N+注入选育高产β-葡聚糖酶菌株及其发酵条件优化的研究

β-葡聚糖酶主要包括内切β-1,3葡聚糖酶、内切β-1,4葡聚糖酶和外切β-1,3葡聚糖酶、β-1,4葡聚糖酶,属于水解酶类,对谷物中的β-葡聚糖具有水解作用。其主要用途:一是应用于啤酒生产中,可解决因大麦中难降解、黏度大的β-葡聚糖引起的麦汁和啤酒过滤速度慢的问题;二是作为饲料添加剂,消除谷物中的β-葡聚糖在家禽、家畜肠道内产生的黏性的抗营养因子影响,提高饲料的利用率。产β-葡聚糖酶菌株有细菌和霉菌,然而,目前,β-葡聚糖酶生产菌大多由于产酶活力低、发酵培养基条件复杂而受到限制。因此,须对产酶菌株进行选育。离子束注入诱变育种,…     

β-葡聚糖酶对肉鸡生产性能的影响

<正>β-葡聚糖酶是一类能降解谷物中β-葡聚糖的水解酶类的总称,β-葡聚糖酶属于半纤维素酶类,是采用枯草杆菌经过液体深层发酵制得。β-葡聚糖酶包括内切和外切β-1,3-葡聚糖酶、内切和外切β-1,4-葡聚糖酶。内切β-1,4-葡聚糖酶是饲用β-葡聚糖酶的有效成分。β-葡聚糖酶能降解β-葡聚糖分子中的β-1,3和β-1,4糖苷键,使之降解为小分子,失去亲水性和粘性,改变单胃动物肠道内容物的特性、消化酶的活性、肠道微生物的作用环境等,从而有利于动物对营养物质的消化和吸收,提高生长性能和饲料的转化率。     

β-葡聚糖酶活力测定条件研究

<正>β-葡聚糖是由葡萄糖单体通过β-1,3和β-1,4糖苷键连接而成的D型葡萄糖聚合物,它主要存在于单子叶禾本科谷实中的糊粉层和胚乳细胞壁中。β-葡聚糖酶属于水解酶类,能有效地降解β-葡聚糖分子中的β-1,3和β-1,4糖苷键,使之降解为小分子。由于在     

饲用β-葡聚糖酶的研究及应用进展

<正>β-葡聚糖酶(β-glucanase)是一种水解酶类,包括内β-1,3葡聚糖酶、内β-1,4葡聚糖酶和外β-1,3葡聚糖酶、外β—1,4葡聚糖酶,能够水解如大麦、小麦和黑麦等谷物中的β-葡聚糖,催化裂解β-葡聚糖分子中β-1,3和β-1,4糖苷键,降解生成小分子寡糖和葡萄糖。β-葡聚糖酶广泛应用于饲料、现代白酒、啤酒的酿造、制糖、食品、日化工业等。饲用β-葡聚糖酶应     

β-1,3-1,4葡聚糖酶基因双拷贝工程菌株的构建与发酵研究

本试验旨在研究β-1,3-1,4葡聚糖酶双拷贝基因毕赤酵母工程菌株的构建及发酵。首先,通过对质粒pGAP-glu-opt进行PCR扩增获得密码子优化的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因glu-opt,用EcoR I和Not I双酶切后与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,获得重组质粒p9K-glu-opt。该重组质粒经Sac I线性化后转化毕赤酵母GS115菌株,利用不含组氨酸的MDS平板和摇瓶培养,筛选重组菌株,命名为GS115/9K-glu-opt。制备GS115/9K-glu-opt感受态细胞,再用线性化的重组质粒pPIC-glu-opt二次转化,在含有抗生素Zeocin的YPDS平板上筛选glu-opt基因双拷贝重组菌株GS115/2xglu-opt。双拷贝重组菌在10 L发酵罐中进行高密度发酵培养及甲醇诱导表达,β-1,3-1,4葡聚糖酶最高酶活达到21 600 U/mL,约为单拷贝工程菌株X33/pPIC-glu-opt发酵活力的1.44倍;蛋白表达量达8.4 g/L,约为X33/pPIC-glu-opt的1.68倍。     

耐高温β-葡聚糖酶产生菌株的酶学性质的研究

从云南安宁温泉周围土壤中筛选到一株热稳定性能较好的β-葡聚糖酶产生菌W-9,并对其发酵条件及酶学特性进行初步研究。该菌株发酵72h在pH6.0,70℃条件下酶活性为82.64U/mL。对W-9所产β-葡聚糖酶的酶学性质进行研究,结果显示,β-葡聚糖酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为70℃,70℃条件下保温时,酶活基本稳定。     

木聚糖酶和β—葡聚糖酶对畜禽生产性能的影响

目前,国内外尤其是北美、欧洲等国家对木聚糖酶和β-葡聚糖酶用作畜禽饲料添加剂作了大量研究,证实酶制剂在一定条件下确实能促进动物的生长。 木聚糖酶:水解木糖苷键,可分为β-1,4木聚糖酶与β-1,3木聚糖酶两类。陆上植物的木聚糖均属β-1,4键木聚糖,海藻木聚糖为β-1,3木聚糖。β-1,3木聚糖酶大都存在于海藻及海洋生物中。木聚糖酶还有内切与外切之别,一般以内切型为主。 β-葡聚糖酶:β-葡聚糖酶可能是饲料工业中首次广泛使用的一种酶。虽然β-葡聚糖降解酶多由真菌合成,但许多其它微生物也可以合成此类酶。已经证实,β-葡聚糖酶,尤其是内环形式酶的部分水解,不仅     

β-葡聚糖及β-葡聚糖酶在畜禽饲料中的研究与应用

对饲料中β-葡聚糖的化学结构特性及其在饲料中的分布、含量和抗营养作用及其测定方法，β-葡聚糖酶的作用机理及其在饲料中的应用效果和质量衡量等问题进行了简单的论述。     

β-1,3-D-葡聚糖的免疫调节作用及其机制研究进展

大量研究表明,免疫调节剂β-1,3-D-葡聚糖具有调节动物免疫机能、抵抗感染和应激、促进动物健康等作用。本文主要就免疫调节剂β-1,3-D-葡聚糖的结构特点、免疫调节作用及其免疫调节机制进行初步探讨。     

裸藻β-1,3-葡聚糖对断奶仔猪生长性能、血清炎症细胞因子含量及肠道菌群结构的影响

本试验旨在研究裸藻β-1,3-葡聚糖对仔猪生长性能、血清炎症细胞因子含量及肠道菌群结构的影响,为裸藻β-1,3-葡聚糖的开发和应用提供依据。选取150头40日龄左右、体重[（13.06±0.26） kg]相近的“杜洛克×长白×大白猪”三元杂断奶仔猪,随机分为5个组,每组5个重复,每个重复6头猪。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加50、100、150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖及100 mg/kg的酵母β-1,3-葡聚糖。预试期3 d,正试期28 d。结果表明：1）与对照组相比,饲粮中添加100 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了断奶仔猪平均日采食量和平均日增重（P<0.05）,显著降低了料重比（P<0.05）。2）与对照组相比,饲粮中添加50、100、150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖及100 mg/kg的酵母β-1,3-葡聚糖显著提高了血清白细胞介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α含量（P<0.05）。3）与对照组相比,饲粮中添加50 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了软壁菌门（Tenericutes）相对丰度（...     

β-1,3/1,6-葡聚糖的免疫调控机理及其在畜牧生产中的应用

葡聚糖是一种广泛分布于自然界中的一类生物细胞壁成分,由葡萄糖聚合而成。来源和结构不同的葡聚糖表现出不同的生理功能,其中以β-1,3和β-1,6糖苷键连接而成的微生物源β-葡聚糖存在有效的免疫调控功能,在畜牧生产中具有良好的应用前景。本文结合国内外近年的研究结果,对此类β-葡聚糖的结构功能及其在畜牧行业的研究现状作一综述,以期为β-1,3/1,6-葡聚糖在畜牧生产中的应用提供参考。     

黑酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对感染肠炎沙门氏菌Caco-2细胞促炎症和抗炎症细胞因子基因mRNA表达水平的影响

本试验采用实时荧光定量PCR分析黑酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)诱导Caco-2细胞表达细胞因子基因mRNA表达水平的影响。试验选用Caco-2细胞,分成4个组:对照组(A组)、肠炎沙门氏菌感染组(B组)、β-1,3/1,6-葡聚糖组(C组)和β-1,3/1,6-葡聚糖+肠炎沙门氏菌共培养组(D组)。C、D组用黑酵母β-1,3/1,6-葡聚糖(50μg/mL)预处理24 h,然后B、D组各孔接种1×108CFU/mL肠炎沙门氏菌处理3 h。实时荧光定量PCR方法分析细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)基因mRNA表达水平。结果表明:肠炎沙门氏菌和β-1,3/1,6-葡聚糖均极显著地上调了IL-1β、TNF-α、IL-8和IL-10基因mRNA表达水平(P<0.01),但对TG F-β基因mRNA表达水平无显著影响(P>0.05)。与肠炎沙门氏菌感染组相比,添加β-1,3/1,6-葡聚糖可显著地下调肠炎沙门氏菌诱导Caco-2细胞的细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α基因mRNA表达水平(P<0.05),并且显著上调IL-10、TGF-β基因mRNA表达水平(P<0.05)。由此可知,黑酵母β-1,3/1,6-葡聚糖能抑制肠炎沙门氏菌感染引起的肠道上皮细胞免疫炎症反应。     

瘤胃表皮葡萄球菌的分离鉴定及其β-葡聚糖酶基因的克隆和在乳酸球菌中表达的研究

为将瘤胃微生物纤维降解酶基因转化到乳酸菌中,从绵羊瘤胃内容物中分离到1株能够降解羧甲基纤维素钠的细菌,经过形态特征及细菌16SrDNA序列鉴定为表皮葡萄球菌。根据表皮葡萄球菌在GenBank中公示的β-葡聚糖酶基因序列设计PCR扩增引物,克隆到2个β-葡聚糖酶基因序列。将2个β-葡聚糖酶基因序列与载体pMG36e连接,构建β-葡聚糖酶基因表达载体,转化到大肠杆菌,并进一步转化到乳酸球菌MG1363,均能表达β-葡聚糖酶,表达酶活达1.47U/mL和1.54U/mL,比原表皮葡萄球菌酶活0.99U/mL高出1.49倍和1.56倍。     

浸麻芽孢杆菌(Bacillus macerans)β-1,3-1,4-葡聚糖酶特性及其基因克隆

对浸麻芽孢杆菌(Bacillus macerans)所产的β-1,3-1，4-葡聚糖酶特性进行了分析。结果表明：该酶的最适温度为55℃．在60℃以下酶相对稳定。通过PCR方法扩增和克隆了该酶基因的全长DNA序列，长度为734bp，其中开放阅读框架长717bp．编码237个氨基酸。经Blast分析，该序列与已登录的浸麻芽孢杆菌和多粘芽孢杆菌(B.polymyxa)的同源性较高，分别为99％和82％。     

抽提条件对饲料酶制剂中纤维素Cx酶活力的影响

<正>纤维素是高等植物细胞壁的主要成分,它广泛存在于自然界中,是地球上最大量的可再生性碳源物质。纤维素酶是一种多组分复合酶,一般认为它包括3种成分:内切β-1,4-葡聚糖酶,即内切酶,也称Cx酶;外切β-1,4-葡聚糖酶,也称C1酶、外切酶;β-1,4-葡萄糖酶即纤维二糖酶。纤维素的降解必须依靠3种组分的协同作用才能完成。酶发挥作用主要取决于其活力的大小,而多种因素可影响酶的活力,如温度、pH值、激活剂、抑制剂等。另外,酶制剂生产厂家为提高酶制剂的稳定性,常使用     

纤维素酶的分子生物学与基因工程研究进展

<正>1纤维素酶系纤维素酶系是指能降解纤维素产生葡萄糖的一组酶的总称。大量试验研究表明,纤维素完全降解至少需3类酶系:内切葡聚糖酶(endo-1,4-β-D-glucanase,EC 3.2.1.4),来自真菌的简称为EG,来自细菌的简称为Cen;外切葡聚糖酶(exo-1,4-β-D-glucanase,EC 3.2.1.91),来自真菌的简称为CBH,来自细菌的简称为Cex;β-葡萄糖苷酶(β-1,4-glucosidase,EC 3.2.1.21),简称BG。纤维素酶水解纤维素是这3个组分协同作用的结果。     

酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对断奶仔猪细胞免疫和体液免疫机能的影响

为了探讨酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对自然条件下饲养的断奶仔猪细胞和体液免疫机能的影响,选择品种一致,体重接近,公母各半,日龄为(28±3)d的长×大二元断奶仔猪160头,随机分成4个处理组,分别连续添加0、50、100和200 mg/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖,进行试验,试验期为28 d.采用MTT法测定外周血淋巴细胞转化率,流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)检测外周血主要淋巴细胞亚群,IDEXX-ELISA antibodyTest Kit检测猪瘟抗体.结果发现添加β-1,3/1,6-葡聚糖14 d后,试验组外周血T、B淋巴细胞转化率极显著高于对照组(P＜0.01);但28 d无明显差异(P＞0.05).21 d试验组猪瘟疫苗免疫的抗体水平显著提高(P＜0.05);低剂量(50 mg/kg)的β-1,3/1,6-葡聚糖对Th细胞、Tc细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞数量及其CD4 /CD8 比值均有提高,但高剂量(100和200 mg/kg)的β-1,3/1,6-葡聚糖可以导致CD8 T细胞数量显著升高(P＜0.05),CD4 /CD8 显著下降(P＜0.05).结果表明酵母β-1,3/1,6-葡聚糖可影响猪的细胞和体液免疫功能,对猪瘟疫苗免疫抗体水平有提高,其免疫调节作用受添加剂量和时间的影响.低剂量酵母β-1,3/1,6-葡聚糖能适度提高机体细胞和体液免疫机能,增强机体的抗病力,高剂量可能会影响机体免疫系统的正常状态.     

β-葡聚糖及其在水产动物中的应用研究

β-葡聚糖(β-glucan)是目前最有效的水产免疫刺激剂之一,广泛分布于植物、细菌、真菌、酵母和海藻中。文章综述了β-葡聚糖的结构、来源、生理作用、机理及其在水产动物中的应用等方面的研究进展,并分析了β-葡聚糖研究中存在的问题及今后的研究方向。     

日粮添加酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对哺乳仔猪生长性能和免疫功能的影响

试验选用相近胎次(4-6胎)和分娩日龄(相差3d左右)的长×大二元母猪20头,随机分成4个处理组,各处理组哺乳仔猪均从5日龄开始补料,哺乳仔猪日粮中分别添加0、50、100和200 mg/kg的酵母-β1,3/1,6-葡聚糖,研究酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对哺乳仔猪生长性能和免疫机能的影响。结果表明:哺乳仔猪日粮中添加酵母β-1,3/1,6-葡聚糖,对生产性能无显著影响,有降低仔猪腹泻率和死亡率的趋势;可显著提高外周血淋巴细胞转化率,血清IgA、IgG和IgM浓度(P<0.05),有提高血清溶菌酶活性的趋势。综合全期生长性能和免疫调节效果来看,哺乳仔猪日粮中β-1,3/1,6-葡聚糖适宜的添加剂量为50mg/kg。     

日粮添加不同水平酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对断奶仔猪生产性能和血清生理指标的影响

为了探讨酵母-β1,3/1,6-葡聚糖对断奶仔猪生产性能、血清理化指标的影响,试验选择品种一致,体重接近,公、母各半,日龄为(28±3)d的长×大二元断奶仔猪160头,随机分成4个处理组,分别连续添加(0、50、100和200mg/kg)的-β1,3/1,6-葡聚糖,试验期为28d。结果表明:断奶仔猪日粮中添加-β1,3/1,6-葡聚糖有提高血清总蛋白浓度的趋势(P<0.01),可极显著(P<0.01)提高血清球蛋白浓度,显著(P<0.05)降低血清总胆固醇浓度和LDL浓度,对血清甘油三酯浓度、HDL浓度和葡萄糖浓度均无显著影响(P>0.05)。同时也发现,断奶仔猪日粮中连续添加50mg/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖,可显著提高日增重及改善饲料转化率,显著(P<0.05)降低腹泻发生频率,有提高日采食量的趋势,各处理组死亡率无显著差异。剂量太高有提高腹泻发生率的趋势。上述试验表明,断奶仔猪日粮中添加50 mg/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖可调节其脂质代谢和蛋白质代谢,增强机体免疫功能,从而显著提高其生长性能。