羊附红细胞体双抗体夹心ELISA诊断方法的建立

为快速准确诊断和检测羊附红细胞体病,及时采取防治措施,建立了检测羊附红细胞体抗原的双抗夹心ELISA诊断方法。选取规模化养殖场羊,镜检附红细胞体红细胞感染率> 90%,无菌采取血液,分离羊附红细胞体抗原,制备纯化兔抗羊附红细胞体抗体,应用辣根过氧化物酶标记抗体,进行双抗体夹心ELISA试验。试验结果表明,双抗体夹心ELISA方法的最佳工作条件为:抗体最佳包被量为82.91 μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶400,抗原最低检出量为7.81 μg/mL;而且与支原体、大肠杆菌、葡萄球菌以及牛、猪、兔附红细胞体均不出现交叉反应,表明该方法具有良好的特异性,可用于羊附红细胞体病的诊断和群体检测。     

牛附红细胞体病双抗体夹心ELISA诊断方法的建立

用过碘酸钠改良法制备酶标抗体,建立了从血液中检测奶牛温氏附红细胞体抗原的双抗体夹心ELISA。试验结果表明:抗体最适包被量为156μg/mL;酶标抗体最适工作浓度为1∶400;抗原及酶标抗体的作用温度和时间分别为37℃、1 h;封闭液为5%犊牛血清;底物显色时间为15 min;对温氏附红细胞体抗原的最低检出量为6.64μg/mL;全血及带有附红细胞体的红细胞与纯化抗体反应的最大稀释倍数分别为1∶160和1∶40,可按照此浓度检测血液中的附红细胞体抗原。对该方法进行特异性阻断试验、交叉性试验和重复性试验,结果表明此法是一种特异、灵敏、快速的诊断方法,并适合作群体检测。     

应用间接ELISA方法检测猪附红细胞体抗体

近年来,国内外对附红细胞体病的研究已取得一定进展,针对此病的血清学诊断先后建立了CFT、IHA、ELISA、IFAT等检测方法,这些血清学诊断方法所用抗原均为附红细胞体的粗提抗原。而本试验对猪附红细胞体抗原进行了提纯,并进行了免疫性分析,用具有最好免疫性的提纯抗原建立了检测猪附红细胞体抗体间接ELISA方法,并与IHA进行了比较,旨在为猪附红细胞体病的流行病学调查及疫病监测提供简便、快速、特异、敏感的检测方法。1材料与方法1.1主要材料96孔酶标板为MaxiSorp公司产品;羊抗猪IgG-HRP为美国KPL公司产品;猪肺炎支原体、猪瘟、…     

吉林省部分地区羊附红细胞体病的流行病学调查

为了解吉林省羊附红细胞体病的流行情况,试验以羊附红细胞体26.0 ku抗原蛋白为诊断抗原,采用ELISA方法对吉林省的乾安、延吉、珲春、龙井4个县市的296份放牧绵羊的血清样本进行了羊附红细胞体抗体的检测。结果表明:在检测的296份血清样本中,以平原为主的乾安县羊附红细胞体抗体的阳性率为40.2%(53/132),以山区为主的延吉、珲春、龙井市羊附红细胞体抗体的阳性率分别为60.9%(39/64)、62.5%(25/40)、61.7%(37/60),平原与山区羊附红细胞体抗体阳性率差异极显著(P<0.01);羔羊与成年羊附红细胞体抗体阳性率差异极显著(P<0.01)。说明吉林省是羊附红细胞体病的流行地区,尤其在山区感染严重。     

单抗捕捉ELISA检测猪附红细胞体血清抗体方法的建立

猪附红细胞体病是由附红细胞体(Eperythrozoon)寄生于多种动物和人红细胞表面、血浆和骨髓而引起的一种人畜共患病[1-2].本病自1928年发现以来被人们长期忽视,近年来随着人附红细胞体病病例的增多,家畜附红细胞体病的暴发流行,引起国内外学者的关注.本试验首次应用自主研制的猪附红细胞体单克隆抗体,初步建立了一种简便、经济、特异的单抗捕捉ELISA方法,用于检测猪附红细胞体的血清抗体,为诊断试剂盒的研制奠定了基础.     

兔抗猪附红细胞体阳性血清的制备研究

猪附红细胞体寄生于红细胞表面或游离于血浆、组织液及脑脊液中,引起猪发热、溶血性贫血和黄疽等主要症状。本试验用猪附红细胞体抗原和弗氏佐剂乳化制备免疫原,免疫试验兔,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清的效价,当测得血清的OD值与阴性对照组的血清值之比(P/N)分别为8.02(P/N﹥2.1)、7.16(P/N﹥2.1),采集兔血分离阳性血清。本试验为进一步研究猪附红细胞体的粘附阻抑以及该病的诊断、治疗提供了试验材料,并探索出了兔抗猪附红细胞体阳性血清的制备方法。     

单抗捕捉ELISA检测猪附红细胞体血清抗体方法的建立

在制备针对猪附红细胞体病的特异性单克隆抗体的基础上,建立了单抗捕捉快速检测猪附红细胞体病抗体的ELISA方法,并对影响ELISA结果的各项反应条件进行了优化.结果表明,猪附红细胞体腹水单抗的最佳稀释度为1:20 000,猪附红细胞体病抗原工作质量浓度为4.088 mg/L,血清稀释度为1:40,HRP标记的兔抗猪IgG的工作浓度为1:5 000.待检血清和酶标二抗的反应时间均为37℃1 h;底物在室温显色时间为10 min.已建立的ELISA方法与PCR平行检测50份样本,总符合率为92%,表明该方法特异性强、快速、敏感性高.用该法检测了各地采集的171份血清,阳性率为40.4%,与镜检的符合率为59.2%;阴性率为47.4%,与镜检的符合率为66.7%,总符合率为67.3%.     

猪附红细胞体阳性血清的制备研究

猪附红细胞体寄生于红细胞表面或游离于血浆、组织液及脑脊液中,引起猪发热、溶血性贫血和黄疽等主要症状。本试验用猪附红细胞体抗原和弗氏佐剂乳化制备免疫原,免疫健康仔猪,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清的效价,当测得免疫猪血清的OD值与阴性对照猪的血清值之比(P/N)为8.16(P/N2.1),采集免疫猪血分离阳性血清,本试验探索出了猪附红细胞体阳性血清的制备方法。     

几种药物对自然感染附红细胞体病猪的疗效比较试验

为了探寻有效防治猪附红细胞体病的药物,试验选择几种常用于治疗附红细胞体病的药物做对比试验,以期找到有效治疗猪附红细胞体病的药物。1材料和方法1.1材料1.1.1试验动物及分组有明显症状的长—大杂交猪(体重60~75 kg)耳静脉采血(加3.8%柠檬酸钠抗凝),经实验室检查,确诊是否患     

羊附红细胞体抗原的提取及免疫性分析

自1934年Neitz等发现并命名了羊附红细胞体(E.ovis)以来,羊附红细胞体已被公认为是致病性较强的一种病原体。目前,国内外对附红细胞体病的研究已取得了一定进展[1-2],但对羊附红细胞体抗原的研究尚少,至今尚无羊附红细胞体抗原免疫性分析的报道。试验对体外分离培养的羊附红细胞体经反复冻融、超声波裂解后,应用SDS-PAGE电泳及免疫印迹技术进行了免疫性分析,以期为羊附红细胞体病的深入研究提供依据。1材料与方法1.1材料RPM I-1640培养液(RPM IMed ium 1640)、M-199培养液(Med ium 199)、兔抗绵羊IgG-HRP,均购于北京华美公司;蛋白…