羊肉中多黏菌素A和多黏菌素B液相色谱—串联质谱检测方法的建立

[目的]建立一种液相色谱—串联质谱同步测定羊肉中多黏菌素A和多黏菌素B的方法。[方法]样品经10%三氯乙酸水溶液—乙腈溶液提取,WCX固相萃取柱净化,0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速0.30 mL/min,多反应监测(MRM)正离子模式扫描,用液相色谱—串联质谱仪检测,基质添加标准溶液外标法定量。[结果]多黏菌素A和多黏菌素B在5.0～110.0μg/L浓度范围内呈良好线性关系,线性相关系数R0.996,方法的定量限为0.50μg/kg,3个添加水平的平均回收率为73.2%～115.6%,RSD≤10.0%。[结论]该方法高效、准确,适用于羊肉样品中多黏菌素A和多黏菌素B的定量及确证检测。     

HPLC-MS/MS法研究恩诺沙星在鸡蛋中残留消除规律

建立了高效液相色谱—串联质谱法（HPLC-MS/MS）检测鸡蛋中恩诺沙星、环丙沙星残留的方法。鸡蛋样品经1%乙酸乙腈提取、正己烷除脂, 用HPLC-MS/MS进行检测。恩诺沙星、环丙沙星在0.5~500 ng/mL浓度时线性关系良好（r≥0.999）;恩诺沙星回收率为87.7%~99.1%、环丙沙星的回收率为89.1%~101.4%, 检测限为0.5 μg/kg, 定量限为1.0 μg/kg。应用该方法初步研究了恩诺沙星及其代谢物环丙沙星在鸡蛋中的残留消除规律。结果表明, 给药后鸡蛋中恩诺沙星及其代谢物蓄积迅速, 停药8 d后痕量恩诺沙星代谢缓慢, 25 d后恩诺沙星代谢完全。     

超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱复合质谱法测定鸡蛋中黏菌素残留的研究

建立了鸡蛋中黏菌素残留检测的超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱复合质谱方法（UPLC -QTRAP）。样品用25%甲醇提取后,正己烷去脂,固相萃取柱净化,上机测试。液相色谱条件：色谱柱为BEH C18（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）,流动相为0.5%甲酸水溶液+0.5%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为30 ℃,进样量为5 μL。质谱条件：电喷雾正离子源（ESI+）,采用多反应监测-信息依赖扫描-增强子离子扫描（MRM-IDA-EPI）方式采集。结果表明：在鸡蛋中,黏菌素A和黏菌素B在20~800 ng/kg基质匹配标准溶液浓度范围内均呈现良好的线性关系,相关系数（R2）大于0.990;鸡蛋中黏菌素A和黏菌素B的定量限均为30 μg/kg,检测限为10 μg/kg。鸡蛋中黏菌素A和黏菌素B在30、150和300 μg/kg三个添加浓度平均回收率都在67.2％~106％之间,批内、批间RSD均小于20%。该方法定性准确、灵敏度高、简便快捷,回收率和精密度满足残留检测要求。     

3种止痢型中兽药液体制剂中非法添加黏菌素的HPLC-PDA检查方法的建立

为建立止痢型中兽药液体制剂中非法添加黏菌素的高效液相-二极管阵列色谱法,采用十八烷基键合硅胶为填充剂,流动相为乙腈∶硫酸钠磷酸水溶液(20∶80),硫酸钠磷酸水溶液∶硫酸钠水溶液(7 g/L)∶磷酸水溶液(6.8%)(50.5∶22.75)。检测波长为215 nm。结果显示,在该色谱条件下,3种止痢型中兽药液体制剂本底色谱峰对黏菌素E_1的测定无干扰;黏菌素E_1在0.04～2 mg/mL浓度范围内线性关系良好;杨树花口服液的检出限为10 mg/mL,板蓝根注射液及小檗碱注射液的检出限均为4 mg/mL;上述3种制剂的添加回收率在95.9%～97.9%之间,表明该方法回收率较好,准确度较高,可用于止痢型中兽药液体制剂中非法添加黏菌素的定性定量检测。     

液质联用法检测禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留

建立了超高效液相色谱串联质谱法检测禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留物的方法。采用电喷雾离子源（ESI）、多反应监测（MRM）、正负离子模式同时扫描检测,内标法定量。禽蛋试样采用碱化乙酸乙酯和乙腈提取,正己烷萃取,LC/MS-MS分析。结果表明,该方法的检测限（LODs）为0.1 μg/kg,定量限（LOQs）为0.2 μg/kg。在0.2~200 μg/L范围内均呈良好线性关系,并且3个添加浓度的平均回收率范围为70%~110%,相对标准偏差（RSD）小于10%。该方法简便高效、准确可靠,可作为禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的检测方法。     

荧光定量技术检测牛奶中四环素类药物残留准确性的研究与探讨

以四环素为对照物建立标准曲线,得出该药物最低检出限为4.93 μg/L。为保障产品的稳定性,可认为四环素类荧光定量检测卡在生鲜乳中的检测限为5.00 μg/L。样品各添加浓度的回收率均在84.60%~113.94%,各添加浓度的批内、批间变异系数均低于15.00%。四环素类荧光定量检测卡检测为阳性和仪器法检测为阳性的符合率为100.00%。     

液相色谱-串联质谱法测定饲料中硫酸黏菌素

应用液质联用法检测饲料中硫酸黏菌素时,饲料中黏菌素经三氯乙酸溶液提取,同时用乙酸铅沉淀蛋白质,再用HLB固相萃取柱净化,浓缩后用超高效液相色谱-串联质谱联用仪检测,外标法定量。经试验:标准曲线浓度为10、30、100、300、1 000、3 000、10 000 ng/mL的系列黏菌素标准工作液时,线性方程为y=39.22x+119.86,相关系数为0.9945,在相应的浓度范围内,各药物定量离子峰面积与浓度呈线性相关;方法的检测限为0.01 mg/kg,定量限为:0.05mg/kg;饲料中黏菌素的平均回收率范围为70%~112%;日内变异系数范围为4%~14%,日间变异系数范围为6%~12%,方法回收率高,精密度好。     

超高效液相色谱—串联质谱法检测鸡血液样品中喹诺酮类药物残留

旨在建立鸡血液样品中多种喹诺酮类药物残留的超高效液相色谱—串联质谱方法。样品经乙腈提取,经Waters Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱分离,以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子（ESI⁺）模式电离,MRM扫描模式检测。经方法学验证,该方法的线性关系、回收率、精密度均符合要求。应用超高效液相色谱—串联质谱法建立了鸡血液样品中多种喹诺酮类药物同时检测的方法,实现了动物血液样品中12种喹诺酮类药物同时定性、定量分析。     

氟苯尼考对人工感染多杀性巴氏杆菌小白鼠的防治效果研究

[目的]观察抗菌药物氟苯尼考对多杀性巴氏杆菌的体外抑菌效果,评价其对人工感染多杀性巴氏杆菌小白鼠的防治效果。[方法]采用微量肉汤稀释法测定临床常用的9种抗菌药物对多杀性巴氏杆菌的抑菌效果,筛选敏感抗菌药物,进一步选择小白鼠开展预防试验和治疗试验,观察抗菌药物对人工感染多杀性巴氏杆菌小白鼠的防治效果。[结果]在9种常见的抗菌药物中,对多杀性巴氏杆菌抑菌效果最好的是氟苯尼考和多西环素,2种药物的MIC为1 μg/mL,MBC为2 μg/mL;抑菌效果最差的是延胡索酸泰妙菌素,MIC为64 μg/mL,MBC为128 μg/mL。利用多杀性巴氏杆菌人工感染小白鼠,治疗试验与预防试验均设置阴性对照组（注射生理盐水）、阳性对照组（攻毒细菌）以及药物治疗或预防组（攻毒细菌+氟苯尼考）;治疗试验获得氟苯尼考的保护率为78.6%,预防试验的保护率为84.6%。[结论]氟苯尼考对人工感染多杀性巴氏杆菌小白鼠有较好的防治效果。     

RFRP-3对大鼠采食行为和生长性能的影响

为了探讨RFRP-3对大鼠采食行为以及生长性能的影响,选取体重相近的清洁级SD大鼠30只,随机分为3组,分别为对照组[腹腔注射生理盐水200 μL/(次·只)]、RFRP-3低剂量组[腹腔注射1 μg/100 μL RFRP-3,200 μL/(次·只)]和高剂量组[腹腔注射10 μg/100 μL RFRP-3,200 μL/(次·只)],每组10只,雌、雄各半,每天注射2次,连续腹腔注射14 d。观察和记录大鼠的采食量、采食行为和体重变化,计算料肉比及Lee指数,分离血清并检测血脂相关指标,并对下丘脑食欲相关因子的表达水平进行检测。结果表明,与对照组相比,仅在光照环境中腹腔注射高剂量RFRP-3会导致大鼠采食量极显著(P<0.01)增加;采食行为方面主要表现为采食频率极显著(P<0.01)增高和饱腹率明显下降;生长性能方面主要表现为体重增长极显著(P<0.01)加快以及料肉比显著(P<0.05)降低;在肥胖指标中,Lee指数显著(P<0.05)增加,血清中甘油三酯和总胆固醇的含量极显著(P<0.01)升高;下丘脑NPY mRNA表达水平显著(P<0.05)上升,而POMC mRNA表达水平显著(P<0.05)下降。试验表明,腹腔注射RFRP-3可促进大鼠的采食行为并提高其生长性能,且这种生理功能的发挥可能是通过调节下丘脑食欲相关因子的变化完成的。     

蒙古族传统奶酪中8种脂溶性维生素和β-胡萝卜素高效液相色谱检测方法的建立

[目的] 建立同时测定蒙古族传统奶酪中VA、VD₂、VD₃、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、VK₁共8种脂溶性维生素及天然色素β-胡萝卜素含量的高效液相色谱方法（high performance liquid chromatography,HPLC）。[方法] 选取蒙古族传统奶酪为试样,经无水乙醇提取,酶解后用正己烷萃取,旋蒸浓缩,复溶过滤膜。经Agilent poroshell 120 EC-C18（150 mm×4.6 mm,4 μm）色谱柱分离,以甲醇和水（体积比为95∶5）为流动相,采用FLD和VWD检测器检测,外标法定量。[结果] VA、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、VK₁、β-胡萝卜素在0.1~1.0 μg/mL浓度范围内线性关系良好,VD₂、VD₃在0.05~1.00 μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数R²均大于0.998。[结论] 建立的HPLC方法具有简便、快捷、灵敏度高、回收率高、分析时间短等优点,可为蒙古族传统乳制品中多种脂溶性维生素及天然色素的快速检测提供技术支撑。     

粤西某市液态奶中壬基酚的污染调查

[目的]了解液态奶中壬基酚的污染水平和健康风险,为食品中壬基酚的标准测定和风险管理提供参考。[方法]从各大市场随机抽取液态奶,采用超高效液相色谱-质谱联用法测定壬基酚含量。[结果]共检测销售量较高的巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳两类液态奶,共100 件样品,壬基酚检出率为80.00%,平均检测值为82.43 μg/kg。其中,巴氏杀菌乳中壬基酚平均检测值较高,为87.06 μg/kg。壬基酚的膳食暴露风险处于可接受范围之内。[结论]分析100 件市售液态奶中壬基酚的检测结果,对市售液态奶中壬基酚的安全性进行了风险分析,结果显示市场上液态奶相对比较安全,对人体健康存在较低风险。     

昆明市奶牛部分饲料霉菌毒素污染状况调查

[目的]为掌握昆明市部分奶牛饲料霉菌毒素污染状况,采集了昆明市部分奶牛场（养殖小区）的饲用玉米面、全株玉米青贮,全混合日粮（TMR）共80 批次进行分析。[方法]采用酶联免疫吸附试剂盒测定80 批饲料中黄曲霉毒素B₁（AFB₁）、赭曲霉毒素A（OTA）,玉米赤霉烯酮（ZEN）、伏马毒素（FB₁+FB₂）、T-2毒素、呕吐毒素（DON）6 种霉菌毒素含量,超标情况按照《GB 13078—2017 饲料卫生标准》判定。[结果]玉米面中ZEN检出率88.2%,平均值为（1 047.2±935.5）μg/kg,超标率达到76.4%; DON检出率82.3%,平均值为（1 375.2±635.2）μg/kg,FB₁+FB₂+FB₃检出率35.3%,平均值为（277.4±490.9）μg/kg,AFB₁检出率为35.3%,平均值为（8.6±2.9）μg/kg;OTA、T-2毒素均未检出。TMR中DON检出率25%,平均值为（1 047.2±935.5）μg/kg,AFB₁检出率为16.7%,平均值为（2.3±1.2）μg/kg,ZEN检出率16.7%,平均值（120.1±112.6）μg/kg,均未超标;OTA、T-2毒素、FB₁+FB₂+FB₃均未检出。全株玉米青贮饲料中DON检出率47.1%,平均值为（1 375.2±635.2）μg/kg,ZEN检出率为29.4%,平均值为（142.5±191.1）μg/kg,均未超标;AFB₁、OTA、T-2毒素、FB₁+FB₂+FB₃均未检出。[结论]霉菌毒素检出率：DON>ZEN>AFB1>FB₁+FB₂+FB₃ >T-2毒素和OTA;污染程度：玉米面>全株玉米青贮>TMR。三类饲料中霉菌毒素都有不同程度的污染,其中玉米面霉菌毒素污染风险最大,在运输、存储、使用时要予以高度关注,避免造成经济损失。     

腹腔注射GnIH对雄性小鼠采食、体重和血糖稳态的影响

目的 探究促性腺激素抑制激素（gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH）对雄性小鼠采食、体重和血糖稳态的影响。方法 选取体重及日龄相近的雄性小鼠20只,随机分为2组,分别为对照组[腹腔注射生理盐水100 μL/（次·只）]和试验组[腹腔注射20 μg/100 μL GnIH,100 μL/（次·只）],每组10只,每天注射2次,连续注射21 d。观察和记录小鼠的采食情况;对小鼠的体重、空腹血糖、葡萄糖耐量、胰岛素耐量进行测定;利用实时荧光定量PCR（qPCR）方法对小鼠胰腺中胰岛素转录因子基因（NeuroD1）、胰岛素基因（Ins）、胰高血糖素基因（Gcg）、胰岛素转录调控因子基因（Pdx1）mRNA相对表达量进行检测。结果 与对照组相比,试验组小鼠平均日增重和平均日采食量极显著（P<0.01）升高;试验组小鼠空腹血糖曲线下面积极显著（P<0.01）增加,葡萄糖耐量的血糖曲线下面积极显著（P<0.01）增加,胰岛素耐量的血糖曲线下面积极显著（P<0.01）增加;试验组小鼠胰腺Gcg基因mRNA相对表达量显著（P<0.05）升高,Ins基因mRNA、Pdx1基因mRNA和NeuroD1基因mRNA相对表达量均显著（P<0.05）下降。结论 慢性腹腔注射GnIH会引起雄性小鼠采食量和体重增加,并引起机体血糖紊乱。     

17种植物性饲料原料中伏马毒素(B1+B2)、赭曲霉毒素A、T-2毒素、黄曲霉毒素B1污染状况调查检测分析

为了解掌握伏马毒素（B₁+B₂）、赭曲霉毒素A、T-2毒素、黄曲霉毒素B₁在植物性饲料原料中的污染状况,指导饲料生产企业和养殖企业开展霉菌毒素防控,降低霉菌毒素对饲料产品质量及畜禽养殖危害,减少经济损失,2019年对17种62份植物性饲料原料进行采集,采用液相色谱—串联质谱法、免疫亲和柱净化—高效液相色谱法检测,依据《饲料卫生标准》（GB 13078—2017）判定分析。结果表明：伏马毒素（B₁+B₂）、赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B₁在17种植物性饲料原料中的污染状况差别明显,伏马毒素（B₁+B₂）、赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B₁平均检出率分别为37.09%、8.06%、29.03%,最大检测值分别为15.96 mg/kg、26.60 μg/kg、351.00 μg/kg。从检测结果得出,4种霉菌毒素在17种植物性饲料原料中的污染较重,整体污染率达48.40%,玉米皮、喷浆玉米皮、花生粕3种植物性饲料原料中黄曲霉毒素B₁超标,污染率与超标率不一定呈正比,表明霉菌毒素在植物性饲料原料中污染普遍,对饲料产品及养殖安全造成严重影响。针对该问题,提出控制植物性饲料原料质量建议,为今后控制饲料原料中霉菌毒素含量提供参考。     

黏菌素HPLC分析方法的研究进展

黏菌素是一类对革兰氏阴性致病菌具有很强体外抗性的多肽抗生素,能治疗由多重耐药性病菌引起的多种疾病。黏菌素的分析方法主要有微生物学方法、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫分析法(ELISA)、毛细管电泳法(CE)及薄层层析法(TLC)等。本文主要综述黏菌素的高效液相色谱(HPLC)分析方法的研究进展。     

微波水解—氨基酸自动分析仪法测定饲料中色氨酸的含量

[目的] 建立微波水解—氨基酸自动分析仪快速测定饲料中色氨酸含量的方法。[方法] 以奶牛全混合日粮饲料（TMR）为研究对象,通过单因素试验和正交试验筛选微波碱水解最佳条件,联合氨基酸自动分析仪LCAK06/Na（4.6 mm×150 mm）色谱柱分离及快速测定饲料中色氨酸含量。[结果] 水解温度是影响饲料色氨酸含量的最主要因素。微波碱水解测定饲料中色氨酸含量的最佳条件是：水解温度170 ℃、水解时间30 min、碱浓度5 mol/L,通过氨基酸自动分析仪测定TMR饲料色氨酸含量为0.14%。色氨酸在0.025~0.600 μmol/mL峰面积与浓度线性关系良好,相关系数（r）为0.999 7。定量限（LOQ）为0.05%,色氨酸回收率93%~104%,精密度RSD为3.58%。[结论] 该方法高效、准确,检测结果与国家标准《饲料中色氨酸的测定》（GB/T 15400—2018）中的常规碱水解法对比无显著差异,对于饲料中色氨酸含量测定具有参考价值。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定饲料中6种多肽类抗生素

本研究旨在建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定饲料中6种多肽类抗生素的分析方法。样品用0.1 mol/L盐酸水溶液/乙腈（3：7，V/V）作为提取液提取，经PRiME HLB固相萃取柱净化，在电喷雾电离正离子模式下使用超高效液相色谱-串联质谱仪进行测定，外标法定量。结果表明：恩拉霉素A和B、杆菌肽A和B在质量浓度为5 ~ 200 μg/L内，维吉尼亚霉素M1和S1在质量浓度为2.5 ~ 100 μg/L内线性关系良好，相关系数（r2）为0.9985 ~ 0.9991。6种多肽类抗生素在添加浓度0.025 ~ 1.0 mg/kg内，平均回收率为83.2% ~ 112.1%，相对标准偏差（RSDs）小于7.8%，方法的定量限为0.025 ~ 0.05 mg/kg。该方法快速简便、准确可信、灵敏度高，适合饲料中多肽类抗生素的检测。 [关键词] 超高效液相色谱-串联质谱法|PRiME HLB固相萃取柱|饲料|多肽类抗生素     

内蒙古4种家畜乳硒含量测定及评价

[目的] 探明内蒙古4种家畜乳的硒含量水平。[方法] 从内蒙古东北部到西部8个旗县采集双峰驼、蒙古马、萨能山羊和荷斯坦牛4种家畜代表性混合乳样48份,涉及188头（只/匹）动物个体乳样。利用原子荧光光谱法测定乳硒含量,并对乳硒含量的地区和畜种差异进行统计学分析和比较。[结果] 4种家畜乳硒含量存在地区差异：阿拉善左旗双峰驼乳硒含量[（5.96±0.41）μg/kg]约为鄂温克族自治旗双峰驼乳硒含量[（2.89±0.12）μg/kg]的2倍;呼和浩特市荷斯坦牛乳硒含量[（8.74±0.22）μg/kg]约为鄂温克族自治旗荷斯坦牛乳硒含量[（2.26±0.41）μg/kg]的3.8倍;正蓝旗蒙古马乳硒含量[（6.65±0.57）μg/kg]约为鄂温克族自治旗蒙古马乳硒含量[（1.02±0.42）μg/kg]的6.5倍;同在西部区,杭锦旗萨能山羊乳硒含量为[（8.95±1.32）μg/kg],略高于五原县萨能山羊乳硒含量[（6.28±0.80）μg/kg],但二者差异不显著（P>0.05）。家畜种类不同乳中硒含量也存在差异：双峰驼、萨能山羊和荷斯坦牛的乳硒含量整体高于蒙古马;萨能山羊乳硒含量显著（P<0.05）高于蒙古马乳。4种家畜乳硒含量数据都较为离散,提示乳中硒含量不仅存在跨东西部地区的差异,还可能存在局部地质丰度效应,也可能与外来饲草料和舔砖等有关。[结论] 内蒙古家畜乳硒含量整体较低,并存在东北部显著低于中西部地区的现象;富硒饲养是内蒙古地区养殖业和乳品加工业高品质发展的一个有效途径。     

不同降水年型下饲用燕麦产量对降水变化的响应研究

[目的] 探究不同年型下饲用燕麦产量对各生育期降水变化的响应,为饲用燕麦抗旱与高效生产提供参考。[方法] 利用作物生长机理模型APSIM（agricultural production systems simulator）,以山西省朔州市右玉县1980—2009年的历史气候气象数据作为原始情景,将饲用燕麦生育期划分为4个阶段[阶段1（播种—拔节）、阶段2（拔节—抽穗）、阶段3（抽穗—灌浆）、阶段4（灌浆—收获）],并提取典型气候条件（干旱、平水、丰水）建立12个新的气候情景并进行模拟,分析饲用燕麦产量受降水变化的影响。[结果] 在干旱情景（DS）中,产量与水分利用效率（water use efficiency,WUE）较原始情景分别下降了38.0%~60.9%与31.8%~16.9%（P<0.01）,其中,抽穗—灌浆期采用历史数据时,指标的下降幅度最小。对于平水情景（NS）来说,产量相对原始情景的变化为-3.4%~20.0%,WUE为0~10.0%,拔节—抽穗期及灌浆—收获期采用历史数据时指标的变化显著（P<0.05）。丰水情景（WS）中,饲用燕麦产量与WUE相对原始情景均显著提升（P<0.01）,幅度分别达到33.3%~60.5%与6.8%~14.8%,且播种—拔节期的降水变化对指标有相对明显的影响（R²=0.377 7,P<0.01）。[结论] 饲用燕麦产草量和水分利用效率WUE在干旱、平水、丰水年型中都对灌浆—收获期的降水变化没有明显的敏感性;在干旱和平水年型下,饲草产量对抽穗—灌浆期的干旱更为敏感,WUE则对拔节—抽穗期及抽穗—灌浆期的干旱更为敏感;在丰水年型下,燕麦饲草产量对干旱最敏感的时期是播种—拔节期。有限的灌溉条件下,可将灌溉集中于WUE对降水变化最为敏感的阶段3（抽穗—灌浆）。