新疆石河子地区某牧场致奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

本试验在新疆石河子地区某牧场奶牛乳房炎调查的基础上选择24头乳房炎奶牛的36个患乳区乳样进行大肠杆菌的分离与鉴定,共分离出20株菌株。通过形态学特征观察、生化特性鉴定、16S rRNA鉴定,最终确定20株分离菌均为大肠杆菌,并做耐药性分析,为后期奶牛乳房炎治疗做好准备。     

石河子地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的主要致病菌之一,为调查引起新疆石河子地区规模化奶牛场奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的感染情况及其对常用药物的敏感性,于石河子地区部分奶牛场采集85份临床型或隐性乳房炎奶牛的奶样进行金黄色葡萄球菌的分离、鉴定及耐药性试验。结果表明:从85份奶样中分离到9种共计127株细菌,经选择性培养基培养、生化试验和16S rRNA PCR鉴定,其中60株为金黄色葡萄球菌,占47.24%;还有腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌属、假单胞杆菌属、肠球菌属等。药敏试验结果表明:所有菌株对杆菌肽、青霉素、头孢氨苄和强力霉素高度耐药,耐药率分别为100%、71.67%、66.67%和76.67%;对氯霉素、氟苯尼考和阿米卡星的敏感率分别达80.00%、83.33%和66.67%;除此之外也有一些菌株对新霉素表现为既不明显耐药也不敏感现象。     

奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯杆菌的分离鉴定和耐药性分析

为研究河北省奶牛乳房炎性肺炎克雷伯菌的流行和耐药特性,本试验从河北省某大型奶牛养殖场无菌采集患乳房炎奶牛的乳样245份,进行细菌分离鉴定和耐药性分析。通过细菌形态学观察、生化试验和16S rRNA扩增试验鉴定奶牛乳房炎性肺炎克雷伯杆菌,并利用药敏试验检测分离株的耐药性。结果显示:分离获得45株奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯杆菌,占18.4%。革兰染色镜检可见红色的短棒状细菌;生化试验结果表明,分离株可分解葡萄糖、赖氨酸、鸟氨酸、卫茅醇和尿素;PCR扩增结果表明,分离株的DNA大小约为1 500 bp。与此同时,药敏试验结果表明,肺炎克雷伯杆菌对青霉素、四环素、庆大霉素和克林霉素的耐药率分别为73.3%、53.3%、48.9%和46.6%,对头孢氨苄、卡那霉素和头孢喹肟的敏感率分别为60%、46.7%和44.4%。本试验对防控肺炎克雷伯杆菌引起的奶牛乳房炎提供科学的理论依据。     

一株鸡源性肠球菌的鉴定及耐药机制分析

本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16S rDNA通用引物扩增其16S rDNA并测序鉴定;根据该菌的药物敏感性试验结果设计了12对引物扩增其基因组上耐药基因。细菌培养特性和生化试验结果显示该菌为一株肠球菌,PCR扩增出大小为1465 bp的目的片段,药敏试验显示该株细菌耐受多种抗生素,PCR扩增其耐药基因发现存在ant(6)-iv、OXA-10、tetM、CTX-M-1、TEM基因。最终鉴定该株细菌为一株肠球菌,耐药基因的存在是其产生耐药性的原因之一。     

细菌通用引物在奶牛乳房炎病原菌检测中的作用研究

为了建立PCR直接检测奶牛乳房炎致病菌的方法,探索通用引物在奶牛乳房炎致病菌检测中的应用价值。利用16S rRNA基因的高度保守性,设计并合成细菌的通用引物,采用合成的引物扩增标准菌株及患有奶牛乳房炎的奶样。结果表明,通用引物扩增7 种标准菌株,370 bp处均可得到清晰的电泳条带;通用引物PCR 可检出250 ng/L的金黄色葡萄球菌标准菌株DNA;对患有奶牛乳房炎的奶样进行扩增,370 bp处也得到了清晰的电泳条带。建立在16S rRNA基础上的通用引物在奶牛乳房炎的检测中,初步显示具有特异、快速等优点,为进一步判断细菌的种类奠定了基础。     

奶牛乳房炎相关链球菌PCR检测方法的建立

利用编码3-磷酸甘油醛脱氢酶的gapC基因具有高度特异性的特点,建立PCR方法鉴定与奶牛乳房炎相关的链球菌。根据已有gapC基因序列设计1对引物,以分离自患乳房炎奶牛乳样的10株革兰阳性球菌、10株革兰阳性杆菌、10株革兰阴性杆菌作为待检菌株,进行PCR扩增。结果表明,在10株革兰阳性球菌中,有8株球菌可以扩增出约1011bp的目的条带,而其他2株革兰阳性球菌及20株杆菌均无相应PCR产物出现。通过传统的生化鉴定与16S rDNA序列分析相结合证实,能扩出gapC基因的8株革兰阳性球菌分别为乳房链球菌(Streptococcus uberis)、牛链球菌(S.bovis)与猪链球菌(S.suis)。说明基于gapC基因的PCR方法,用于鉴定奶牛乳房炎相关链球菌具有较强的特异性。     

奶牛隐性乳房炎肠球菌的分离、鉴定及药敏试验

为了对奶牛隐性乳房炎的肠球菌进行分离、鉴定及其耐药情况分析,试验采用细菌富集、分离纯化、生化鉴定、PCR测定的方法对采集的8个奶牛场26份奶样进行肠球菌的检测,并对分离菌进行药敏试验。结果表明:肠球菌在哥伦比亚血琼脂培养基上形成圆形隆起、光滑湿润、乳白色、透明水滴样的半圆形菌落,革兰氏染色为阳性,呈椭圆形双球、短链状或长链状连续排列;待检细菌的生化试验结果符合肠球菌的生化特性; PCR扩增的目的条带大小为1 681 bp,扩增序列在NCBI上通过BLAST进行同源性比对分析,确定为肠球菌;分离的肠球菌对万古霉素、诺氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、呋喃妥因高度敏感,对红霉素中度敏感,对克林霉素、克拉霉素、米诺环素、复方新诺明低度敏感,对大观霉素、四环素、青霉素G、苯唑西林、多黏菌素B耐药。说明通过哥伦比亚血琼脂培养基和PCR技术可以分离与鉴定乳房炎奶样中的肠球菌,可交替使用上述敏感抗生素对由肠球菌引起的奶牛乳房炎进行防治。     

犬粪肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了鉴定从拉萨市病犬的粪便中分离出的一株细菌的种属及耐药性,试验采用了革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA PCR扩增和序列比对及药敏试验的方法对该菌株进行了研究。结果表明:该分离菌株为革兰氏阳性菌,经16S rRNA PCR鉴定为粪肠球菌,仅对多黏菌素B和利奈唑胺表现高度敏感,对其他28种抗生素均表现耐药。说明从犬中分离出的粪肠球菌对多种抗生素都具有极高的耐药性。     

奶牛隐性乳房炎无乳链球菌16SrRNA的序列分析

为了从分子生物学水平鉴定引起奶牛隐性乳房炎的无乳链球菌,试验从新鲜奶样中分离病原菌,并对经生理生化初步鉴定的无乳链球菌提取DNA,PCR扩增无乳链球菌16S rRNA序列。结果表明:引起奶牛隐性乳房炎的无乳链球菌16S rRNA为1 541 bp,与Gen Bank登录的无乳链球菌16S rRNA同源性达99.25%,从而证实该目的菌为无乳链球菌。     

一株致仔猪关节炎粪肠球菌的鉴定

对1株分离自关节炎病仔猪的肠球菌进行鉴定。选用常规方法进行染色特性、培养特性观察以及药物敏感性和致病试验,然后利用Vitek-32全自动细菌鉴定系统进行生化特性鉴定,并用PCR方法扩增分离株的16 S rRNA基因,克隆并测序,与GenBank上登录的相关菌株及3个粪肠球菌标准菌株进行16 SrRNA序列比较、同源性分析并构建系统发育树。结果显示,该分离株形态及染色特性与肠球菌一致,对仔猪具有一定的致病性,并对临床常用的7种药物产生了耐受性;Vitek-32生化鉴定和16 S rRNA基因同源性分析及比对结果均显示其为粪肠球菌(E.faecalis)。试验证实了粪肠球菌可导致仔猪关节炎。     

羊源屎肠球菌的分离鉴定与生物学特性研究

某养殖场羔羊突然死亡,为了查明死亡原因,采集病死羔羊病变肺脏等进行细菌的分离培养,分离到1株革兰阳性、短链状排列的球菌,在血琼脂培养基上呈β溶血。通过对该菌的16S r RNA进行扩增和序列分析,其与屎肠球菌的同源性高达99%,应用通用引物对16S～23S rRNA的序列进行PCR扩增产生2个条带,分别为522 bp和619 bp。用Vitek 2全自动微生物分析仪鉴定为屎肠球菌,可能性为98%。该菌对万古霉素和米诺环素敏感,对青霉素、庆大霉素等药物表现耐药。结果显示,分离到的细菌为屎肠球菌,且该菌具有多重耐药性,本实验为兽医临床肠球菌的分离和鉴定提供了参考。     

河南省42株奶牛临床型乳房炎病原菌的分子鉴定及药敏试验

为了解近年来河南省奶牛临床型乳房炎的主要病原菌种类及药物敏感性,从郑州、焦作等地奶牛场采集乳房炎奶样47份,采用微生物学方法、16S rRNA基因PCR扩增、序列分析比较等方法对分离菌株进行鉴定,并用K-B纸片法对分离菌株中的26株致病菌进行药物敏感性试验。结果显示,47份奶样中共分离出17种42株细菌,环境性病原菌32株,主要包括大肠杆菌、克雷伯氏菌、芽孢杆菌、葡萄球菌等,检出率17.6%~20.6%。郑州2家奶牛场分离出的23株致病菌对16种药物均有不同程度的耐药,耐药率4.35%~56.52%。焦作1家奶牛场分离出的3株病原菌只对复方新诺明、氨苄西林、四环素、氯霉素耐药。部分菌株多重耐药严重,同时对3~11种药物耐药。结果说明分离的奶牛临床型乳房炎的病原菌种类很多,并且已经产生了严重的耐药性。     

甘肃省乳房炎奶牛乳源肠球菌的分离、药敏试验及毒力基因原核表达载体的构建

为分离临床型奶牛乳房炎中的肠球菌,检测其耐药性和携带毒力基因的情况,本试验采集了甘肃省东、中和西部3个地区41头临床型乳房炎奶牛的奶样93份,并构建了肠球菌毒力基因的原核表达载体。试验使用选择性培养基分离纯化肠球菌,16S rRNA和生化试验结合的方法鉴定所分离菌株的种;选取16种抗菌药进行药敏试验;常规PCR方法检测11种毒力基因的携带情况,最后对具有免疫原性的毒力基因进行原核表达载体的构建。鉴定结果显示,93份乳样中18株为肠球菌,并分为9种。药敏结果显示,分离株多数为多重耐药菌（multiple resistant bacteria,MDR）,占88.89%,未发现耐万古霉素菌株（vancomycin-resistant enterococcus,VRE）,万古霉素敏感率94.12%,所有分离株至少对一种抗菌药耐药。PCR检测结果表明,11种毒力基因均有检出,cob基因检出率最高（44.44%）,efaA、hyl、ccf和esp基因检出率分别为33.33%、27.78%、27.78%和22.22%,Asa1、cylA、EF3314和gelE基因检出率均为16.67%,Ace和cylM基因检出最低（11.11%）;毒力基因组合因菌种不同而存在差异,选择具有免疫原性的Ace和gelE基因成功构建出原核表达载体pET32a-Ace和pET32a-gelE。本试验为后续绘制3个地区奶牛乳房炎流行病学区域谱以及制备相应抗体和亚单位疫苗提供了基础数据及生物材料。     

牦牛源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500 bp特异性条带。16S rRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。     

石河子地区奶牛乳房炎大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解引起新疆石河子地区规模化牛场奶牛乳房炎大肠埃希菌的流行情况及其耐药性,对石河子地区部分奶牛场采集85份临床型或隐性乳房炎奶样进行大肠埃希菌的分离、鉴定及耐药性试验。结果表明,从85份奶样中分离到127株细菌,其中大肠埃希菌27株,占21.26%。耐药性试验结果显示,27株大肠埃希菌全部对杆菌肽耐药,66%以上对青霉素、复方新诺明、红霉素耐药,80%以上对丁胺卡那霉素、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢曲松、头孢哌酮5种药物敏感。调查结果为本地区奶牛乳房炎的防控提供了参考依据。     

新疆石河子地区奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析简

本试验旨在调查新疆石河子地区奶牛乳房炎源大肠杆菌的某些生物学特性及其耐药状况,以提高药物疗效,减少牛奶中药物的残留。试验从新疆石河子地区患乳房炎奶牛的乳样中分离纯化并鉴定出21株大肠杆菌,并对大肠杆菌分离株进行抗菌药物敏感性分析。结果表明,21株大肠杆菌对21种抗菌药物中的6种药物耐药率超过50%,其中最多的耐药15种,最少的耐药5种,耐药6及6种以上的菌株共占到76.19%。提示,该地区奶牛乳房炎源大肠杆菌对多种药物已产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况。     

奶牛乳房炎3种主要病原多重PCR检测方法的建立

根据GenBank收录的序列,针对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌在16S rRNA与23S rRNA之间的序列设计2对引物,扩增的片段长度分别为420 bp和270 bp;酵母样真菌参照念珠菌和隐球菌的18S rRNA发表的序列设计引物,扩增的片段长度为730 bp左右。建立了用于检测奶牛乳房炎的多重PCR检测方法,并对PCR扩增的特异性和敏感性进行了优化。运用建立的多重PCR方法对从无锡市采集的34份样品进行病原菌检测,结果表明,本试验建立的多重PCR检测方法具有高效、快速和灵敏的特点,为进一步防控乳房炎奠定了基础。     

一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验从甘肃肃南县某羊场死亡羊中分离出疑似某球菌菌株XCP,为进一步确定该致病菌株及其耐药性情况,进行了病原菌分离、革兰氏染色、生化试验、16S rRNA PCR扩增鉴定、小鼠致病力试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因扩增试验研究。结果发现,该菌革兰氏染色阳性,高盐、蜜二糖、蔗糖等生化反应阳性,VP、马尿酸盐、阿拉伯糖等生化反应阴性;16S rRNA基因PCR扩增后,进行BLAST比对,结果与GenBank中的屎肠球菌16S rRNA基因序列同源性为100%;小鼠致病力试验发现,该菌株具有很强的致病性;该菌株对β-内酰胺类抗生素苯唑西林、青霉素G,喹诺酮类抗生素诺氟沙星、环丙沙星、左氟沙星,以及四环素等高度耐药,对红霉素、万古霉素、克林霉素等抗生素敏感;毒力基因Asal、cylA、acm和耐药基因TetM、ant（6）-Ⅰ、aac（6'）-aph（2"）、ermB扩增均为阳性。结果表明,该菌为屎肠球菌（Enterococcus faecium）,具有较强的致病性和耐药性,可能与毒力基因和耐药基因的高阳性率有关。     

一株黑叶猴源鸟肠球菌的分离鉴定及耐药分析

黑叶猴是我国一级重点保护动物,2018年11月贵州某动物园中黑叶猴出现死亡,为调查其原因,本研究采集病死黑叶猴的肺脏样品进行细菌分离纯化,并对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因序列鉴定、小鼠致病性试验及分离株的药敏试验和耐药基因检测。结果显示:经形态观察、培养特性鉴定以及16S r RNA的PCR鉴定,该分离株为鸟肠球菌,将其命名为GZ1811;16S rRNA基因的同源性分析及进化树结果显示,GZ1811株与GenBank中鸟肠球菌的一致性为100%;小鼠致病性试验结果显示,小鼠出现临床症状,甚至死亡,解剖可见其肺脏有散在出血点;药敏试验结果显示,分离株对四环素等药物耐药。耐药基因PCR检测结果显示分离菌株的四环素类耐药基因tetM呈阳性,表明耐药表型和耐药基因型一致。本实验为黑叶猴鸟肠球菌病的诊断和防治提供具有科学价值的参考依据。     

新疆石河子地区某规模奶牛场奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定及药敏试验

对准备进行抗生素治疗的24头患乳房炎奶牛的36个乳区样品进行链球菌的分离与鉴定,共分离出12株链球菌。通过形态学特征观察、生化特性鉴定、16S r RNA鉴定,最终确定12株分离菌均为链球菌,并对其做耐药性分析,为后期奶牛乳房炎治疗提供指导。