生长激素受体基因在美国短毛黑水貂组织中表达量变化研究

为了探讨水貂生长激素受体(GHR)基因在不同组织中的表达变化,以美国短毛黑水貂为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测了GHR基因在不同生长发育阶段(45、90、120、150、180日龄)心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤等组织的表达水平,并进行了比较分析。结果表明:GHR基因在同一组织不同日龄表达具有较大差异,例如,在心脏、肝脏和脾脏组织,180日龄表达量极显著高于其他日龄(P0.01),而肠组织,其在45、120日龄均极显著高于其他日龄(P0.01);此外GHR表达量在同一日龄不同组织同样存在较大差异,例如,90日龄时皮肤组织极显著高于其他组织(P0.01),180日龄时脾脏极显著高于其他组织(P0.01)。说明水貂GHR基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

江口萝卜猪STAT3基因表达规律研究

为了更好地保护和开发利用江口萝卜猪,试验以0(出生时),2,4,10月龄江口萝卜猪为研究对象,利用实时荧光定量PCR(qPCR)测定江口萝卜猪不同生长阶段心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、十二指肠、背最长肌、腰大肌等9个器官组织中信号转导及转录激活因子3(STAT3)基因相对表达量,以此探究STAT3基因在不同年龄江口萝卜猪不同器官组织中的表达规律。结果表明:STAT3基因在脾脏、十二指肠和肺脏中表达量较高,为脾脏十二指肠肺脏,并且各月龄时STAT3基因在这3个组织中的表达量均显著高于其他组织(P0.05),其余组织间除腰大肌在0月龄和2月龄时表达量显著低于其他组织之外均差异不大(P0.05);同种组织不同月龄之间相比,肾脏、肝脏、胃、心脏中STAT3基因的表达量几乎不随月龄的增长而改变,在背最长肌、肺脏、十二指肠、脾脏以及腰大肌中,STAT3基因的表达量随着月龄的增长呈现上升趋势,其中在背最长肌、十二指肠和腰大肌中呈现大幅上升趋势,各月龄之间存在显著差异(P0.05)。STAT3基因在江口萝卜猪不同月龄、不同组织器官中呈现规律性表达,说明STAT3基因在江口萝卜猪的生长发育和能量代谢中发挥着重要作用。     

从江香猪和大白猪不同组织/器官中GHR、JAK2、STAT3基因的表达分析

为了分析从江香猪和大白猪不同组织中GHR、JAK2、STAT3基因的表达差异,试验取6月龄、体况相近且饲养环境相同的贵州从江香猪和大白猪各4头,分别提取心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脂肪、大肠、小肠和背最长肌组织的总RNA,以猪GAPDH基因为内参,设计GHR、JAK2、STAT3基因的荧光定量引物,以荧光定量PCR法检测GHR、JAK2、STAT3基因在两个品种不同组织中的表达量。结果表明:GHR、JAK2、STAT3基因在两个品种不同组织/器官中均有表达,其中GHR基因在肝脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著(P0. 01),在脂肪中相对表达量最低; JAK2基因在肝脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著(P0. 01),在背最长肌中相对表达量最低; STAT3基因在肾脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著(P0. 01),在背最长肌中相对表达量最低。说明GHR、JAK2、STAT3基因在动物生长发育过程中发挥重要作用,在不同组织器官中的表达存在差异。     

五指山猪8种组织IGF2和IGFBP3基因表达的发育性变化研究

采用Q-PCR 技术检测了胰岛素样生长因子2(IGF2)和胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)基因在30、60、90、120 和150 日龄五指山猪心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、肌肉、胃脏和小肠等8种组织中的mRNA表达水平.结果表明:(1)IGF2基因在8种组织中的表达呈相似的变化规律:各组织mRNA表达量随着日龄的增加而降低,30日龄时表达量最高,150龄时表达量最低,差异显著(P<0.01);(2)IGFBP3基因在心脏、肺、脾脏、肾脏、肠、胃等组织中的mRNA表达规律相似:即从30～150日龄,依次递减;而肝脏和肌肉mRNA表达从30日龄开始上升,肝脏在90日龄达最高,肌肉在60日龄时达最高,随后二者开始下降,在150日龄时达最低水平.以上结果初步揭示了五指山猪IGF2和IGFBP3基因表达的发育性变化模式,为深入研究五指山猪生长发育及矮小性状形成机理提供了基础数据.     

MYNN基因在猪不同组织及肌肉中的表达规律

试验旨在研究myoneurin（MYNN）基因在猪不同组织中的表达特征及其在肌肉（背最长肌、股二头肌和腰大肌）、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。采用实时荧光定量PCR技术研究猪MYNN mRNA在90日龄大白猪和马身猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小脑、小肠、胰脏、胃、股二头肌及脂肪共11个组织中的表达谱,以及在大白猪和马身猪1、90、180日龄3个发育阶段的肌肉、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。结果表明,MYNN在猪的各种组织中广泛表达,且各组织间表达差异显著或极显著（P < 0.05;P < 0.01）;MYNN在大白猪和马身猪的肌肉、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的不同发育阶段表达差异显著或极显著（P < 0.05;P < 0.01）,并具有特定规律,由此推测其可能在猪的这几种组织中发挥重要作用。MYNN基因的表达与组织、日龄及品种的遗传背景有关。本试验为研究猪MYNN基因的生物学功能提供了依据,但还需要深入的研究来探索其作用的具体机制,尤其是在骨骼肌发育中的调节机制。     

HSL与FAS基因在苏太猪不同组织器官中的表达研究

为了探究HSL及FAS基因在苏太猪不同组织器官中的相对表达水平,试验运用实时荧光定量PCR法检测HSL及FAS基因在苏太猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、皮下脂肪和背最长肌8个不同组织器官中的相对表达量。结果表明:HSL与FAS基因在苏太猪各组织器官中均有一定的表达。HSL基因在皮下脂肪中的表达水平最高,在背最长肌中的表达水平最低,表达水平顺序依次为皮下脂肪肺脏心脏脾脏肾脏肝脏胃背最长肌。FAS基因在皮下脂肪中的表达水平最高,在背最长肌的表达水平最低,表达水平顺序依次为皮下脂肪脾脏肺脏胃肝脏肾脏心脏背最长肌。     

山羊CD36基因表达差异及其与肌内脂肪沉积的关系研究

为了构建山羊CD36基因的组织表达谱及揭示基因表达与肌内脂肪(IMF)沉积的关系,试验采用荧光定量PCR(q PCR)技术检测CD36基因在山羊不同器官组织和三个发育阶段的不同肌肉组织表达情况,并将基因mRNA表达量与IMF含量进行相关分析。结果表明:CD36基因在山羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌等器官组织中均有表达,其中在脂肪组织中表达量最高,在脾脏中次之,而在心脏中表达量最低。CD36基因在1~3月龄、8~10月龄时表达变化趋势相同,在背最长肌、股二头肌和臂三头肌中呈逐渐上升趋势,而24月龄时则呈相反变化趋势。相关性分析表明,肌肉组织中CD36基因mRNA表达量与IMF含量呈正相关,且在臂三头肌中相关性达到显著水平(P0.05)。说明CD36基因可以作为山羊IMF沉积的候选基因。     

生长激素受体基因突变对西藏藏猪生长迟缓的影响

本研究旨在探索西藏藏猪生长迟缓成因和分子机理。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对西藏藏猪生长激素受体(GHR)基因克隆,采用生物信息学方法分析西藏藏猪生长激素受体基因与其他常见品种猪基因与蛋白序列差异,并构建GHR基因的真核过表达质粒,转染到西藏藏猪胚胎成纤维细胞(PEFs)上进行瞬时表达,通过MTT检测细胞增殖活性,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的情况。西藏藏猪GHR基因编码区1 716bp,编码572个氨基酸;与普通猪GHR基因序列进行比对分析表明,在西藏藏猪GHR基因编码区1 225bp处发生T→G突变,导致丝氨酸突变为丙氨酸;GHR基因真核过表达质粒成功转染PEFs后,PEFs生长活性显著提高;qPCR检测表明,细胞株中IGF-1表达显著上调。综上表明,GHR基因的表达可以提高PEFs细胞的增殖活性,诱导IGF-1基因的表达,GHR基因在1 225bp处的点突变可能影响西藏藏猪的生长迟缓。     

藏猪促红细胞生成素(EPOR)基因的表达与低氧适应分析

为了解促红细胞生成素受体(EPOR)对动物低氧适应的重要作用,试验选取饲养在西藏林芝(海拔约3 000 m)的高原藏猪、高原大约克猪和饲养在北京(海拔约100 m)的大约克猪(低地大约克猪),在6月龄进行屠宰,采集心脏、肝脏和肺脏器官组织,使用荧光定量PCR技术测定EPOR基因的表达量。结果表明:猪EPOR基因在肺脏器官组织中表达量比较高,在心脏和肝脏器官组织中表达量较低。高原藏猪EPOR基因的表达量在3个器官组织中均高于高原大约克猪和低地大约克猪,但在肺脏器官组织中高原藏猪与高原大约克猪相比差异不显著(P0.05)。大约克猪从低地移居到高原地区,器官组织中EPOR基因表达量均显著增加(P0.05)。EPOR基因是受低氧调控的基因,低地大约克猪移居到高原之后该基因表达量增加;高原藏猪EPOR基因表达量高于大约克猪,可能对其高原适应性具有重要作用。     

鹅多个组织GHR和IGF-Ⅰ基因表达的发育性变化

为研究鹅不同组织生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因发育性变化,本试验选择0日龄杂交鹅(吉林白鹅×农安籽鹅)78只作为试验动物,应用荧光定量技术分别对0、14、28、42、56日龄鹅心脏、肝脏、腺胃、腿肌GHR以及IGF-I mRNA进行测定。结果显示,0~56日龄期间杂交鹅GHR以及IGF-I mRNA在肝脏中表达量最高,其次为腿肌和腺胃,心脏GHR以及IGF-I mRNA表达量最低。鹅心脏、肝脏、腺胃和腿肌GHR mRNA表达量随日龄增加有极显著的发育性变化(P0.01)。鹅心脏、肝脏、腿肌GHR mRNA表达量均于14日龄达到峰值,鹅腺胃GHR mRNA表达量于28日龄达到峰值。鹅肝脏、腺胃和腿肌IGF-I mRNA表达随日龄增加有极显著的发育性变化(P0.01)。鹅心脏、腿肌IGF-I mRNA表达量于28日龄出现峰值,但肝脏、腺胃IGF-I mRNA表达量在0~56日龄不断升高。总体上看,公鹅与母鹅各组织GHR以及IGF-I mRNA表达量无显著差异(P0.05)。结果表明,日龄对于GHR和IGF-I基因在鹅各组织表达具有重要影响;性别对鹅组织GHR和IGF-I基因表达影响较小;鹅各组织GHR和IGF-I基因发育性变化具有组织特异性,各基因表达量在鹅不同组织出现峰值的时间并不一致。     

日粮营养水平对番鸭GH、GHR基因表达影响的研究

为了解番鸭在生长发育过程中不同日粮营养水平对番鸭生长激素(GH)、生长激素受体(GHR)基因在肌肉组织中的表达情况,试验在0~21、22~42和43~91日龄分别设计9个营养水平的日粮,分别饲喂番鸭,在21、42和91日龄分别对番鸭进行屠宰获得其胸肌和腿肌的组织样,采用实时荧光定量PCR检测不同样品之间GH、GHR基因mRNA表达的差异。结果表明,在21、42日龄时,GH、GHR基因在同组织中不同日粮营养水平之间均无显著性差异(P0.05)。在91日龄时,各组胸肌中GH基因表达无显著性差异(P0.05),各组腿肌中GH基因表达差异显著(P0.05),各组胸肌、腿肌中GHR基因表达均有显著性差异(P0.05)。在番鸭早期生长发育过程中,GH、GHR基因表达未因日粮营养水平的不同而出现差异,但是在91日龄时会受到日粮营养水平的影响。     

不同断奶日龄对仔猪脾脏生长相关基因表达的影响

为研究不同断奶日龄对仔猪脾脏中生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)、胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)和胰岛素样生长因子-1受体(insulin like growth factor-1 receptor,IGF-1R)基因表达的影响,试验选取体重相近、健康的杜×长×大仔猪24头,随机分为4组(14、21、28和35日龄断奶组),每个试验组6个重复,每个重复1头仔猪,至42日龄时全部宰杀取样,用RT-PCR方法检测脾脏中上述基因的相对表达水平.结果表明,14和21日龄断奶组仔猪脾脏GHR mRNA的相对表达量显著高于35日龄断奶组(P<0.05);不同断奶日龄组仔猪脾脏中的IGF-1 mRNA的相对表达量均无显著性变化(P>0.05);35日龄断奶组仔猪脾脏中IGF-1R mRNA的相对表达量显著高于28日龄断奶组(P<0.05).结果提示,不同断奶日龄对仔猪脾脏相关生长基因表达影响的模式不同;不同断奶日龄脾脏IGF-1R mRNA的表达可能受脾脏自身局部IGF-1的调控.     

从江香猪miR-146b-3p的组织表达、靶基因预测及其初步研究

本研究以从江香猪和大白猪为实验对象,用颈环qRT-PCR法分析miR-146b-3p在从江香猪和大白猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、大肠、小肠8种组织中的表达量,利用软件miRNA22.2和TargetScan预测从江香猪miR-146b-3p的靶基因及其结合位点,并用普通PCR技术对从江香猪miR-146b-3p前体序列进行克隆验证,构建其真核表达载体并转染至从江香猪肌细胞,同时采用qRT-PCR方法检测生长相关基因生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)与IGF-1的表达情况。结果显示:miR-146b-3p在从江香猪小肠组织中的相对表达量最高,显著高于其他组织,在背最长肌组织中表达量最低(P0.01);miR-146b-3p在大白猪肝脏和肺脏组织中表达量最高,心脏中最低(P0.01)。除心脏与大肠外,miR-146b-3p在从江香猪其余组织中的表达量均显著高于大白猪(P0.05)。分析发现miR-146b-3p与GHR 3'UTR存在靶位点;在从江香猪肌细胞中超表达miR-146b-3p后能极显著下调GHR的表达,而对IGF-1表达量的影响不显著。以上结果表明miR-146b-3p在动物生长发育过程中扮演着至关重要的角色,该结果为下一步研究miR-146b-3p调控相关基因参与动物生长发育的分子机制奠定了理论依据和实验基础。     

萨福克羊GH和IGF-1基因组织表达水平的分析

为分析生长激素(growth hormone,GH)基因和胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)基因对绵羊生长发育的作用,以6月龄萨福克公羊为试验材料,利用荧光定量PCR SYBR Green I荧光染料法,对绵羊肠系膜淋巴结、心脏、肝脏、垂体、大脑、肾脏、骨骼肌、皮肤、肺脏、睾丸和脾脏11个组织中GH和IGF-1基因的表达水平进行相对定量分析。结果表明,GH基因在睾丸、肠系膜淋巴结和脾脏中的表达量显著高于心脏、肝脏、大脑、肾脏和骨骼肌(P0.05);IGF-1基因在肝脏和肠系膜淋巴结中的表达量显著高于心脏、垂体、大脑、肾脏、骨骼肌、皮肤、肺脏、睾丸和脾脏(P0.05)。说明绵羊GH和IGF-1基因有特定的组织表达模式;GH基因与免疫、繁殖及机体的生长发育密切相关;IGF-1基因与生长发育及免疫密切相关,肝脏不仅是IGF-1的主要合成器官,也是该基因特异性表达的主要器官组织之一。GH和IGF-1基因均具有一因多效作用。     

猪锚蛋白重复序列和SOCS盒蛋白基因4与生长因子受体结合蛋白基因10的克隆及印迹状态分析

本试验采用单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)直接测序法检测猪锚蛋白重复序列和SOCS盒蛋白基因4(ankyrin repeat and SOCS box containing protein 4,Asb4)与生长因子受体结合蛋白基因10(growth factor receptor-bound protein 10,Grb10)在不同组织器官中的印迹状态。首先,克隆得到了1350 bp的Asb4基因cDNA序列及1811 bp的Grb10基因cDNA序列,然后进行了SNP直接测序法检测。结果发现,Asb4在1月龄仔猪所有检测组织器官中均为双等位基因表达,而Grb10在1月龄仔猪的舌、肾脏、胃、小肠和脑中为父源等位基因表达,在其他组织器官中为双等位基因表达。实时定量PCR结果表明,Grb10在10种组织器官中的表达量存在显著性差异(P<0.05),其中在肺脏组织中的表达量最高,在小肠和脑中表达量最低。上述结果表明,Grb10可能是猪父源表达的印迹基因,而Asb4则属于猪非印迹基因。     

BPI基因在梅山猪初生断奶以及成年阶段的组织表达谱分析

为探讨杀菌/通透性增强蛋白(BPI)基因在梅山猪从初生到成年各个时期不同组织中的表达规律,利用qPCR检测初生、断奶、性成熟、体成熟4个重要发育时期(即1、35、134、158日龄)梅山猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、肌肉、胸腺、淋巴结、十二指肠、空肠和回肠12个组织中BPI基因的表达水平。结果表明:4个不同发育阶段BPI基因的组织表达谱在心脏、肝脏、脾脏、肌肉和胸腺中均表现出相对一致的规律,即BPI基因的表达量一直处于极低水平,而在肠道组织中从初生到成年各时期均高度表达;BPI基因在胃中的表达程度随着日龄增长而显著提高;在小肠组织中,35日龄断奶仔猪BPI基因的表达水平极显著高于其他3个日龄。综上,推断肠道中BPI基因的高度表达是仔猪从初生就具有的抵抗大肠杆菌等病原感染属固有免疫的一部分,而在胃中的表达很可能是其后天为了抵御不断侵染的大肠杆菌等病原的结果。     

猪A-FABP基因的克隆及其组织差异性表达

为了进行猪A-FABP基因的克隆及不同器官组织中的差异表达,试验采用RT-PCR方法从长白猪背最长肌中克隆A-FABP基因的cDNA序列并进行测序比对,分别与人、牛、山羊、家鼠及鸡进行同源性比较,应用半定量RT-PCR方法检测猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌中A-FABP基因的表达。结果表明:成功克隆得到A-FABP基因的cDNA序列,且比对结果为100%,该序列与人、牛、羊的同源性分别为90.98%、89.97%、89.97%,与鸡的同源性为73.68%。半定量RT-PCR结果为A-FABP基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌器官组织中均有表达,其中背最长肌和腿肌中A-FABP基因的表达量最高,肺脏内的表达量最低,A-FABP基因在动物进化中具有高度保守性,该基因在猪不同器官组织中的表达具有差异性。     

寒冷环境下民猪冷诱导RNA结合蛋白基因的表达变化

为了研究民猪冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)基因组织表达及寒冷环境下表达变化情况,试验采用RT-PCR和Real-time PCR的方法检测CIRP基因在民猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪、背最长肌等器官组织中的表达情况以及寒冷环境下在肌肉中的表达变化情况。结果表明:常温下CIRP基因在所检测的7个器官组织中均有表达,呈组成型表达;寒冷环境下CIRP基因在民猪背最长肌中表达水平显著升高(P0.05)。     

MITF在白色北极狐不同组织器官中的差异表达

为了探索小眼畸形相关转录因子(MITF)基因与狐狸毛色形成间的关系,试验采用实时荧光定量PCR技术,对MITF基因在白色北极狐皮肤、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉7个组织器官中的表达量进行了测定。结果表明:MITF基因在皮肤中表达量最高,其表达水平分别是心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉的19.5倍、3.2倍、1.8倍、5.3倍、9.7倍和31.0倍,差异达极显著水平(P0.01)。推测MITF基因可能与白色北极狐的白色毛皮形成有密切联系。     

Myf5、Myf6基因在黔北麻羊与努黔F1代不同组织表达差异性的研究

实验旨在探究Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代各组织间的相对表达水平。应用实时荧光定量PCR法检测Myf5、Myf6基因在黔北麻羊(3只)和努黔F_1代(3只)的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌和臂三头肌等组织间的相对表达量。结果表明:各组织Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代间表达差异不显著;2种基因在黔北麻羊臂三头肌、股二头肌和背最长肌相对表达量均极显著高于肾脏、肝脏、心脏、脾脏、肺脏(P<0.01),其中Myf5基因在肾脏相对表达量显著高于脾脏和肺脏(P<0.05),Myf6基因在心脏和肝脏相对表达量均显著高于脾脏(P<0.05);2种基因在努黔F_1代臂三头肌、股二头肌和背最长肌相对表达量均极显著高于肝脏、肾脏、心脏、脾脏、肺脏(P<0.01),心脏和肝脏相对表达量均显著高于肺脏(P<0.05)。综上,Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F_1代8种组织中均有表达且表达量不等,在肌肉组织中的表达量最高。