猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR快速鉴定方法的建立

粪肠球菌和屎肠球菌是引起猪感染发病的优势肠球菌种,以肠球菌的16 S rRNA基因设计属特异性引物,利用SodA基因多态性设计种特异性引物,同时优化反应条件,建立了能同时测定猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR方法。通过对来源于猪的临床菌株、粪便菌株和鲜猪肉菌株进行测定,均能成功扩增出属特异性片段和种特异性片段。经过与快速生化鉴定试剂盒(Vitek-32)和16 S rRNA测序方法比较,多重PCR与16 S rRNA测序方法对猪的临床菌株、粪便菌株和鲜猪肉菌株的鉴定符合率100%;与Vitek-32鉴定符合率为62.3%,其中,与分离于感染猪的临床菌株符合率仅有46.7%,特别是感染猪的屎肠球菌,符合率仅为22.3%。     

牦牛源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500 bp特异性条带。16S rRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。     

一株黑叶猴源鸟肠球菌的分离鉴定及耐药分析

黑叶猴是我国一级重点保护动物,2018年11月贵州某动物园中黑叶猴出现死亡,为调查其原因,本研究采集病死黑叶猴的肺脏样品进行细菌分离纯化,并对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因序列鉴定、小鼠致病性试验及分离株的药敏试验和耐药基因检测。结果显示:经形态观察、培养特性鉴定以及16S r RNA的PCR鉴定,该分离株为鸟肠球菌,将其命名为GZ1811;16S rRNA基因的同源性分析及进化树结果显示,GZ1811株与GenBank中鸟肠球菌的一致性为100%;小鼠致病性试验结果显示,小鼠出现临床症状,甚至死亡,解剖可见其肺脏有散在出血点;药敏试验结果显示,分离株对四环素等药物耐药。耐药基因PCR检测结果显示分离菌株的四环素类耐药基因tetM呈阳性,表明耐药表型和耐药基因型一致。本实验为黑叶猴鸟肠球菌病的诊断和防治提供具有科学价值的参考依据。     

石河子地区奶牛乳房炎源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解石河子地区奶牛乳房炎源肠球菌的分布情况及耐药性,采集石河子地区乳房炎奶牛奶样进行肠球菌的分离,通过生化特性鉴定和16S rRNA通用引物进行PCR扩增,选用19种抗菌药物对肠球菌进行了耐药性试验。结果表明:从患乳房炎奶牛的乳样中分离出10株肠球菌;通过生化特性鉴定和16S rRNA通用引物进行保守区PCR扩增后测序确定其中有4株是屎肠球菌,6株是粪肠球菌;分离菌株对杆菌肽、新霉素、青霉素、头孢氨苄和卡那霉素基本全部耐药,对氯霉素、氟苯尼考和恩诺沙星相对敏感,两种肠球菌中未发现万古霉素耐药株。     

应用16S rDNA全序列同源性分析鉴定致羔羊脑炎性粪肠球菌

选用通过常规生理生化特性鉴定的疑似粪肠球菌菌株3株,采用16S rDNA的通用引物对其可变区基因进行克隆、测序和同源性比对,并用CLUSTAL和MEGA软件分析其遗传距离并构建系统进化树.结果表明,此3株菌株通过同源性比对,与GenBank数据库中粪肠球菌的同源性均大于99.8%,经遗传距离分析和系统进化树的构建均表明为粪肠球菌.肠球菌属细菌有40个种,各种之间的生化生理特性差别甚微,在无法通过生化生理特性准确鉴定到种的情况下,用粪肠球菌的16S rDNA全序列的测定及系统进化树的分析是鉴定该菌的一个科学可靠的方法.     

犬粪肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了鉴定从拉萨市病犬的粪便中分离出的一株细菌的种属及耐药性,试验采用了革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA PCR扩增和序列比对及药敏试验的方法对该菌株进行了研究。结果表明:该分离菌株为革兰氏阳性菌,经16S rRNA PCR鉴定为粪肠球菌,仅对多黏菌素B和利奈唑胺表现高度敏感,对其他28种抗生素均表现耐药。说明从犬中分离出的粪肠球菌对多种抗生素都具有极高的耐药性。     

多重耐药性粪肠球菌的分离与鉴定

为了阐明影响伴侣动物化脓性疾病病原菌的生物学特征,试验从天津市天津农学院附属动物医院采集患子宫蓄脓的送检病例的脓汁,采用划线培养、细菌分离、形态学观察、纯培养、生化鉴定、药敏试验及16S rRNA基因序列分析等方法对子宫蓄脓病原菌进行研究。结果表明:病原菌的培养特性、生化特征及16S rRNA基因序列比对分析结果均符合粪肠球菌的特征,其16S rRNA基因与参考菌株同源性达到99%,确定被检菌为粪肠球菌;病原菌对苯唑西林、四环素及临床上较为少见的万古霉素等抗生素耐药,仅对左氧氟沙星敏感。     

一株猪葡萄球菌的分离鉴定

从患有渗出性皮炎的仔猪分离到1株革兰阳性球菌,生化试验、形态学观察进行初步鉴定,然后进行16 S rRNA基因片段的扩增和测序,将测序结果与GenBank上的已知序列进行同源性比较,结果与猪葡萄球菌的核酸序列同源性达到99.6%,综合可见该分离菌株为猪葡萄球菌,并将其命名为GDSH1。     

四种牛源益生菌的分离鉴定

为了确定牛奶中的益生菌种类,给奶牛微生态制剂益生菌菌种的选择提供参考,试验选取体况良好、无乳房炎、产奶性能优良的荷斯坦奶牛和新生犊牛,采集其新鲜奶样和粪样,应用MRS溴甲酚紫选择性培养基和革兰氏染色对分离株进行初步鉴定,提取菌株DNA检测16S rRNA基因并测序,对分离株进行分子生物学鉴定。结果表明:所得菌株中有球菌和杆菌,革兰氏染色呈阳性,得到的12株菌株分别为约氏乳杆菌2株、布氏乳杆菌4株、粪肠球菌5株和屎肠球菌1株。这些牛源益生菌可用于研制益生菌微生态制剂。     

猪渗出性皮炎病原的分离鉴定

从疑似渗出性皮炎的哺乳仔猪体内分离到一株细菌,经革兰染色镜检以及TH-16S细菌生化鉴定系统和葡萄球菌16S rRNA、gap基因通用引物鉴定.结果表明,该菌株为葡萄球菌,gap基因的核苷酸同源性为99%.动物试验发现,试验小鼠出现躁动、被毛竖立、精神沉郁,18 h死亡,说明该菌株对小鼠具有致病力.