鹅GHR基因荧光定量PCR险测方法的建立

采用PCR方法克隆了鹅生长激素受体(GHR)基因,构建了重组质粒pMD-18T-GHR,并将其作为标准阳性模板.通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-18T-GHR为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了检测GHR的荧光定量PCR方法.结果显示,该方法构建的标准曲线线性关系良好,建立的GHR基因荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强(可以检测出低于10个拷贝/μL的样品),准确可靠.籽鹅和莱茵鹅GHRmRNA出壳到90日龄生长过程中肝脏中的表达量不同,30日龄不同组织表达量各有变化特点.     

鹅GHR基因荧光定量PC凡检测方法的建立

采用PCR方法克隆了鹅生长激素受体（GHR）基因,构建了重组质粒pMD-18T-GHR,并将其作为标准阳性模板。通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-18T-GHR为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了检测GHR的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法构建的标准曲线线性关系良好,建立的GHR基因荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强（可以检测出低于10个拷贝／μL的样品）,准确可靠。籽鹅和莱茵鹅GHRmRNA出壳到90日龄生长过程中肝脏中的表达量不同,30日龄不同组织表达量各有变化特点。     

鹅胰岛素样生长因子-Ⅰ基因的克隆及其mRNA在组织中的表达量变化

利用半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）克隆了黑龙江籽鹅IGF-Ⅰ基因，并检测了生长期间该基因mRNA在各组织中的表达量变化。结果表明，鹅IGF-Ⅰ基因与鸡、鸭IGF-Ⅰ基因的同源性分别为97．6％、99．3％；鹅肝组织中IGF-ⅠmRNA的表达水平在30日龄和60日龄较高，而30日龄的表达量极显著高于22、28日龄鹅胚和1日龄籽鹅，显著高于10日龄雏鹅；30日龄雏鹅IGF-ⅠmRNA在肝、卵巢、胸肌、肺、脾、腿肌、垂体、肌胃、肾、心等组织中都有表达，其中肝、卵巢、胸肌、肺的表达量较高。     

鹅多个组织GHR和IGF-Ⅰ基因表达的发育性变化

为研究鹅不同组织生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因发育性变化,本试验选择0日龄杂交鹅(吉林白鹅×农安籽鹅)78只作为试验动物,应用荧光定量技术分别对0、14、28、42、56日龄鹅心脏、肝脏、腺胃、腿肌GHR以及IGF-I mRNA进行测定。结果显示,0~56日龄期间杂交鹅GHR以及IGF-I mRNA在肝脏中表达量最高,其次为腿肌和腺胃,心脏GHR以及IGF-I mRNA表达量最低。鹅心脏、肝脏、腺胃和腿肌GHR mRNA表达量随日龄增加有极显著的发育性变化(P0.01)。鹅心脏、肝脏、腿肌GHR mRNA表达量均于14日龄达到峰值,鹅腺胃GHR mRNA表达量于28日龄达到峰值。鹅肝脏、腺胃和腿肌IGF-I mRNA表达随日龄增加有极显著的发育性变化(P0.01)。鹅心脏、腿肌IGF-I mRNA表达量于28日龄出现峰值,但肝脏、腺胃IGF-I mRNA表达量在0~56日龄不断升高。总体上看,公鹅与母鹅各组织GHR以及IGF-I mRNA表达量无显著差异(P0.05)。结果表明,日龄对于GHR和IGF-I基因在鹅各组织表达具有重要影响;性别对鹅组织GHR和IGF-I基因表达影响较小;鹅各组织GHR和IGF-I基因发育性变化具有组织特异性,各基因表达量在鹅不同组织出现峰值的时间并不一致。     

生长激素受体基因在美国短毛黑水貂组织中表达量变化研究

为了探讨水貂生长激素受体(GHR)基因在不同组织中的表达变化,以美国短毛黑水貂为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测了GHR基因在不同生长发育阶段(45、90、120、150、180日龄)心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤等组织的表达水平,并进行了比较分析。结果表明:GHR基因在同一组织不同日龄表达具有较大差异,例如,在心脏、肝脏和脾脏组织,180日龄表达量极显著高于其他日龄(P0.01),而肠组织,其在45、120日龄均极显著高于其他日龄(P0.01);此外GHR表达量在同一日龄不同组织同样存在较大差异,例如,90日龄时皮肤组织极显著高于其他组织(P0.01),180日龄时脾脏极显著高于其他组织(P0.01)。说明水貂GHR基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

蓝塘仔猪IGF-1水平与组织IGF-1、GHR基因的表达

32头不同日龄(出生、3、21、35d)蓝塘仔猪,由前腔静脉采血后剖杀,取肝脏、背最长肌样品。用RIA法测血液、组织中IGF 1浓度,用放射受体法(RBA)检测肝脏、肌肉组织中GHR结合活性,用实时荧光定量PCR法检测IGF 1、GHRmRNA的表达水平。结果表明:(1)血液中IGF 1在出生日显著高于其它时期(P<0 05)。肌肉组织中IGF 1含量高于肝脏组织,肌肉组织IGF 1含量在3、21、35日龄时都显著高于出生日(P<0 05)。(2)肝脏细胞膜GHR结合活性在出生日显著高于3、21日龄(P<0 05),肝脏细胞膜GHR结合活性高于肌肉组织。(3)肝脏组织IGF 1、GHRmRNA的表达量均显著高于肌肉组织(P<0 05)。肝脏IGF 1mRNA的表达在出生日、21日龄时显著高于3、35日龄(P<0 05),GHRmRNA的表达在出生日显著高于其它日龄(P<0 05)。肌肉IGF 1、GHRmRNA的表达在出生日均显著高于其它日龄(P<0 05)。     

鹅IDH1基因的分离、序列分析及表达特征研究

为阐明鹅肥肝形成的机制,使用mRNA差异显示技术研究朗德鹅和淑浦鹅在超饲养和正常饲养条件下肝脏基因表达差异.基因IDH1被证实在2个品种鹅肝脏中表达受到显著抑制(P<0.05).结果,得到了该基因1269 bp的CDS序列,与鸡IDHI有95%的同源性.序列分析表明,该序列含有1个1 248 bp的开放读码框(ORF),编码含415个氨基酸的蛋白质,该蛋白质序列存在1个保守结构域Icd,与其它物种该蛋白的同源性分别为:鸡99%、大鼠89%、人90%、猿90%、牛88%、小鼠88%.应用生物信息学的方法对该蛋白质的功能和结构进行了分析.组织表达分析表明,鹅IDH1基因在肝脏中表达丰富,在脾、肾和肌胃中中等表达,在其它组织中表达量较低.研究结果显示,超饲可以抑制鹅肝脏IDH1基因mRNA的表达.     

鹅MAPK14基因部分序列克隆及填饲对其mRNA丰度的影响

为研究填饲对鹅丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)mRNA表达水平的影响,本实验克隆了鹅MAPK14部分编码区序列,并用荧光定量PCR方法检测了填饲对四川白鹅和朗德鹅肝组织MAPK14基因表达量的影响。结果表明:获得鹅MAPK14基因cDNA 951 bp序列,可编码316个氨基酸残基。经分析,鹅MAPK14部分核苷酸序列与原鸡MAPK14基因的同源性为94.8%,对应的氨基酸同源性为99.7%;荧光定量PCR检测发现,无论在对照组还是填饲组,四川白鹅的MAPK14表达量均高于朗德鹅,填饲能显著上调MAPK14 mRNA在2个鹅品种中的表达丰度。结果提示,填饲能够引起鹅肝组织中MAPK14表达丰度显著增加,且该影响存在显著的品种差异。     

西藏小型猪不同组织中GHR基因表达的发育性变化

为了对西藏小型猪GHR基因在不同器官组织和不同年龄阶段的表达情况进行测定,试验采用Real-time PCR的方法,以GAPDH为内参,定量分析0岁(1日龄)、0.1岁(36日龄)、0.25岁(90日龄)、0.5岁(180日龄)、1岁(360日龄)、2岁(720日龄)、3岁(1 080日龄)的西藏小型猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、皮肤器官组织中GHR基因mRNA表达水平,并且进行比较分析。结果表明:生长激素受体基因在0,0.1,0.25,0.5,1,2,3岁各年龄阶段的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、皮肤各器官组织中均有表达。在不同器官的表达中,GHR基因在1岁、2岁肺脏组织中的表达量最高,肌肉组织中的表达量最低;在0.25岁肾脏组织中的表达量最高,肌肉组织中的表达量最低。在不同年龄阶段的表达中,生长激素受体基因在0.1岁时表达量达到峰值。说明西藏小型猪的生长激素受体基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

中国环颈雉A-FABP基因cDNA部分序列测定与组织表达分析

运用RT-PCR方法从中国环颈雉的总RNA中克隆了脂肪型脂肪酸结合蛋白基因的cDNA部分序列,然后运用Real-time PCR法检测了A-FABP基因在中国环颈雉不同发育阶段、不同组织及吉林黄鸡和AA白羽肉鸡的表达情况。结果显示:中国环颈雉A-FABP基因部分cDNA序列为412 bp,与鸡、鸭的基因序列同源性较高,具有脂质运载蛋白家族结构域特征。中国环颈雉A-FABP基因在150日龄表达量最大,脂肪组织为优势表达组织,不同品种间吉林黄鸡表达量最大。中国环颈雉A-FABP基因的研究,为进一步研究中国环颈雉的生长调控和良种开发与利用提供理论依据。     

泰和鸡生长早期法氏囊和胸腺中白细胞介素2和6的含量变化以及胸腺中生长激素受体表达

用放射免疫法对泰和鸡和AA(ArborAcres)肉鸡的法氏囊和胸腺组织匀浆的白细胞介素IL 2和IL 6作了测定,并以胸腺组织的RNA作RT PCR测定生长激素受体(GHR)的表达。结果表明两种鸡法氏囊IL 2含量5日龄时没有差异,20日龄和50日龄时泰和鸡高于AA鸡(P<0 05);两种鸡胸腺中IL 2含量在5日龄和50日龄时没有差异,20日龄时泰和鸡高于AA鸡(P<0 05);5日龄时AA鸡法氏囊中IL 6含量高于AA鸡(P<0 05)但20日龄和50日龄时两种鸡没有差异;两种鸡胸腺中IL 6含量在各阶段都没有差异。胸腺的GHR的mRNA表达量泰和鸡在10日龄和20日龄时显著高于AA鸡(P<0 05),泰和鸡5日龄表达量较低,10～20日龄时较高,50日龄时又变低,而AA鸡在5日龄时较高,10～20日龄时降低,50日龄时又略升高。胸腺的GHRmRNA表达的这种变化规律,与这两种鸡的胸腺中的IL 2含量变化规律相吻合。     

北京鸭×番鸭杂种优势差异表达基因GHR的克隆

以北京鸭、法国番鸭及其正反杂交1代为试验材料,采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)方法分析不同试验组肌肉组织基因表达差异,结合抑制性消减杂交(SSH)加以验证,发现生长激素受体(GHR)基因在杂种中上调表达。鸭GHR基因3′端578bp片段测序及比对结果表明,该基因与鸡GHR基因核苷酸序列同源性为90%,氨基酸序列同源性为93%。     

IFITM1基因克隆及其在不同生长阶段牦牛各组织中的表达分析

为鉴定牦牛IFITM1基因并分析其在不同生长阶段牦牛5种组织中的转录水平和蛋白表达量。本研究采用根据普通牛IFITM1基因设计的引物,PCR扩增牦牛IFITM1基因并利用生物信息学软件分析其序列,结果显示,获得牦牛546 bp的IFITM1基因c DNA序列,其中编码(CDS)区为375 bp,编码124个氨基酸残基。牦牛IFITM1基因序列与普通牛的同源性最高,为98.7%。进一步采用荧光定量PCR检测IFITM1基因在不同生长阶段牦牛各组织中的转录水平,结果显示,IFITM1在1日龄、15月龄和5岁龄牦牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中均有不同程度的转录水平,在肝脏中的转录水平均显著高于在脾脏、肺脏和肾脏中的转录水平(p0.05),随着年龄的增长IFITM基因在牦牛肝脏中的转录水平呈现先上升后下降的趋势,15月龄相对于1日龄时的转录水平显著升高(p0.01),随着年龄的增长IFITM1基因的转录水平在耗牛肺脏中呈现持续下降的趋势,而在脾脏和肾脏中呈现先下降后稳定的趋势,且5岁龄相对于1日龄时的转录水平均显著降低(p0.01)。同时采用免疫组化技术检测IFITM1蛋白在牦牛肝脏中的定位及表达。结果显示,IFITM1蛋白在3个生长阶段牦牛的肝脏中均有表达并定位于细胞膜,且该蛋白表达量随着年龄的增长呈现先下降后上升的趋势。本研究为深入探究IFITM1蛋白的功能奠定基础。     

赖氨酸对绵羊肝脏和背最长肌中GHR和IGF-Ⅰ基因表达调控的影响

为了研究赖氨酸对绵羊组织生长的影响,试验选用15只年龄、体重相近的杂交母羊(陶塞特♂×蒙古羊♀)随机分为3组,于基础日粮中分别添加不同水平的赖氨酸(0,4,10 g),采用Real-time PCR方法检测日粮不同赖氨酸水平对绵羊肝脏和背最长肌中GHR和IGF-ⅠmRNA表达的影响。结果表明:日粮赖氨酸水平影响绵羊肝脏和背最长肌中GHR和IGF-Ⅰ基因的表达,随日粮赖氨酸水平的提高肝脏GHR和IGF-ⅠmRNA及背最长肌IGF-ⅠmRNA表达量相应增加;背最长肌中4 g和10 g赖氨酸组GHR基因相对表达量均极显著高于对照组(P<0.01),10 g赖氨酸组的GHR基因相对表达量与4 g赖氨酸组间差异不显著(P>0.05)。说明添加一定量的赖氨酸可以调节绵羊组织的生长发育。     

脂肪酸合成酶基因mRNA在马身猪和大白猪3种组织中的发育性表达研究

为探究脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)基因在猪不同组织中的发育性表达规律,本研究采用实时荧光定量PCR技术检测马身猪和大白猪7个阶段(初生、30、60、90、120、150和180日龄)肝脏、背最长肌和背部皮下脂肪3种组织中FAS基因mRNA的相对表达量。结果表明,品种间比较,FAS基因mRNA在马身猪和大白猪肝脏、背最长肌和背部皮下脂肪组织各生长发育阶段中的表达差异均达到显著或极显著(除肝脏组织初生阶段和背部皮下脂肪组织120日龄阶段)(P<0.05;P<0.01)。FAS基因mRNA在大白猪组织间的表达差异与生长发育相关,150和180日龄阶段,背部皮下脂肪组织中表达量极显著高于肝脏和背最长肌组织(P<0.01),初生、30日龄和90日龄阶段,背最长肌中的表达量极显著高于肝脏和背部皮下脂肪组织(初生阶段无脂肪组织样)(P<0.01);而马身猪整个发育过程中,背最长肌组织表现为优势组织,极显著高于其他2种组织(除120日龄阶段外)(P<0.01),脂肪组织表达量次之,肝脏组织中表达量较少。品种、日龄、组织及品种与日龄、组织与日龄的互作效应对FAS基因mRNA的相对表达量均有极显著影响(P<0.01)。FAS基因直接参与脂肪酸的合成,对猪肉质性状的遗传改良具有重要意义。     

IGFBP-3基因在两个品种鸡组织中的表达及其与生长性状的相关性分析

为研究IGFBP-3基因表达与鸡生长性状的相关性,以生长速度差异较大的花山麻鸡和清远麻鸡两个黄羽肉鸡品种为研究素材,用实时荧光定量PCR法检测胚胎期和出雏后两个品种鸡胸肌和肝脏中IGFBP-3基因的表达规律,并将其与体重、胸肌重和肝脏重进行相关性分析。结果表明,在9胚龄时两个品种鸡胸肌和肝脏中均可检测到IGFBP-3基因表达,同一胚龄或日龄品种内组织间比较,胚胎期两个品种鸡胸肌IGFBP-3 mRNA表达量均高于肝脏,出雏后肝脏IGFBP-3 mRNA表达量迅速上升,胸肌IGFBP-3 mRNA表达量下降,两个品种鸡肝脏IGFBP-3 mRNA表达量均极显著高于胸肌(P0.01);组织中IGFBP-3 mRNA表达量与组织重量和体重相关研究表明,两个品种鸡肝脏IGFBP-3 mRNA表达量与其胸肌重、肝脏重和体重呈显著或极显著正相关(P0.05;P0.01),胸肌IGFBP-3 mRNA表达量与其胸肌重、肝脏重和体重均呈极显著负相关(P0.01)。研究结果揭示,IGFBP-3 mRNA在鸡中的表达具有品种、年龄和组织特异性,出雏前肝脏并不是鸡产生IGFBP-3的主要器官,出雏后鸡IGFBP-3可能主要由肝脏合成,肝脏中IGFBP-3 mRNA水平差异是导致两个品种鸡出雏后体重和胸肌重差异的重要因素。     

从江香猪和大白猪不同组织/器官中GHR、JAK2、STAT3基因的表达分析

为了分析从江香猪和大白猪不同组织中GHR、JAK2、STAT3基因的表达差异,试验取6月龄、体况相近且饲养环境相同的贵州从江香猪和大白猪各4头,分别提取心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脂肪、大肠、小肠和背最长肌组织的总RNA,以猪GAPDH基因为内参,设计GHR、JAK2、STAT3基因的荧光定量引物,以荧光定量PCR法检测GHR、JAK2、STAT3基因在两个品种不同组织中的表达量。结果表明:GHR、JAK2、STAT3基因在两个品种不同组织/器官中均有表达,其中GHR基因在肝脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著(P0. 01),在脂肪中相对表达量最低; JAK2基因在肝脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著(P0. 01),在背最长肌中相对表达量最低; STAT3基因在肾脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著(P0. 01),在背最长肌中相对表达量最低。说明GHR、JAK2、STAT3基因在动物生长发育过程中发挥重要作用,在不同组织器官中的表达存在差异。     

绵羊BTG2基因CDs区克隆、生物信息学分析及组织mRNA表达研究

本研究旨在克隆小尾寒羊B细胞易位基因2(B-cell Translocation Gene 2,BTG2)基因编码CDs区,并对其进行生物信息学分析,同时检测该基因在羔羊期各组织中的mRNA表达情况。通过RT-PCR和TA克隆方法获得BTG2基因CDs区序列;利用在线软件对该基因进行生物信息分析;采用qPCR检测该基因在3、40日龄绵羊的各组织中的表达情况。结果表明:成功获得小尾寒羊BTG2基因CDs区序列453 bp;绵羊与牛、猪、虎鲸、人、大鼠、小鼠同源性分别为98.9%、90.29%、94.04%、88.52%和85.65%、86.98%,且绵羊与牛的亲缘关系最近,与小鼠的亲缘关系最远。理化性质结果显示BTG2基因编码150个氨基酸,蛋白分子式为C748H1190N208O213S8,分子质量为17 ku,理论等电点(pI)为9.14,半衰期为30 h,属于不稳定亲水性蛋白,且不存在跨膜结构和信号肽序列,蛋白结构主要通过α-螺旋、无规则卷曲和β股组成,为混合型蛋白;qPCR检测到BTG2基因mRNA在不同日龄羔羊心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠和肌肉均有表达,且均在肝脏中表达量最高;在心脏、肝脏、脾脏、肺脏组织中,40日龄BTG2表达量极显著高于3日龄,而在肾脏、肠和肌肉中,40日龄极显著低于3日龄。结果表明,BTG2广泛存在各组织中,且随着日龄增加,在各组织中的表达趋势不同,提示其功能的重要性和多重性,并且BTG2在肝组织中表达量最高,说明BTG2可能与脂代谢以及糖代谢等调控功能相关。     

太行鸡VIPR-1基因表达特点及其功能分析

旨在研究太行鸡血管活性肠肽受体-1(VIPR-1)基因的分子结构和特征,并结合该基因在高/低产蛋群体中的表达特性及其组织表达谱分析其功能。采集260日龄太行鸡高产(H)/低产(L)组个体血液、卵巢组织和内脏组织,分别提取DNA和RNA,随后将RNA反转录,设计VIPR-1特异性引物进行PCR扩增、克隆、测序,获得CDS区序列后运用生物信息学方法对序列结构进行分析;以鸡GAPDH基因作为内参,在不同组织中使用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;在H和L组卵巢组织中使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对VIPR-1基因的表达量进行检测。结果显示,VIPR-1基因CDS区全长1 341 bp,共编码446个氨基酸,该基因编码蛋白的二级结构主要由α-螺旋、延伸、β-旋折叠及无规则卷曲4种结构组成;同源性分析显示,太行鸡VIPR-1基因与鸭、火鸡的同源性最高(分别为92.24%、90.11%),与其他动物一致性也在64.51%～67.18%之间。组织表达谱显示,VIPR-1基因在太行鸡卵巢中表达量最高;qRT-PCR分析表明,VIPR-1 mRNA在高产太行鸡卵巢组织中的表达量显著高于低产太行鸡(P0.05)。本研究为进一步探讨VIPR-1基因在家禽产蛋性能中的调控作用提供了依据,为后期深入研究蛋鸡产蛋分子机制奠定基础。     

籽鹅生长期部分血液激素含量及IGF-I mRNA表达量的研究

试验选择健康1日龄籽鹅100只，相同条件下饲养到12周龄。分析血清中IGF—I、T3和T4变化规律。同时，利用RT—PCR技术研究IGF-I mRNA在不同组织中的表达量变化。结果表明：血清IGF—I水平在出生后30d内都较高，30日龄与其他日龄相比差异均显著（P〈0．05）；T3水平在出生时最高，60日龄时低于其他各日龄（P〈0．05）；T4水平出生时显著低于其他各日龄（P〈0．05）；肝脏中IGF—I mRNA在30日龄表达量极显著高于其他各日龄（P〈0．05）；30日龄各组织中IGF-I mRNA以肝脏和生殖器官表达量最高。