桑枝皮醇提物的抗氧化和对α-糖苷酶活性的抑制作用

α-糖苷酶活性抑制剂是一种治疗糖尿病的口服药物。以醇水溶液为萃取溶剂,从桑树枝条的皮中获得一种具有抑制α-糖苷酶活性的桑枝皮醇提物。桑枝皮醇提物的体外生物活性试验显示其对1,1-二苯基苦基苯肼自由基具有良好的清除作用,抑制中值(IC50)为100μg/mL;对酪氨酸酶、麦芽糖酶和蔗糖酶的活性均具有很强的抑制作用,IC50值分别为0.44 mg/mL、6.5μg/mL和0.25μg/mL。对桑枝皮醇提物的酶动力学分析显示其属于底物竞争性的α-糖苷酶抑制剂。研究结果初步表明,桑枝皮醇提物不仅具有一定的抗氧化作用,而且可作为一种新型的α-糖苷酶抑制剂用于糖尿病的血糖控制。     

苦荞麦中芦丁提取及体外抑菌活性研究

采用乙醇回流法提取苦荞麦中的芦丁,并进行TLC检测、紫外光谱和红外光谱检测。将芦丁对两种供试菌进行体外最小抑制浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)、半数抑菌浓度(IC50)测定。结果表明,其对大肠埃希氏杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC分别为0.40mg/mL和0.20mg/mL;MBC分别为0.50mg/mL和0.20mg/mL;IC50分别为0.2605mg/mL和0.1607mg/mL。     

从桑枝皮醇提物萃取的不同组分及其体外生物活性

为了从桑枝皮中获取有效的药用功能性成分,以不同极性的有机溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进一步萃取并分离桑枝皮醇提物(MBBEE)中的活性成分,获得的正丁醇萃取组分(n-BuOH)和剩余水相组分(Res)占MBBEE总量的94.26%(其中Res组分得率达73.72%,n-BuOH组分得率为20.54%),石油醚、氯仿、乙酸乙酯3种萃取组分的得率总共不足2%。对各种样品的活性成分检测表明,MBBEE中含有的总黄酮、总多酚和总糖3种活性成分分别为39.99、56.24和16.37mg/g,而以上3种活性成分在n-BuOH组分中分别为74.25、107.49和14.21mg/g,在Res组分中分别为262.16、118.70和75.88mg/g。对各种样品的氨基酸组成分析表明,游离氨基酸含量为n-BuOH组分>MBBEE>Res组分。各种样品的体外生物活性试验显示,MBBEE、n-BuOH组分和Res组分均具有很强的DPPH自由基清除作用以及对酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用,其中:对DPPH自由基清除作用以Res组分最强,抑制中值(IC50)为100μg/mL;对酪氨酸酶抑制活性以n-BuOH组分最高,IC50为5.2μg/mL;对α-葡萄糖苷酶的抑制活性以Res组分最高,IC50为2.8μg/mL。试验结果表明,从桑枝皮醇提物中萃取的n-BuOH组分和Res组分是降血糖以及抗氧化、抗衰老、美白的功能性成分。     

桑枝皮多糖对小鼠的免疫调节试验

多糖对生物体具有免疫调节作用,从桑枝皮中可以提取获得多糖物质。分别以300、600、900 mg/kg剂量的桑枝皮多糖给正常小鼠和免疫抑制小鼠灌胃,对照组给予等量的蒸馏水,每天给药1次,连续给药7 d后检测观察小鼠体内部分生理生化指标的变化,探究桑枝皮多糖对小鼠的免疫调节作用机制。结果显示:桑枝皮多糖可增强正常小鼠因2,4-二硝基氟苯(DNFB)引起的迟发性变态反应以及免疫器官的发育和脾脏淋巴细胞增殖能力,试验组小鼠的血清溶血素抗体积数、碳廓清能力、NK细胞活性、白介素-2(IL-2)的浓度均显著高于对照组(P<0.05);桑枝皮多糖对免疫抑制试验小鼠的免疫功能也有一定的提升作用,除巨噬细胞吞食能力外,其他检测指标均有显著改善。试验结果还表明桑枝皮多糖改善小鼠免疫功能的生理生化指标,具有一定的量效关系。     

荷叶总碱体外抗新城疫病毒活性研究

采用纯化的荷叶总碱进行体外抗新城疫病毒(NDV)活性研究,测定了其对鸡胚成纤维细胞的最大无毒浓度(TD0)、半数中毒浓度(TD50)、抑制50%细胞病变的药物浓度(IC50)和治疗指数(TI)。结果表明:荷叶总碱具有明显的抗NDV作用,其TD0、TD50、IC50和TI分别为6.25mg/mL、13.86mg/mL、1.53mg/mL和9。     

蒲公英内生真菌PG23抗癌活性的初步研究

研究药用植物蒲公英内生真菌PG23多糖对肺癌A549细胞的抑制作用。蒲公英内生真菌PG23通过培养,乙醇沉淀获得粗多糖、苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用MTT法测定PG23多糖对肺癌A549细胞的抑制率,并计算半抑制浓度(IC50)。结果表明,PG23发酵液中多糖得率为2.754%,多糖含量为26.82%;对A549肺癌细胞的抑制率以第1天为最高;抑制率不与多糖浓度成比例,最佳作用浓度为14.42μg/mL,抑制率为87.63%(P<0.01),IC50为1.073mg/mL(24h)。PG23发酵液多糖对肺癌A549细胞具有较强的抑制能力。     

三种中药提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

在前期筛选具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作用的中药研究基础上,选取药效较好的三种中药：穿心莲、芦根和夏枯草。为进一步研究其有效抗病毒成分,采用MTT 法观察了穿心莲内酯盐、芦根多糖和夏枯草多糖成分对猴肾上皮细胞系(Marc-145) 生长的影响,分别采用阻断、抑制、直接杀灭3种作用方式观察了各成分抗RPPSV感染作用。结果显示：穿心莲内酯盐对细胞最大安全浓度为0.16 mg/mL,芦根多糖为0.575 mg/mL,夏枯草多糖为1.125 mg/mL;芦根多糖在三种方式上均有不同程度的抗PRRSV作用,而穿心莲内酯盐和夏枯草多糖阻断PRRSV作用不明显,抑制和杀灭PRRSV作用明显。结果表明穿心莲内酯盐、芦根多糖和夏枯草多糖均有抗病毒作用,为抗病毒中药的主要药效成分。     

响应面法优化党参多糖提取工艺及抗氧化活性研究

为探究党参多糖最优提取工艺并研究其体外抗氧化活性,以党参多糖提取率为响应值,以提取时间、提取温度和料液比3个因素为自变量,通过Box-Benhnken中心组合法设计3因素3水平试验方案优化提取工艺,并通过DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力和还原力测定考察党参多糖的抗氧化活性。结果:最佳提取工艺条件为:提取时间2.3 h、提取温度89℃、最佳料液比24 mL/g,在此条件下,党参多糖提取率最高,达到(15.66±0.04)%,与响应面预测值15.83%相近;抗氧化试验表明,党参多糖对DPPH自由基和羟基自由基半清除率(IC50)分别为0.93 mg/mL和0.65 mg/mL,还原力随着党参多糖浓度的增高而增强,浓度为8 mg/mL时达到0.85,表明党参多糖具有较强的体外抗氧化活性。研究结果为党参多糖合理开发和综合利用提供了理论基础。     

基于抗氧化活性的复合酶法提取香菇菌糠多糖的工艺优化

优化复合酶解法辅助提取香菇菌糠多糖的提取工艺,并研究其抗氧化活性。通过测定清除DPPH自由基、羟自由基(·OH)和超氧阴离子(O2-·)的能力评价香菇菌糠多糖的抗氧化活性。结果表明,复合酶解法提取香菇菌糠多糖最佳提取条件为:酶解时间50 min,酶解温度45℃,pH值5.0,酶浓度3%,在此提取条件下香菇菌糠多糖的提取率为9.60%,显著优于传统的热水浸提法,提取率提高了52.70%。通过复合酶解法提取的香菇菌糠多糖清除羟自由基的半数抑制浓度(IC50)为0.58 mg/ml、清除超氧阴离子的IC50为0.60 mg/ml,清除DPPH自由基的IC50为0.90 mg/ml。表现出较强的抗氧化活性,且抗氧化活性随多糖浓度的增加而升高。     

三种不同多糖对枯草芽孢杆菌增殖情况的影响

从大尾寒羊粪便中分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),绘制生长曲线。在LB液体培养基中添加5、10、15、20、25、30、40mg/mL和50mg/mL的香蕉和山楂多糖溶液,以及0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0mg/mL和5.0mg/mL的菊糖溶液,经高温灭菌后,将提前制备好的枯草芽孢杆菌种子液以5%的接种量接种在LB培养基中,摇床(37℃、150r/min)培养3、4、5、6、7、8、9h和10h时测量其OD值。结果表明:添加量为50mg/mL的香蕉多糖、25mg/mL的山楂多糖和2.5mg/mL的菊糖对枯草芽孢杆菌的增殖效果较好,且50mg/mL的山楂多糖对枯草芽孢杆菌增殖性能的影响效果最好。     

桑叶1-脱氧野尻霉素(DNJ)对α-蔗糖酶的抑制动力学研究

从桑叶中提取的1-脱氧野尻霉素(DNJ)作为糖苷酶抑制剂具有降血糖的功能。为了解明桑叶DNJ对α-蔗糖酶的作用机制,应用酶抑制动力学分析桑叶DNJ(纯度95%)对α-蔗糖酶的抑制特性。通过建立的α-蔗糖酶酶促反应体系表明,在α-蔗糖酶质量浓度≤500μg/mL、反应时间8min以内时,反应体系呈现良好的线性趋势;抑制活性检测表明,桑叶DNJ对α-蔗糖酶具有明显的抑制作用,其半抑制浓度(IC50)为5.67mg/mL;依据酶抑制动力学曲线特征推断桑叶DNJ对α-蔗糖酶具有明显可逆的非竞争性抑制作用,其抑制常数Ki为6.73mg/mL。     

98份不同桑树品种资源的桑叶总生物碱及1-脱氧野尻霉素含量测定

为了筛选适合药食用途开发的桑树品种,以广东桑、鲁桑、白桑和鸡桑4个桑种的98份桑树品种资源为材料,分别采用雷氏盐比色法和柱前荧光衍生-高效液相色谱法,对各品种资源的桑叶总生物碱含量和1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量进行测定。98份桑树品种资源桑叶中的总生物碱和DNJ含量从总体上符合正态分布,4个桑种间以及多倍体和二倍体桑树品种间没有显著差异,而不同品种资源间差异明显,其中白桑种的育7803的桑叶中的总生物碱和DNJ含量最高,分别为3.74、1.54mg/g,桑叶中的总生物碱质量比>3.00 mg/g的还有广东桑种的抗锈3,DNJ质量比>1.00 mg/g的还有广东桑种的黑皮桑、抗锈2和白桑种的阿2。这些桑树品种资源适合用于桑叶的药食用途专用品种的培育。     

桑树不同品种及取材部位中的主要芪类成分含量测定

芪类物质是桑树的次生代谢产物之一,具有多种生物活性功能。采用反相高效液相色谱-紫外检测法,测定不同桑树品种及同一品种不同取材部位的桑皮苷A、氧化白藜芦醇、白藜芦醇等主要芪类成分含量。芪类成分含量相对较高的桑树品种有中生火桑、黑鲁桑、塘10、小鸡冠桑等,4个桑树品种样品中芪类成分的质量比分别为3 228.3、3 162.7、3 049.7、2 462.4μg/g。桑树不同取材部位中,以1年生枝条中的芪类成分含量较高,新梢和桑叶中的含量较低,3个部位样品中的芪类成分质量比分别为3 879.0、813.2、501.6μg/g。检测结果可作为筛选芪类成分含量高的桑树药用材料的依据。     

广东桑桑枝总黄酮含量测定及与体外抗氧化活性的相关性研究

为了探讨桑枝抗氧化作用的物质基础,进一步开发桑枝的药用功能,采用比色法对广东桑不同品种及不同生长季节桑枝的总黄酮含量、总抗氧化活性、.OH和O2-.清除作用进行了测定,结果表明:品种和生长季节对桑枝总黄酮含量和体外抗氧化活性有显著的影响(P<0.05)。分析结果还显示:染色体倍数性对桑枝总黄酮含量和体外抗氧化活性无显著的影响(P>0.05);桑枝总黄酮含量与抗氧化活性间呈现显著的正相关关系(P<0.01)。     

屎肠球菌荚膜多糖的提取纯化及其多糖含量的测定

为提取纯化屎肠球菌（E.faecium）荚膜多糖（CPS）并测定其多糖含量,试验采用高压法破碎菌体,加入核糖核酸酶（25 μg/mL）、脱氧核糖核酸酶（0.5 mg/mL）、溶菌酶（0.25 mg/mL）及蛋白酶K （1.25 mg/mL）等去除核酸和蛋白质,得到荚膜多糖粗提物,经过30 ku和100 ku超滤离心管超滤浓缩和DEAE Sepharose Fast Flow层析柱层析后,得到纯化的屎肠球菌荚膜多糖,再利用苯酚-硫酸法测定其含量。结果表明,成功从屎肠球菌中提取纯化出荚膜多糖,其含量为75.21%,初步确定了屎肠球菌荚膜多糖的提取纯化方法,为今后相关疫苗的研制奠定了基础。     

Extraction,Purification and Determination of Capsular Polysaccharide in Enterococcus faecium

In order to extract and purify the capsular polysaccharide of Enterococcus faecium and measure contents of polysaccharide, high pressure crushing methods and enzyme decomposition methods (RNase A (25 μg/mL), DNase (0.5 mg/mL), lysozyme (0.25 mg/mL) and protease K (1.25 mg/mL)) were used to remove the nucleic acids and proteins to obtain crude capsular polysaccharide, and centrifugal ultrafiltration with 30 and 100 ku ultrafiltration centrifuge tubes and DEAE Sepharose Fast Flow column chromatography were also adopted to obtain the purified capsular polysaccharides of Enterococcus faecium. Then the content of polysaccharide was determined by the phenol-sulfuric acid method. The results showed the capsular polysaccharide content was 75.21%. The results revealed that capsular polysaccharide ofEnterococcus faecium was extracted successfully. The method of extracting capsular polysaccharide in Enterococcus faecium was established initially.