应用ELISA快速检测牛羊副结核病

在96孔微板中包被抗原，加入被检血清，经温育后，抗体特异性地与抗原相结合，形成抗原一抗体结合物。洗涤去除未结合的物质，与加入的酶结合物(HRPO)相结合。再洗去未结合的酶结合物，加入底物后显色．加入终止液终止反应。用装有630nm(或620nm、650nm)滤光片的酶标仪进行检测，通过计算S／P值，判定血清中副结核抗体阴、阳性。此方法具有快速、灵敏、准确的特点。     

应用抗原捕捉ELISA快速检测牛病毒性腹泻病毒

在96孔微量板中包被BVDV(Erns)单克隆抗体,加入被检血清,血清中的病毒特异性地与抗体结合,形成抗原抗体复合物.洗涤去除未结合的物质,加入酶标抗体连接物.再洗去未结合的酶连接物,加入底物后显色,加入终止液终止反应.用装有450 nm滤光片的酶标仪进行检测,通过计算S-N值,判定血清中BVDV抗原阴性、阳性.此法具有特异、快速、灵敏的特点.     

酶联免疫吸附测定法在饲料毒素检测中的应用

1　酶联免疫吸附测定法 (ＥＬＩＳＡ)的基本原理及特点ＥＬＩＳＡ法是把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种检测技术。该技术的主要依据有 3点 :1 )抗体吸附在固相载体表面后 ,仍具有和抗原产生免疫反应的特性 ;2 )抗原和酶结合所形成的结合物 (酶标抗原 ) ,仍具有免疫反应特性和酶的催化特性 ;3)酶标抗原和抗体结合后 ,结合物中的酶 ,能催化底物生成有色物质 ,且颜色的深浅 ,可作为判定抗原含量的依据。ＥＬＩＳＡ测定法主要分 3类 :间接法、夹心法和竞争法。饲料中毒素大多数是小分子半抗原物质 ,因此主要采用…     

斑点金免疫渗滤测定法检测耕牛血吸虫病

免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，没有潜在致癌物质的酶显色底物。斑点金免疫渗滤测定法是将斑点酶标与免疫胶体金结合起来的一种新型的免疫标记技术。将被检抗体（血清或血纸浸出液）直接点样在硝酸纤维素膜上，滴加胶体金标记的血吸虫抗原，特异性抗原与抗体很快结合，在反应处发生金颗粒聚集，1min左右形成肉眼可见的红色斑点。     

应用阻断酶联免疫吸附试验检测牛白血病病毒抗体

多年来,都用琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验检测牛白血病病毒(BLV)抗体。而此疫病的普查和根除需要检测大量的样品,酶联免疫吸附试验就可满足这一要求,间接法是先将提纯的抗原包被到固相载体,再加试验血清和特异性IgG结合物,阻断法是利用试验血清中的抗体干扰或阻断标准抗原-抗体     

用酶联免疫吸附试验间接法检测猪瘟抗体

酶联免疫吸附试验间接法检测猪瘟抗体系用纯化抗原包被聚苯乙烯微量反应板,洗涤三次;加入待检血清,孵育后洗涤三次;再加入按工作效价稀释的HRP—SPA(辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌蛋白A),孵育后洗涤三次;用OPD(邻苯二胺)配制酶的底物溶液。如血清中有猪瘟抗体存在,     

斑点金免疫渗滤测定法检测耕牛血吸虫病的效果观察

免疫胶体金技术是以胶体作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术，没有潜在致癌物质的酶显色底物。斑点金免疫渗滤测定法是将斑点酶标与免疫胶体金结合起来的一种新型免疫标记技术。该测定方法是将被检抗体（血清或血纸浸出液）直接点样在硝酸纤维素膜上，滴加胶体金标记的血吸虫抗原，特异性抗原与抗体很快结合，在反应处发生金颗粒聚集，1min左右形成肉眼可见的红色斑点，判定检测效果。     

鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件：包被抗原的浓度为8 μg/mL,标准阴、阳性血清的稀释度为1:400,封闭液选用10 %马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1:15000,最佳抗原稀释液为0.01 M PBS(PH 7.2);抗原最佳包被条件为4 ℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37 ℃ 60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD450nm≥0.288判为阳性,反之判为阴性。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为93.5 %。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。     

用3AB-ELISA鉴别猪口蹄疫病毒感染与疫苗免疫猪的研究

采用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB(FMDV-3AB)多肽为抗原，A／G蛋白-辣根过氧化物酶为酶结合物，过氧化氢-四甲基联苯胺为底物溶液，建立了一种可鉴别FMD感染与灭活疫苗免疫猪血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)，即3AB-ELISA。通过对1779份健康猪、免疫猪及人工感染猪血清的检测，确定了该I-ELISA的阳性/阴性判定临界值。该检测方法比VIAA-AGID法检出率高，尤其是采用A／G蛋白酶结合物后操作更简便。     

酶联免疫吸附试验对绿脓杆菌抗体的检测和对马血清中抗体滴度的测定

用酶联免疫吸附试验(ELISA)对抗绿脓杆菌血清学的一种共同抗原(原始内毒素蛋白质)。蛋白酶和弹性蛋白酶的免疫球蛋IgM和IgG抗体的检测。对马血清中绿脓杆菌抗体滴度的测定。利用辣根过氧化物酶标记兔抗马IgM和IgG抗体作为酶标记抗体结合物。利用5氨基水杨酸(5—Aminosalicylic(?)acid)和H_2O_2作为底物。以免疫马、新生驹和72匹健康赛马的血清作为ELISA和被动血球凝集研究的抗绿脓杆菌抗体。通过ELISA,免疫马IgG抗体滴度的变化是清楚的。在新生驹中,出生后第一天,IgM和IgG抗体的数量主要是来自初乳,同时指出,新生驹的抗体水平开始低然后增加。抗绿脓杆菌原始内毒素蛋白质,蛋白酶和弹性蛋白酶的抗体,几乎存在于所有被研究的健康赛马中。     

基于非洲猪瘟病毒截短p72蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立

【目的】建立非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）ELISA抗体检测方法。【方法】以重组截短p72（p72s）蛋白作为检测抗原,通过方阵滴定法,确立ELISA的抗原、待检血清和酶标抗体的最佳工作浓度,优化抗原包被、酶标板封闭、血清/酶标抗体反应及底物显色等工作条件;应用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线阈值评价标准,确定方法的阴阳性临界值;检测方法的特异性、敏感性、批内与批间重复性;最后分别用建立的ELISA方法和商品试剂盒检测124份血清,比较两者的阳性检出率,并通过Western blotting验证ELISA的检测结果。【结果】ELISA方法的抗原最佳包被浓度为0.5 μg/mL,待检血清与酶标抗体的最适稀释度分别为1∶100和1∶5 000;反应条件为：抗原于37 ℃孵育1 h后经4 ℃包被酶标板过夜、于37 ℃封闭1 h或室温封闭2 h、待检血清和酶标抗体分别于37 ℃反应60和45 min及加入底物后于室温避光显色20 min;阴阳性血清的判定标准为：当待检血清的D_{450 nm}值≥0.365时,判定为阳性;当D_{450 nm}值＜0.365时,判定为阴性。该方法只与ASFV阳性血清发生特异性结合,与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒抗血清均无交叉反应;能检测到ASFV抗血清中的总蛋白量为0.091~0.153 mg/mL,低于商品试剂盒的最低检测量（0.110~0.554 mg/mL）;批内和批间重复性试验的平均变异系数分别为4.70%与5.125%。对临床血清样本检测时,建立方法和商品试剂盒的阳性检出率分别为75.81%（94/124）和32.26%（40/124）。进一步验证表明,Western blotting与ELISA的检测结果完全一致。【结论】建立了基于ASFV-p72s蛋白的ELISA抗体检测方法,该方法特异、敏感和重复性稳定,能够用于ASF临床诊断与流行病学调查,具有极大的开发应用潜力。     

液相阻断酶联免疫吸附法检测O型口蹄疫免疫抗体

1 原理 滴定好的固定量病毒抗原与被检血清首先在液相中反应,然后将抗原抗体复合物转移到包被好了的含口蹄疫（FMD）型特异性抗体的酶联免疫吸附（ELISA）板中,没有完全被血清抗体阻断的病毒抗原被ELISA板中的抗体捕获,亦与随后加入的豚鼠抗血清中的抗体结合。     

酶免疫技术(EIA)和检测单克隆抗体(续)

七、酶与蛋白质结合选用酶和蛋白质结合首先要注意标记的分子情况,酶一抗原或酶一抗体结合物往往利用戊二醛法或过碘酸钠法进行制备。酶一半抗原结合物大多数     

抗绿脓杆菌外毒素A酶标抗体的制备及其应用

从病死羊体内分离到绿脓杆菌并提取出外毒素A(PEA),再以此毒素作为抗原加油佐剂制成乳化抗原免疫家兔,获得高免血清并提取免疫球蛋白G(IgG);用过碘酸钠法将过氧化物酶标记抗PEA抗体(IgG),制成酶标抗体,经检验,酶标抗体结合物中的HRP浓度和Ab(IgG)浓度分别是0.0608 mg/mL和0.336 mg/mL;HRP/Ab(IgG)克分子比值为1.724%;酶(HRP)结合率是11.15%.利用该酶标抗体以ELISA夹心法对羊体内抗PEA抗体含量进行了检测,结果证明,用酶标抗体ELISA法比用平板凝集实验法检测的抗体效价平均高出二个滴度,表明制备的PEA酶标抗体具有灵敏度高、特异性强的优点.     

牛支原体间接ELISA检测方法的建立

以牛支原体(Mycoplasma bovis)全菌蛋白经超声波裂解后的裂解物作为包被用抗原,建立检测牛支原体血清抗体的间接ELISA方法。通过棋盘滴定法确定抗原最适包被浓度、待检血清最佳稀释度,同时对抗原的包被方式、封闭剂和封闭时间、酶标二抗最佳工作浓度、一抗和二抗最佳作用时间、血清稀释液、底物显色时间进行优化。用该方法测定10份阴性血清的OD450值计算出阴性临界值,并对牛布氏杆菌病、牛病毒性腹泻黏膜病抗血清进行检测。结果:抗原最适包被浓度为200μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶100,阴性临界值为0.327。用该方法检测牛布氏杆菌病、牛病毒性腹泻黏膜病抗血清均无交叉反应,表明该间接ELISA具有很好的特异性。     

SPA与鸭IgG的结合性研究

金黄色葡萄球菌细胞壁中的A蛋白(staphylo-coccal protein A,SPA)能与多种动物的γ-球蛋白发生非特异性结合反应,而且IgG的Fc片段与SPA结合后并不影响Fab片段的免疫活性,因此在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,常用SPA与辣根过氧化酶(HRP)交联而成SPA-HRP结合物,用于抗原、抗体的定量测定及组织切片中抗原或抗体的定位、免疫复合物的检测等[1].     

间接ELISA检测鸡病毒性关节炎抗体方法的建立及其应用

用蔗糖密度梯度离心法提纯鸡病毒性关节炎病毒(AVAV)作包被抗原,建立了间接ELISA的最佳工作程序,其中抗原包被浓度为0.61μg/孔,被检血清为1:50.酶结合物1:1600;其灵敏度为琼脂凝胶沉淀试验(AGP)的238.5倍.在受检的529份鸡血清中,该法检出率(85.1%)显著高于AGP(46.0%).间接ELISA对S1133疫苗及AVAV—J株接种鸡抗体消长情况的观察结果表明,S1133疫苗常量接种后所产生的免疫力足以抵抗强毒株AVAV—J的攻击,AVAV—J毒株的良好免疫原性.使其有可能成为研制国产疫苗的候选毒株.     

鸡传染性法氏囊病病毒抗体快速检测方法的研究

采用Vero细胞繁殖鸡法氏囊病毒（Infections Bursal Disease Virus,IBDV)，并用PEG方法提纯病毒制备抗原。应用抗鸡血清IgG重链单克隆抗体酶标结合物作为第二抗体，用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测鸡血清中的法氏囊病毒抗体，较好地克服了非特异反应问题，该方法简便、快速和特异性好，有较大的推广应用价值。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

建立了辣根过氧化物酶标记兔抗鸡ＩｇＧ检测鸡传染性支气管炎抗体的间接ＥＩＳＡ法，其抗原包被浓度为４ｍｇ／Ｌ，待检血清与酶结合物的最佳稀释度各为１：８０，酶结合物，抗原抗体的作用时间分别为６０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，封闭液的浓度和作用时间分别为１％和６０ｍｉｎ，ＯＤ值大于０．２８７的判为阳性。用此法检测经ＩＢＶ灭活苗免疫鸡所产蛋孵出的雏鸡的母原抗体，ＯＤ值的Ｐ／Ｎ值为６．０，１５ｄ后降至２．０以下。检测１     

来自饲料厂和养殖场生产第一线的若干问答(十二)

<正>1酶联免疫吸附法和免疫亲和柱-荧光法对测试结果差异有多大?怎么确定两者测定结果是可靠的(重庆市蜀达饲料有限公司,唐明)?答:酶联免疫吸附法是一种固相免瘦测定技术,先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。测定时,将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相我体表面吸附的抗体或抗原发生反应,后加入酶标抗体与免疫复合物结合,