现场条件下胚胎的两种培养方法

试管法:取培养液1ml,滴入小玻璃试管中(10×75mm)将胚胎放入试管,用矽纸封盖。在重碳酸盐缓冲液上的空气层,用混合气体(5%CO_2、5%O_2,90%N_2)充满,使用磷酸盐缓冲液不必这样。混合气体通过进气针头充入试管(100毫     

牛冻卵体外受精产犊

近年来牛冻胚己商业化应用,如果牛卵母细胞能冷冻保存,则对建立胚胎库及提高遗传改良技术将是很有利的。本试验的目的是建立一种卵母细胞冷冻方法,即一步加入或除去高渗冷冻保护剂来冷冻保存未成熟牛卵母细胞。1 卵母细胞冷冻1.1 未成熟卵母细胞冷冻从屠宰场取回牛卵巢,用生理盐水保存,2小时内带到实验室。从卵巢吸出卵母细胞,用改进的磷酸盐缓冲液(m-PBS)洗两次,在含有 Hepes 缓冲液的 TCM199+10%超排     

猪精液的冷冻保存与输精后受孕效果

<正>1稀释液与冷冻保护剂近30年来人们研制了各种猪的冻精稀释液。一般来说,各种稀释液都含有糖、蛋白和脂蛋白、缓冲液、添加剂及冷冻保护剂。根据其成分可以分为两大类:第一类是不含缓冲液的稀释液,例如卵黄—葡萄糖、卵黄—乳糖、卵黄—蔗糖-EDTAMg-Ca溶液;第二类为含缓冲液的稀释液,例如氨基乙酸—磷酸盐和葡萄糖—磷酸盐、卵黄—葡萄糖—柠檬酸、Beltsville F3(BF3)、Beltsvle F5     

马“半胚”移植成功

自然情况下的同卵双胎马驹尚未见报道。目前,马胚胎是在排卵后6-9天非手术法回收。我们在显微操作中发现,7日龄马胚胎的外层胶状物具有弹性,显微外科难以切割。我们用非手术法从正常发情排卵后5.5或6天的母马回收胚胎。第5.5天未回收到胚胎的母马于第6天再次冲卵。只用直径小于175微米的胚胎。将胚胎置于改进的并加有10%胎犊血清(FCS)的杜氏磷酸盐缓冲液(Dul becco'sPBS)微滴中,用显微操作器,一套显微刀     

诱导猪卵母细胞体外成熟因素的研究进展

<正>卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation,IVM)是指在体外人工设定的条件下,卵母细胞经过一系列的生长发育最终形成具有受精能力的成熟卵母细胞的过程。哺乳动物卵母细胞的体外成熟培养是胚胎体外生产的基础环节。1卵巢获取通常卵巢从屠宰场获取,用含双抗的磷酸盐缓冲液(PBS)或生理盐水在尽可能短的时间内运回实验室。卵巢的保存温度及贮存时间影响卵母细胞的体外成熟。E.M.Walters等[1]研究了不同保存温度及不同贮存时间对猪卵母细胞体外成熟的影响,结果发     

奶牛胚胎冷冻新法及移植实验

奶牛非手术法胚胎移植技术最近有新的进展。其方法大致如下:在胚眙缓冲液中按一定配比加入适量的甘油和蔗糖溶液,将胚胎置入,冷冻保存。解冻后,可将胚胎直接移植至受体牛子宫颈,不必另行稀释。缺点是:必须使胚胎与蔗糖溶液充分接触一段时间,使胚胎内保护性化合物(防冻剂—甘油)渗出后才能移植,延长了解冻—移植时间,影响效果。实验用磷酸盐作缓冲液,并加入1.36M甘油和0.25M蔗糖溶液。将供体母牛作超排处理,在受精6.5～8天时用非手     

疫苗科学稀释保效果

(一)疫苗稀释液要合适为保证疫苗发挥应有的效用,必须使用合适的稀释液。一般的弱毒(菌)疫苗用生理盐水稀释液,如猪伪狂犬病基因缺失弱毒苗的稀释液指定为灭菌的PBS液(pH值为7.0的磷酸盐缓冲液),猪多杀性巴氏杆菌二联苗的稀释液指定为20%氢氧化铝胶生理盐水等。     

应用酶联免疫吸附试验诊断猪囊虫病

<正> 猪囊虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病,为了对该病建立有效而适用的检测技术,在凉山彝族自治州畜牧局的统一部署下,我们应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测技术进行了生前诊断研究,现将结果报告于后。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂:①包被液:pH9.5碳酸盐缓冲液;②洗涤液:pH7.4磷酸盐缓冲液;③底物溶液,pH5.0磷酸柠檬酸缓冲液,④终止液:0.2或0.02M硫酸溶液。     

输卵管分泌物对胚胎发育的作用

引言现在,收集和暂时保存胚胎用的培养液有从复杂的如 Hams'F 10培养液到简单的如磷酸盐缓冲液(PBS),在大多数情况下,为提高培养效果还加入血清。但是,胚胎的活力随着胚胎置于培养液中时间的延长而下降。胚胎的核移植、基因转移和(或)将体外成熟的卵母细胞进行体外受精等,在未来的胚胎移植业中将占据重要的位置。这些人工操作的胚胎都需要比目前所使用的优越得多的培养液。培养液的配方是基于对胚胎发育需要的认识而     

应用免疫过氧化物酶检查猪传染性疱疹病毒

过氧化物酶抗体结合物的制备免疫球蛋白是从猪的免疫血清中得到的,抗体效价约为1:256——对每0.1ml有100TC1D_(50)的伪狂犬病毒。用硫酸铵沉淀法制备免疫球蛋白。将100ml 血清的沉淀物溶解在10ml 无菌的蒸馏水中,用0.0175M pH6.3磷酸盐缓冲液,4℃环     

胚胎培养及培养液

前言哺乳动物胚胎的体外培养至少可以追溯到Brachet 于1913年在比利时所进行的兔囊胚的培养试验.1957年,Whitten 发现用加了牛血清白蛋白(BSA)的生理盐水和乳酸盐配成的简单的“半限性”培养液可以把2-细胞小鼠胚胎培养成囊胚,从而开始了哺乳动物植前胚培养研究的革命.在此之后,用这种培养液培养小鼠胚胎,相继研究出了胚胎冷冻、胚胎显微分割和嵌合及基因移植等多种技术.在两种情况下需要进行牛胚胎的培养。第1种情况是在胚胎冷冻或分割等操作后进行活力检查,要把桑葚胚培养成囊胚。牛胚胎的培养液相当简单,如在含有犊牛或羔羊血清的磷酸盐缓冲液(PBS)中就能很容易地把晚期8-细胞胚胎或桑葚胚培养成囊胚。第2种情况是     

猪孤雌胚胎体外培养影响因素

对NCSU-23和PZM-3等2种培养基体外培养猪孤雌激活(PA)胚胎的效果进行了比较,结果显示,PZM-3组与NCSU-23组PA胚胎囊胚孵化率差异显著(32.6%vs 18.9%,P<0.05);NCSU-23中添加2%必需氨基酸(EAA)显著降低猪PA胚胎的囊胚发育率(20.1%vs 25.1%,P<0.05);添加1%非必需氨基酸(NEAA)显著提高猪PA胚胎的囊胚率(24.7%vs 19.7%,P<0.05),但是联合添加NEAA和EAA对猪PA胚胎体外发育无显著影响(P>0.05).     

小鼠体外受精及胚胎发育的影响因素

为了完善小鼠体外受精和胚胎的体外培养系统 ,以 M16为基础培养液 ,探讨了葡萄糖、磷酸盐、EDTA、谷氨酰胺及β-巯基乙醇等对小鼠体外受精和胚胎体外培养的影响。结果表明 ,在 M16液中添加 EDTA和 L -谷氨酰胺(m M16液 ) ,小鼠的体外受精率由 2 6 %提高到 5 1%;当在 m M16液中去掉磷酸盐 ,或添加 Hepes,或添加 β-巯基乙醇 ,体外受精率由 5 1%增至 6 2 %～ 74%;m M16液中添加 Hepes,或去掉磷酸盐 ,可阻碍胚胎的体外发育 ,囊胚的扩张率由 80 %降至 49%和 5 8%,而在无糖 m M16液中添加 β-巯基乙醇 ,可显著地提高扩张囊胚率 (91%)。以上结果表明 ,M16液中添加 EDTA、谷氨酰胺和 β-巯基乙醇后 ,适用于小鼠体外受精 ;同时去掉葡萄糖后 ,则适用于 2细胞胚的体外培养。     

兔水疱性口炎的血清学诊断

1液相阻断酶联免疫吸附实验 样品采集为被检兔的血清样品。固相载体用pH值9.6的碳酸盐（CBS）缓冲液将兔抗血清作适当稀释,包被ELISA反应板,4℃过夜。然后用含0.05%吐温-20的磷酸盐缓冲液（PBST）洗板3次,再用2%卵白蛋白室温封闭1小时。洗板3次后备用。     

鸡维生素E缺乏病的诊断

勒.意.沃意托夫等人根据等人报道的鼠和家兔机体内缺乏维生素E时,红血球对二醛尿酸溶血作用,抵抗力降低的报告,对诊断维E缺乏病的方法进行了研究。溶液配制:磷酸盐缓冲液—14.2克无水磷酸氧二钠(Na_2HPO_4),加1000毫升蒸馏水,调整pH至7.4(加1N HCI1毫升);氯化钠溶液—1000毫升蒸馏水中加8.9克氯化钠(NaCI);氯化钠磷酸盐缓冲液取等量磷酸盐缓冲液与氯化钠溶液混合。二醛尿酸溶液—取100毫克二醛尿酸溶于100毫升氯化钠磷酸盐缓冲溶液中即成。     

人神经母细胞瘤细胞异种克隆胞质受体的选择

本研究检测人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪重构胚胎的体外发育潜能,以期建立人神经细胞母细胞瘤细胞的异种治疗性克隆模型,为进一步研究人癌症发生过程中的表观遗传学修饰机制及分离得到正常的人类胚胎干细胞奠定基础。分别以水牛颗粒细胞和人神经母细胞瘤细胞为供体,水牛卵母细胞为受体构建克隆胚胎,然后检测这2种重构胚胎的体外发育效率;再以猪卵母细胞为胞质受体,同样以上述2种体细胞为供体细胞构建重构胚胎。结果显示,人神经母细胞瘤细胞-水牛重构胚胎囊胚发育率显著低于水牛同种克隆胚胎的（1.1%∶12.1%,P〈0.05）,而融合率（83.7%∶79.4%,P〉0.05）和卵裂率（55.8%∶58.2%,P〉0.05）无显著差异。但是,当以猪卵母细胞为受体胞质时,人-猪重构胚胎卵裂率显著低于水牛-猪重构胚胎（43.7%∶89.8%,P〈0.05）,但重构胚胎融合率和囊胚率差异不显著（85.8%∶82.5%,0∶1.4%,P〉0.05）。结果表明,人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪异种重构胚胎可以在体外发育,尽管其囊胚发育率相对比较低。     

延胡索酸泰妙菌素口服固体制剂体外溶出度的探究

本试验旨在评价延胡索酸泰妙菌素口服固体受试制剂和参比制剂的体外溶出度。试验采用桨法测定溶出度,50rpm/min,溶出介质分别为pH1.2盐酸溶液、pH3.8醋酸盐缓冲液、pH4.8磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液和水,温度37±0.5℃,参比制剂和受试制剂0.34g/杯,取样时间为第1、2、5、10、15、30、45和60min,高效液相色谱法检测药物成分含量。结果表明延胡索酸泰妙菌素在溶出介质中比较稳定,受试制剂和参比制剂在15min内的溶出率大于85%,在五个溶出介质中的差异因子(f1)小于15%。因此,受试制剂和参比制剂的溶出行为相似,生物利用度不受溶出行为的限制。     

精子不同处理和胰岛素不同浓度对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精的影响

探讨了分别使用新鲜、冷冻和超声波断尾精子以及在胚胎培养液中分别添加不同浓度胰岛素对猪卵母细胞胞质内单精子显微受精(ICSI)胚胎早期发育的影响.结果:(1)使用冷冻解冻精子与新鲜精子相比对猪卵母细胞ICSI后的卵裂率和囊胚率均无显著影响(P＞0.05);2)精子断尾与否对猪卵母细胞ICSI后的分裂率和囊胚率没有显著影响(P＞0.05);3)在胚胎培养液中添加5 mg/L胰岛素与对照组相比可显著提高猪ICSI胚胎的囊胚发育率(18.22% vs 3.60%,P＜0.05).     

高效液相色谱法测定猪血浆中的盐酸环丙沙星

采用Waters HPLC系统，C18色谱柱，以乙腈(含三乙胺的磷酸盐缓冲液)为流动相，检测波长为278纳米，血浆中盐酸环丙沙星用甲醇提取。同时使蛋白沉淀。建立了高效液相色谱法测定猪血浆中盐酸环丙沙星浓度的方法。     

胚胎干细胞显微注射对小鼠和猪胚胎发育影响的研究

旨在为小鼠和猪多能性干细胞嵌合体制作提供参考,探讨胚胎干细胞(Embryonic stem cells或Embryonic germ cells,ES/EG)显微注射及受体胚胎发育时期等对胚胎发育的影响。对小鼠ES细胞和猪EG细胞分别进行研究:(1)将小鼠ES细胞分别注入小鼠桑椹胚和囊胚,比较不同发育时期受体胚胎体外培养的发育率和孵化率,以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的发育率和孵化率。结果表明,显微注射后的桑椹胚体外培养发育率和孵化率分别为94.7%和70.2%,囊胚率分别为84.6%和80.8%,注射后桑椹胚体外培养发育率极显著高于囊胚(P0.01),但注射后囊胚体外培养孵化率极显著高于桑椹胚(P0.01);未注射胚胎(注射胚胎)的体外培养发育率和孵化率分别为96.6%(89.9%)和67.8%(75.2%),未注射胚胎发育率极显著高于注射胚胎(P0.01),但注射胚胎孵化率极显著高于未注射胚胎(P0.01)。(2)将猪EG细胞分别注入猪桑椹胚、早囊、囊胚及孵化囊胚,比较不同发育时期受体胚胎移植后妊娠率以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的孵化率,并对猪EG细胞显微注射针和固定针的规格进行了探讨。结果表明,显微注射的桑椹胚、早囊及囊胚移植后妊娠率为67%,而显微注射的孵化囊胚移植妊娠率为0,桑椹胚、早囊及囊胚移植后受体母猪妊娠率极显著高于孵化囊胚(P0.01),由桑椹胚、早囊及囊胚注射后移植获得了两头嵌合体仔猪;显微注射和未显微注射的猪胚胎其孵化率分别为47.54%和72.97%,未注射胚胎孵化率极显著高于注射胚胎(P0.01)。确定猪EG嵌合体制作过程中,注射针外径约为30μm,内径约为25μm;固定针外直径约为130~150μm,内径约为40μm。嵌合体制作时,胚龄宜早不宜迟,桑椹胚显微注射更易操作,而且导入的时期较早,ES/EG细胞在嵌合体组织中可以有很高的贡献率,故选择桑椹胚进行注射。在本试验条件下,显微注射对小鼠胚胎发育影响不大,对猪胚胎影响较大,说明猪胚胎显微注射条件需要进一步优化。