicken embryos. Seventy-one hatching chicks from the inoculated embryos were raised for 14 days. The cloacal swabs from those chicks at the ages of 1, 4, and 7 days and the tissues after necropsy at the ages of 14 days were taken for virus isolation. The same NDV was reisolated from three hatching chicks. This experiment confirms that a few chicken embryos infected in ovo with a low titer of NDV can hatch and contain NDV after hatching, which results in NDV spreading through eggs.     

新城疫单抗ELISA试剂盒监测免疫鸡群中新城疫强毒

应用新城疫（ND）单抗ELISA试剂盒对2个免疫鸡群中ND强毒感染情况及个体感染强毒后排毒动态跟踪监测，并平等测定其HI抗体效价。共采集泄殖腔棉拭子和血液对应样品2317份。结果表明：HI效价2－14之间的个体均可检出强毒，其中HI效价在6以下和11以上的个体强毒检出率都较高。HI效价在6以上的个体仍角感染强毒，强毒感染导致HI抗体水平上升，且感染前低者上升速度较快，幅度亦较大；并且发现排毒个体的高水平抗体是强毒感染所致。个体感染强毒后排毒过程可长达3周，而且感染前抗体水平低者排毒时间相对较长。强毒一旦侵入鸡群便可在群内巡回传播，长期维持下来。     

鸡新城疫高免血清的制备

采用鸡新城疫Lasota株病毒（NDV）和鸡新城疫灭活疫苗按6组不同的免疫程序免疫12只12周龄SPF公鸡,以探索快速制备效价较高的鸡新城疫高免血清的方法。结果表明,不同的NDV剂量可以影响抗体水平增长的速度,免疫剂量越大,抗体水平增长越快;但是NDV两次免疫后只能使抗体水平增长到10log2,而再以灭活疫苗免疫可使抗体水平达到14log2。     

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)干扰新城疫病毒(NDV)增殖现象的研究

ＩＢＶ毒株Ｈ１２０、Ｈ５２、ＭＡ５对ＮＤＶ－ＬａＳｏｔａ的干扰实验证明ＩＢＶ特异性干扰ＮＤＶ增殖。１）采取不同顺序的同胚接种法：ＩＢＶ接种之后再接种ＮＤＶ;或ＮＤＶ接种之后再接种ＩＢＶ,及ＩＢＶ,ＮＤＶ同时接种,ＩＢＶ均干扰ＮＤＶ的增殖。２）ＮＤＶ接种３６小时之内,干扰现象最为明显,Ｈ１２０,Ｈ５２的干扰能力稍强于ＭＡ５。３）ＮＤＶ血清中和实验结果显示,不同顺序同胚接种ＮＤＶ、ＩＢＶ时,ＮＤＶ－ＬａＳｏｔａ不影响ＩＢＶ的增殖能力。同胚增殖ＩＢＶ,ＮＤＶ的关键是控制ＮＤＶ、ＩＢＶ的接毒量及选择合适的收毒时间。     

中药合剂在雏鸡体内诱生及促诱生干扰素的研究

以鸡胚成纤维细胞-水泡性口炎病毒作为鸡干扰素(IFN)的检测系统,研究了中药合剂在鸡体内对干扰素诱生及促诱生作用的影响。结果表明中药合剂对IFN具有明显的诱生作用(P<0.01),与NDV诱生组水平相当;同时可明显促进NDV对IFN的诱生,与NDV诱生组比较差异极显著(P<0.01)。试验显示中药合剂具有明显的诱生IFN的能力,有利于其发挥调节机体免疫力的作用,为中药合剂抗NDV提供了理论依据。     

口服重组鸡α-干扰素对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响

通过点眼、滴鼻的方式使SPF鸡感染新城疫La Sota株,感染8 h后在饮水中添加1000 U/mL重组鸡α-干扰素,每只鸡每天饮用干扰素剂量为20000 U,分别饮用不同时间。于感染后第7天采集气管组织,制备病理切片。结果显示,连续3 d以上饮用重组鸡α-干扰素的试验鸡,其气管的病理损伤可得到明显改善;检测饮用重组鸡α-干扰素后试验鸡的新城疫抗体效价,结果表明口服高剂量的干扰素可明显下调新城疫抗体的滴度。     

鸡新城疫－鸡肾型传染性支气管炎二联油乳剂灭活苗的研究

采用以南京等地发病鸡场分离的鸡肾型传染性支气管炎若干毒株和鸡新城疫Ｌａｓｏｔａ（Ｎ－７９）疫苗毒株为种毒，分别接种于非免疫的鸡胚，收取含毒的鸡胚尿液，经福尔马林灭活后，以矿物油为佐剂，研制成鸡新城疫－鸡肾型传染性支气管炎二联油乳剂灭活苗，试用后经抗体检测，结果表明免疫后第１０天ＨＩ抗体明显上升，至第３０天仍保持较高的水平，经ＩＢＶ强毒攻击，免疫组能获得全保护，区域试用３００余万头份，证实本疫苗安全可靠，能有效地预防和控制鸡新城疫、肾型传染性支气管炎的发生和流行。     

鸡新城疫－鸡肾型传染性支气管炎二联油乳剂灭活苗的研究

采用以南京等地发病鸡场分离的鸡肾型传染性支气管炎若干毒株和鸡新城疫Ｌａｓｏｔａ（Ｎ－７９）疫苗毒株为种毒，分别接种于非免疫的鸡胚，收取含毒的鸡胚尿液，经福尔马林灭活后，以矿物油为佐剂，研制成鸡新城疫－鸡肾型传染性支气管炎二联油乳剂灭活苗，试用后经抗体检测，结果表明免疫后第１０天ＨＩ抗体明显上升，至第３０天仍保持较高的水平，经ＩＢＶ强毒攻击，免疫组能获得全保护，区域试用３００余万头份，证实本疫苗安全可靠，能有效地预防和控制鸡新城疫、肾型传染性支气管炎的发生和流行。