甘肃省健康猪群猪链球菌分离株的耐药性检测

为了解甘肃地区表现健康猪群携带猪群猪链球菌的情况,从甘肃省武威、兰州、庆阳等地采集到152份健康猪扁桃体分离猪链球菌,结果共分离到67株,分离率约44%,67株猪链球菌的耐药性检测表明,全部猪链球菌分离株具有多重耐药性,其中1株对22种抗生素中的16种产生耐药性.用我国致病性链球菌2型特有的89k毒力岛序列特异性引物对67株猪链球菌进行PCR鉴定,其中1株能够扩增出该特异性片段,表明在该地区健康猪群中存在致病性2型猪链球菌.     

猪圆环病毒的分子生物学研究进展

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是在1974年从PK-15传代细胞系(CCL-33)中首次分离到,最先被鉴定为一种细胞培养污染物[1],后被称为Porcine circovirus type 1(PCV-1).Meehan等[2]从断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMwS)病猪中分离并提纯了猪Ⅱ型圆环病毒(Porcine circovirus type 2,PCV-2).PCV自此分为2种基因型或称血清型.     

猪圆环病毒2型cap基因与猪γ-干扰素基因双表达载体的构建及稳定表达

通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪,γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-γ中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表达载体pBud-IFNPCV。重组质粒转染BHK-21细胞后进行Zeocin~(TM)抗性筛选建立细胞系,阳性细胞通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测cap和PoIFN-γ在BHK-21细胞中的表达。结果显示,试验中筛选出1株Zeocin~(TM)抗性阳性BHK-21细胞,cap和PoIFN-γ均在该细胞中获得稳定高效表达,这将为猪圆环病毒病的防治提供新的方法。     

弓形虫E/SA疫苗对小鼠抗弓形虫感染的保护作用

用细胞培养方法制备了弓形虫(GJS 株)ES 抗原(Exceted/Sereted Antigen,E/SA),用油佐剂 M206按不同剂型制备 ES 苗,随机分组免疫健康小鼠(昆明鼠,23～25 g·只~(-1)),每组5只,皮注/腹注0.3 mL·只~(-1)。其中:组1,E/SA 浓缩苗;组2,E/SA 苗;组3,E/SA-H 浓缩苗;组4,E/SA-H;组5,培养液对照;组6,M206对照.另设:组7,健康攻毒对照;组8,健康对照.先后免疫2次(间隔15 d),第28 d 用弓形虫 GJS 速殖子强毒攻毒,每鼠腹注10~2.免疫前后分别取尾血片检测弓形虫血清抗体(IHA 法).     

表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

对狂犬病毒G+N双基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体进行转染,以获得融合表过狂犬病毒糖蛋白和核蛋白重组腺病毒,并对其进行生物学特性和免疫学研究.结果表明:将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,可获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N,经PacI酶切后转染HEK-293细胞,可获得带有目的基因的重组腺病毒.重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次后,在细胞内的病变时间缩短为20 h以内.经测定,重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID50为10-8.0.mL-1,用RT-PCR法可检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段;重组腺病毒经口服免疫小白鼠,对狂犬病毒CVS毒株的免疫保护率可达80%.     

狂犬病病毒CVS株G基因和IFN-α基因的克隆及双基因真核表达载体的构建

从狂犬病病毒CVS毒株致死的小鼠脑组织中提取总RNA,通过RT-PCR获得G基因;以pMD18-T-α质粒为模板,PCR扩增得到IFN-α基因.两个基因和pIRES真核表达载体分别双酶切,连接构建P IRES-G/IFN-α,经PCR、双酶切鉴定和测序证明载体构建成功.测得的G基因序列长1 575 bp,与CVS株G基因氨基酸同源性为98.5%;IFN-α序列长为570 bp,与GenBank中登录号为NM 001017411的IFN-α基因氨基酸同源性为91.6%.     

DNA疫苗概述

１９９０年,Ｗｏｌｆ等做小白鼠基因治疗试验时,偶然发现将编码有蛋白质抗原的质粒ＤＮＡ直接导入动物细胞内,能在动物细胞内表达外源抗原,促使机体产生细胞免疫反应和体液免疫反应,称之为ＤＮＡ免疫［１］。１９９４年在日内瓦召开的专门会议上定名为ＤＮＡ疫苗。由...     

脾转移因子(TF)对小鼠巨噬细胞(Mφ)感染弓形虫的影响

弓形虫病的免疫是以细胞介导为主的免疫,其中,Mφ是机体抗弓形虫感染重要的效应细胞.本文旨在明确 TF 在体外激活小鼠腹腔 Mφ后的形态变化及对弓形虫消化的影响进行初步观察.按常规方法制备健康昆明鼠腹腔 Mφ,加含犊牛血清的1640培养液37℃培养,2 h 后洗去非沾附细胞,胰酶消化,洗涤、计数 Mφ,按6×10~5/mL 分装含飞片的培养瓶(1 ml/瓶~(-1)),另制备弓形虫免疫的猪脾脏细胞 TF_1和未免疫健康猪脾 TF_2加入含 Mφ培养瓶.另设不含 TF 的 Mφ对照瓶(组)。37℃密闭培养60 min     

基于成本核算的征地安置补偿方式比较研究

【研究目的】拟在对征地的多种安置方式进行成本分析基础上，以杭州市虾龙圩村被征耕地为例，研究征地中各种安置方式的成本差异；【研究方法】采用区片综合地价法、社会保障法和基准地价法分别计算货币安置、社会保障安置和留用地安置的安置成本；【结果】货币安置没有考虑到土地预期收益、土地的增值性，安置成本最低，社会保障安置易受被征耕地面积、劳动力人口比例影响，安置成本略高于货币安置的成本，留用地安置考虑到了土地区位，区域经济经济情况等影响土地价格的因素，安置成本最高；【结论】由于各类安置方式的补偿目标、补偿手段、费用计算方法不同，政府当期或近中期支付成本迥异。     

羊种布鲁氏菌wzt基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

为建立检测血清中布鲁氏菌抗体的间接ELISA方法,本试验采用PCR技术从羊种布鲁氏菌QY1菌株中扩增得到wzt基因片段,连接到pET-30a载体上,构建质粒pET-30a-wzt,将鉴定正确的质粒转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,经原核表达系统对其进行表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析后,用亲和层析镍柱纯化wzt重组蛋白备用。以wzt重组蛋白为检测抗原,逐步优化条件后建立布鲁氏菌间接ELISA检测方法。结果显示,试验成功构建了pET-30a-wzt原核表达载体,并在BL21（DE3）宿主菌中表达;SDS-PAGE和Western blotting结果表明,重组蛋白约为35 ku,表达形式为上清,条带单一、无杂带,有很好的反应原性和特异性。ELISA优化试验确定了最佳包被浓度为15 μg/mL,血清最佳稀释度为1：80,酶标抗体的最佳稀释度为1：5 000;通过检测24份阴性样品确定临界值,当样品D_{450 nm}值≥ 0.30为阳性,样品D_{450 nm}值<0.30时为阴性;特异性试验表明,该方法不与小肠耶尔森菌、大肠杆菌发生交叉反应;批内及批间变异系数均<10%;用该方法对120份血清样本进行检测,并与虎红凝集试验进行相符性验证,符合率为96%。本试验建立的间接ELISA方法为布鲁氏菌病的检测提供了可靠的技术手段。