传染性支气管炎病毒(M41株)HI试验抗原的特异性和敏感性试验

采用本研究室制备的3批传染性支气管炎病毒(IBV,M41株)HI试验抗原,分别对100份和80份不同鸡血清进行IBV HI抗体检测,同时用IBV ELISA抗体检测试剂盒进行检测,比较两种不同方法检测的特异性和敏感性。结果显示,特异性试验中80份SPF鸡血清,自制抗原检测均为阴性,IBV ELISA检测79份为阴性,10份其他鸡病血清,两种方法检测9份均为阴性,10份IBV阳性血清两种方法检测均为阳性;敏感性试验中,74份已知IB疫苗免疫或IBV M41株感染鸡血清IBV HI检测72份为阳性,阳性检出率为97.3%(72/74),IBV ELISA检测74份均为阳性,阳性检出率为100%(74/74),SPF鸡血清及其他鸡病血清,两种方法检测均为阴性,两种检测方法总符合率为97.5%,差异不显著(P0.05)。试验结果证明,本研究室自制抗原具有良好的特异性,特异性为100%,抗原同时具有良好的敏感性,但IBV ELISA方法的敏感性要高于IBV HI方法。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

建立了一种检测鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)抗体终点滴度(end-point titer, ET)的间接ELISA方法，以应用于监测鸡免疫疫苗或者感染野毒后的抗体。以大肠杆菌表达的IBV核衣壳(N)蛋白作为包被抗原，以SPF鸡血清和感染IBV的SPF鸡血清分别作为阴性血清和阳性血清对照，优化确定出ELISA的各项技术参数。对66份SPF鸡血清进行测试，确定了阴、阳性S/P临界值为0.385。特异性试验表明包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10.00%。选取了50份临床血清样品，通过阳性-阴性阈值(positive negative threshold, PNT)基线确定ET值，建立了固定血清稀释倍数(1∶500)处S/P值与ET的线性回归方程，相关系数(R²)为0.959 3(P<0.000 1)。通过检测2个商品鸡群在1～49日龄不同时间点采集的461份血清样本，比较了建立的IBVN-ELISA方法与IDEXX公司提供的商品化试剂盒。本研究建立的I...     

松江区家禽弓形虫感染的血清学调查

应用间接血凝试验(IHA)对松江区13个镇(街道)的禽类养殖户及3个规模养鸡场的580份禽类血清进行了弓形虫感染抗体检测,共检出抗体阳性血清91份,总抗体阳性率为15.69%(其中鸡抗体阳性率为10.03%、鸭抗体阳性率为26.54%、鸽抗体阳性率为5.0%)。结果表明,松江区禽类养殖场(户)均存在不同程度的弓形虫感染,且散养鸡的阳性率明显高于规模场鸡,散养鸭的阳性率明显高于散养鸡。     

2007年福建省部分地区鸡白痢血清学调查

用快速血清平板凝集反应的方法对我省部分地区养殖场、散养户的鸡进行鸡白痢的血清学调查。结果共检测检测样品1278份,阳性561份,阳性率49.3%,其中养殖场875份鸡血清样品中检出阳性374份,阳性率为42.7%;散户403份鸡血清样品中检出阳性187份,阳性率为46.4%。     

深圳口岸观赏鸟及其它飞禽疫病的血清学检验报告

作者等用血清学检验旅客零星携带进出口的观赏鸟及其它飞禽。即用血凝抑制(HI)试验诊断新城疫,从21份观赏鸟的血清中检出抗体阳性6份(占28.57%),从11份其它飞禽血清中检出抗体阳性4份(占36.36%);用间接血凝(IHA)试验诊断鹦鹉热,从上述观赏鸟、飞禽32份血清中检出抗体阳性1份;用平板法诊断霉形体病及鸡白痢,经分别对26份和31份血清检测,结果均阴性。     

产蛋下降综合症的血清学调查

应用微量血凝抑制试验(MHI).对20个鸡场482份抽样血清进行了产蛋下降综合症(EDS-76)的血清学调查.结果,阳性279份,阳性率为57.9%,并对不同周龄、不同品种及不同性别的鸡进行了检测.     

大理州鸡沙门氏菌血清学调查

为了解大理州鸡群沙门氏菌的感染情况,从大理州9个县(市)的规模化养鸡场及散养场(户),随机采集鸡的血清样本1424份,进行鸡沙门氏菌血清学相关检测.结果:1424份血清样品中,检出阳性样品469份,平均阳性率为32.94％.其中规模化养鸡场检测数为1055份,阳性318份,阳性率为30.14％;散养场(户)17家,抽检...     

乐都区禽白血病的血清学调查

禽白血病是一种由禽白血病病毒引起鸡的不同组织发生良性和恶性肿瘤的传染性疾病。为了了解乐都区禽白血病的感染情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)对乐都区5个规模养殖场不同品种的鸡采集100份血清进行了检测,检出阳性49份,阳性率49%。     

鸡传染性喉气管炎兔源高免血清有效酶标免疫组化试验

用辣根过氧化物酶HRP标记ILT兔源高免血清抗体，进行免疫组化试验检测15份人工感染ILT患鸡，5份(ND)患鸡和10份健康鸡气管分泌物，并进行了特异性和敏感性测定．结果人工感染ILT患鸡阳性检出率高达100％，ND患鸡和健康鸡阳性检出率为0．表明ILT兔源高免血清酶联免疫组化试验是一种特异性强、敏感性高的检测诊断方法．     

鸡传染性喉气管炎病毒的荧光抗体检测

建立了一种鸡传染性喉气管炎(ILT)的荧光抗体检测技术，用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体，对15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和10份健康鸡的气管分泌物进行了检测，并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示，人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达100％，ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为0；该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高。     

乳胶凝集试验检测鸡传染性法氏囊病毒血清抗体的研究

以鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因工程抗原致敏乳胶微粒,用IBDV阳性血清进行方阵滴定,以最佳致敏系件制成乳胶抗源,建立乳胶凝集试验(LAT),用来检测血清中IBD抗体。对467份待测血清分别、同时作LAT和双向琼琼脂免疫扩散试验(DATA)。结果,LAT阳性419份,阴性48份;DAGT阳性425份,阴性42份.试验表明乳胶凝集试验操作简便、快速、敏感性高、特异性强,可用于现场检测,适合基层单位检测IBDV血清抗体。     

银川地区部分鸡场鸡白痢的流行病学调查

为了解银川地区鸡白痢沙门氏菌病的感染现状,于2007-2009年间,随机选择不同鸡场和农户的鸡1 702只,进行采血并分离血清,采用鸡白痢血清平板凝集试验进行检测.结果表明,1 702份血清中,检出阳性血清110份,平均阳性率为6.46%,统计结果显示,该次调查中较大规模的鸡场鸡白痢的感染率小于小型养鸡场和农户(P<0.05):鸡白痢的感染率与鸡的品种、日龄、饲养方式无关.3年间,鸡白痢的感染率呈现递减趋势(P<0.05).结合调查结果分析了发病原因.并提出了综合防治意见和措施.     

检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用

为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术，本研究采用胶体金标记兔抗鸡Ig G，制备金标垫，将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔Ig G抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线，优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示，胶体金标记兔抗鸡Ig G的最佳p H为8.5，最佳标记浓度为7μg/mL;r PlpB和羊抗兔Ig G抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/m L。利用该方法检测SPF鸡血清，鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清，结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性，其他均为阴性，表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测，结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性，表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时，同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异，表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测，结果显示，二者阳性符合率为91.5%，阴性符合率为100%，总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采...     

动物医院临床血清样品中干扰抗体的筛查及干扰消除

为了筛查动物医院临床血清样本中的干扰抗体以避免其实验室检测结果呈现假阳性,影响临床诊断,试验采用一种独立于物种的双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法对来自于福建省部分地区动物医院接诊的犬、猫血清样本进行干扰抗体筛选和评估,用鸡IgY替换纯化小鼠IgG进行干扰抗体消除试验,并对干扰抗体阳性率与样本基本特征进行关联性分析。结果表明：在83份犬血清样本中,有19份样本为干扰抗体阳性,阳性率为22.9%;在81份猫血清样本中,有11份样本为干扰抗体阳性,阳性率为13.6%。经干扰抗体消除试验后,所有阳性血清样本中的干扰抗体均得到了有效消除。不同年龄、性别、绝育情况与品种犬之间的干扰抗体阳性率均差异不显著(P>0.05);不同年龄猫之间的干扰抗体阳性率显著差异(P<0.05),不同性别、绝育情况与品种之间的干扰抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。说明所检测的犬、猫血清样本中存在干扰抗体,用鸡IgY替换纯化小鼠IgG可对干扰抗体进行有效消除。     

河南省减蛋综合症(EDS—76)血清学调查

1992年1月至1993年6月,我们在河南省17个地区112个鸡场210群鸡中随机抽检1619份血样,共检出EDS—76血清阳性鸡:448只(27.76),阳性鸡群90个(42.8％),阳性鸡场69个(61.8％)。测检25群鸭173份血样,检出阳性鸭66只(38.2％),阳性鸭群21个(84％)。全省17个地区中12个地区     

酶标单抗阻断ELISA检测鸡白痢和鸡伤寒抗体

以辣根过氧化物酶标记的沙门氏菌O9单抗3-47-0与包被的鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种抗体阻断EL ISA以检测鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌感染。该方法基于待检血清样品抑制酶标单抗与脂多糖的结合,以检测鸡白痢和鸡伤寒特异性抗体。对72份已知鸡白痢阳性血清(抑制率为(98.5±4.0)%)、54份已知鸡白痢阴性血清(抑制率为(15.3±8.0)%)、42份SPF鸡血清(抑制率为(0.8±7.2)%)检测的结果表明,该方法具有很强的区分能力。在人工感染试验中,从第2周开始,该方法能从全部鸡只中检测到特异性抗体,比全血玻板凝集试验(PAT)早1周时间。对344份种鸡血清的检测结果表明,单抗阻断EL ISA比PAT特异性好、敏感性高。另外,该方法也能检测出与鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌有共同抗原的沙门氏菌感染产生的抗体。     

部分省市鸡白痢和鸡伤寒的单抗阻断ELISA血清学调查

采用单抗阻断ELISA法对我国部分省市不同品种、不同类型的鸡群进行了鸡白痢、鸡伤寒的血清流行病学调查。结果，在2309份鸡血清样品中检出阳性359份，阳性率为15．5％，不同鸡场鸡群感染率悬殊较大，从0到54．5％不等。表明，我国鸡群中鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌的流行呈现多样化。     

鸡白痢的血清学调查

应用平板凝集试验,对11个鸡场613份抽样血清进行了鸡白痢的血清学调查,结果其中未进行过检疫净化鸡场血清467份,阳性53份,阳性率为11.4％;曾采取检疫净化措施鸡场血清147份,阳性率2份,阳性率性为1.4％。对不同年龄、品种及性别的检查结果作了比较。     

SPF鸡感染禽白血病病毒A/B亚群后血清抗体与卵黄抗体的变化及其相关性

拟研究以卵黄抗体替代血清抗体检测判定SPF鸡群禽白血病病毒(ALV)感染状态的可行性。在人工接种ALV-A/B后的40只SPF鸡刚开产时,从21只抗体阳性鸡及19只抗体阴性鸡分别采集血清和卵黄并一一对应,比较卵黄不同稀释度与血清中ALV-Ab抗体的阴阳性吻合率及ELISA检测S/P值相关系数。另外36只同批次不攻毒的SPF鸡单独饲养作为对照,76只鸡在25~34周龄期间,每隔3周分别采集1次血清,每周采集1次种蛋,共采集了304份血清样品及836份卵黄样品。所有血清和卵黄抗体用IDEXX的ALV-Ab抗体ELISA检测试剂盒检测。血清按试剂盒规定的1∶500稀释,卵黄按预试验结果选定稀释度稀释。同一只鸡同一时段采集的血清和卵黄样品,严格在同一次ELISA试验中检测。结果表明,相对于血清抗体,将卵黄做1∶300稀释时,假阳性和假阴性最少,确定1∶300为卵黄最适稀释度。在25~34周龄,836份卵黄抗体的检测判定结果与304份血清抗体检测结果吻合率达94.7%,即这些血清抗体阳性鸡同时期采集的卵黄抗体也全部阳性,血清阴性鸡的卵黄抗体也均为阴性。结果提示疫苗生产企业可通过检测SPF种蛋的卵黄抗体来判断SPF鸡场对ALV的洁净度。     

山西省汾阳市鸡白痢的血清学调查

2007～2010年,笔者对山西省汾阳市七个乡镇不同生长阶段的262群鸡抽取血样1189份,采用血清平板凝集试验进行鸡白痢抗体检测。结果显示,阳性数96份,阳性率8.07%。由此可见,该地区鸡群存在不同程度鸡白痢沙门氏菌的污染。