供港雏鸡H5禽流感病毒潜伏状态及母源抗体衰减规律的调查

1 材料与方法 1．1 器材 微量血凝抑制试验及荧光RT-PCR检测病毒所需的各种器材。 1．2 试剂 （1）禽流感抗原由广州局动检实验室生产及提供，阳性血清由哈尔滨兽医研究所生产及提供。（2）0．5％鸡红细胞、阿氏液、PBS等试剂自配。（3）75％乙醇、氯仿、异丙醇（-20℃预冷）、AIVH5荧光RT-PCR检测试剂盒。     

应用金免疫层析技术检测猪瘟抗体的研究

用金标免疫层析技术测试30份标准阳性血清和18份标准阴性血清，结果阳性，阴性符合率100％。用该方法与ELISA试剂、dot-ELISA试剂及正向间接血凝进行比对试验检测血清样品205份，结果阳性率ELISA为86．8％，金标层析法为85.4％，dot-ELISAO 81．5％，正向间接血凝为58.5％，结果显示该方法特异性强，敏感性高，操作简单，使用方便。既可用血清，也可以用全血测猪瘟抗体，可广泛应用于猪场和个体养猪户现场检测。     

影响HBV标记物检测的物理因素

乙型肝炎是我国主要传染病之一。目前对其研究不仅局限于人医，而且已扩展到兽医。近年来已先后报道了从多种动物中检出HBV各种标记物[1、2、3]。由于HBV标记物检测受检验方法、试剂来源及其它因素影响甚大。本文就物理因素对HBV标记物的影响进行初步探讨，现将结果报告如下。1．材料与方法1．1待测阳性血清：待测阳性血清来自本单位肝炎门诊和市第一医院门诊同位素科，用于ELISA或RIA法检测的阳性血清标本。1．2检测所用的ELISA和RIA试剂盒：由三维生物工程有限公司生产，批号为960501和960503，均在有效期内使用。1．3检测方法1…     

单抗捕捉ELISA检测AEV抗体方法的研究

本研究初步建立了检测ＡＥＶ抗体的单抗捕捉ＥＬＩＳＡ　方法。ＡＥＶ腹水单抗（腹水效价为１　∶１×１０６）最佳稀释度为１∶２００，ＡＥＶ抗原工作浓度为１６．０８　μｇ／ｍＬ，血清稀释度为１∶１　００，　兔抗鸡酶标抗体工作浓度为１∶５００。经阻断试验、交叉试验、重复试验，以及与进口试剂　盒　进行平行检测４０份血清，总符合率为９２．５％，表明该方法特异性强、重复性好、敏感性高，　是一种有应用前景的方法。     

猪伪狂犬病血清抗体gE-ELISA检测方法的建立

以纯化的猪伪狂犬病病毒gE蛋白为抗原建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接gE-ELISA方法。最佳反应条件为，抗原包被浓度为1．7μg／mL，待检测血清1：40稀释。与伪狂犬病阳性血清反应为阳性，与猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和猪伪狂犬病gE缺失疫苗接种的猪免疫血清及SPF猪阴性血清均无交叉反应。批间、批内试验变异系数分别不超过5％和9％。用该方法与Ingezim ELISA试剂盒和HerdChek ELISA试剂盒同时对172份血清进行了平行检测，总符合率分别达93．6％和83．7％。试验结果表明：猪伪狂犬病血清抗体间接gE-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性，且重复性好，可用于猪伪狂犬病野毒感染猪的血清抗体检测。     

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的金黄色葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1融合蛋白作为检测抗原，通过优化ELISA反应条件，初步建立了检测血清特异性GST-mTSST-1抗体的间接ELISA方法，监测了小鼠血清中特异性GST-mTSST-1抗体水平的动态变化规律。方阵试验确定的GST-mTSST-1抗原的最适包被浓度为5．0μg／mL，血清最佳稀释倍数为1：100，ELISA阳性反应的临界值为D490nm≥0．219，批内和批间重复试验的变异系数均小于10％。应用该方法对试验小鼠血清进行检测，结果表明，建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性、特异性和较好的重复性，适用于检测特异性GST-mTSST-1血清抗体。     

禽流感灭活苗免疫后的HI抗体监测分析

2007年12月我们对浙江省长兴县16个规模养鸡场进行抽样检查,共抽检血样240份,采用血凝抑制（HI）试验进行了H5亚型禽流感血清抗体检测,现将检测结果报道如下。一材料与方法1材料（1）试剂：阿氏液,1％的鸡红细胞液,pH7．2的0．01mol／L磷酸盐缓冲液（PBS）按有关方法自行配制,4℃保存备用。     

牛分枝杆菌重组MPT83蛋白间接ELISA方法的建立

以纯化的牛分枝杆菌重组MPT83蛋白为包被抗原，建立了检测牛分枝杆菌抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA各组分的最适反应条件：抗原包被浓度为1μg／mL，酶标二抗稀释度为1：1600，血清稀释度为1：60，抗原和血清、血清和二抗均在37C反应30min，底物在37℃显色15min，D655nm阴性、阳性临界值为0．5。经阻断试验、交叉试验、重复性试验，表明该方法特异性强、重复性好。用该方法对18份结核菌素试验阳性牛血清和36份结核菌素试验阴性牛血清进行检测，结果显示，阳性血清的符合率为27．8％，阴性血清的符合率为91．7％。     

青海高原地区鸡流行病血清学调查分析

随着青海高原地区禽类及其产品市场流通日益频繁,鸡病发生及危害不断增加,为随时掌握鸡病疫情动态和观察鸡病免疫效果,全面防控疫病,我们从2000年至2004年对该地区鸡流行病进行了连续几年的血清学检测和分析。1方法与材料1.1方法:禽流感、鸡传染性法氏囊病、鸡白痢、用琼脂扩散免疫试验,检测血清中特异性抗体。鸡新城疫用血凝抑制试验,即微量血凝试验(HI),按常规微量法检测血清中HI抗体效价。禽白血病用酶联免疫吸附试验(ELISA)。1.2材料:禽流感、鸡白痢、鸡传染性法氏囊病琼脂扩散试剂,标准抗原、阳性血清、阴性血清由哈尔滨兽医研究所…     

分光光度法检测微量碘及消毒劲稀释液中碘含量

采用分光光度法，对微量碘的检测进行了探索。对本法的光吸收度与微量碘含量的相关性、方法的回收率、样品检测的相对平均偏差等进行了分析。结果发现，本法的相关系数R为0．9982，回收率在105％～95％之间，相对平均偏差＜1％，检测量可达1μg／ml。在灵敏性、特异性、稳定性等方面均达到化学分析方法的要求，可以用来进行定量检测。并采用本法对消毒劲稀释液的在室温条件下的碘含量变化进行了检测。1主要试剂和仪器淀粉碘化钾溶液（0．5％淀粉，1％碘化钾）；HP8452A紫外-可见光分光光度计。所用试剂均为分析纯试剂或基准试剂。2原理与…     

猪“猝死症”的病原分离鉴定与防治研究

1996年9月份至1997年元月份以来，我省某地猪场在仔猪中突然发生死亡，剖检可见小肠紫红及坏死，病程短、死亡率高。经过对送检死猪的细菌鉴定、血清分型、动物接种、免疫试验及毒物检查，最后确诊为A型魏氏梭菌引起的仔猪梭菌性肠炎。现将检验结果报告如下：一材料和方法（一）材料1．病死猪脏器（肝、脾）及肠内容物，均由某地猪场提供。2．培养基（1）厌氧肉肝汤（2）鲜血球脂平板（3）卵黄琼脂平板（4）含铁牛乳（5）糖发酵管3．试剂（1）焦性没石子酸（2）0．IN盐酸（3）0．1N氧化钠（4）吲哚试剂（5）V－P试剂均由河南农业大学微生…     

比较3种间接ELISA试验检测口蹄疫感染抗体的研究

将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。     

单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验调查耕牛血吸虫病

目前，血吸虫病流行的主要传染源是耕牛．为准确掌握耕牛感染血吸虫病的发病率，探索快速、敏感、特异的血清学诊断方法，1995年5月，我们在岳阳县麻塘境采用单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验，进行耕牛血吸虫病感染情况调查，并与粪便孵化法相比较，现报告如下，1材料和方法1．1材料1．1．1血清标本；156例，采用麻塘烷内耕十1．l．2标准试剂：家富日本血吸虫病单克隆抗体斑点西联免疫吸附试验诊断试剂盒，购自中国农科院上海寄生虫病研究所．1．1．3灭菌氯化钠溶液：自配．1．2方法A、B、C、D、E液均按试剂盒上操作规程于临用前配制．1，…     

济源奶牛新孢子虫病血清流行病学调查与分析

<正>新孢子虫可感染多种动物,其危害最为严重的中间宿主是牛。目前检测牛新孢子虫抗体的血清学方法主要包括ELISA、IFAT、凝集试验以及Western blot试验等。ELISA具有较高的特异性、稳定性,操作方法简便,易于掌握,可用于大规模的流行病学调查。因此,本实验采用间接ELISA,对采集的奶牛血清进行新孢子虫阳性检测。1材料与方法1.1主要试剂与仪器设备1.1.1主要试剂:备检血清(济源采集分离如表1-1所示,河科     

单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验调查羊血吸虫病

为较全面地掌握羊群血吸虫病的感染情况，以采取切实可行的防治措施．1995年4月，我们采用单克隆抗体斑点酶联免疫吸附（MCAb－Dot一ELISA）试验，对华容县幸福乡畜牧农场进行羊血吸虫病调查，现报告如下．五材料和方法1．互材料1．1．五血清标本；97例，其中绵羊87例，山羊10例，来自华容县幸福乡畜牧农场．1．1．2标准试剂：家富日本血吸虫病单克隆抗体斑点员联免疫吸附试验诊断试剂盒，购自中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所．1．1．3灭菌氧化钠溶液：自配．1．2方法A、B、C、DE治均按试剂盒上操作规程临用前配制．1．2．1取90…     

弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制

将样品垫（加样区）、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上，组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测，并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测，与弓形虫IHA检测结果的符合率为82．5％，金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2d检测到抗体。结果表明，检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂（金标试纸条）的敏感度高于IHA。     

马传贫病自然感染与人工免疫马匹的鉴别诊断

我们对送检的34份马血清应用琼脂扩散试验（ID）和单克隆酶标斑点试验（DB）进行鉴别诊断，确诊8份血清为马传贫病马血清；4份为马传贫弱毒苗免疫马；22份为ID、DB试验双阴性反应马匹。现报告如下：回材料与方法1．l材料1．1·IID试验抗原及阳性血清系黑龙江兽药一厂生产观阿批及9105批。1·l·2DB试验诊断试剂系哈尔滨兽医研究所国家生物技术研究室生产的诊断试剂盒。1．1．3马血清系送检的无溶血、腐败的血样。l、2方法（该法系哈兽研推荐）l·2·IID试验技农业部颁发的《动物检疫操作规程）进行。1．2．ZDB试验用直径2毫米玻璃棒…     

赤羽病间接ELISA检测方法的建立和标化

应用赤羽病病毒(AKV)OBE-1株和牛标准阴阳性血清，以蔗糖密度梯度离心纯化细胞毒为包被抗原，在国内首次建立了检测AKV抗体的间接ELISA方法。该方法与中和试验相关系数0．7614，特异性和重复性良好。应用此方法对南京、上海附近奶牛抽样检测，阳性率分别为26．7％和32．7％。对澳大利亚、加拿大、美国进口牛13600头份进行检测，全部阴性。     

抗原配制时间对禽流感血凝抑制试验结果的影响

血凝抑制试验(HI)是检测禽流感血清抗体常用的方法,广泛用于基层兽医实验室。在日常检测过程中,有的化验员会提前配制抗原液,方便点样后马上加入抗原液,以提高工作效率。笔者采用禽流感H5N1re-8相应试剂进行检测,探究抗原配制时间对于HI试验结果的影响。     

重组N蛋白间接ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白作为包被抗原，建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法，并确定了ELISA最佳工作条件：抗原包被浓度为0．27μg/ml，37C1h加4C过夜，血清(1：40)和酶标免抗猪IgG(1：400)分别在37℃温育30min，底物溶液37℃显色15min。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高；与美国IDEXX试剂盒相比较，特异性和敏感性分别为97．6％和92．1％，无显著性差异。用已建立的方法检测临床血清样本187份，总阳性率为30．5％。