识别牛巴贝斯梨形虫的特异性DNA探针

用质粒ＰｕＮ１２１从墨西哥虫株Ｍ建立牛巴贝斯梨形虫ＤＮＡ的基因族，并克隆于大肠杆上，选择几个与标记的牛巴贝斯梨形虫基因ＤＮＡ杂交的重组质粒，进一步分析，发现ＰＭｕ－Ｂ１敏感性较高，能检测出２５ｐｇ纯净的牛巴贝斯梨形虫ＤＮＡ。１０μｌ感染全血中３００个梨形虫或０．０００２５％虫血症，ＰＭｕ－Ｂ１含有６．０ｋｂ牛巴贝斯梨形虫ＤＮＡ插人物，该插人物不与双芽巴贝斯梨形虫，伊氏锥虫，恶性疟原虫，边缘边虫，微     

吉氏巴贝斯虫cDNA探针的制备及杂交试验

本实验将－６．６ｋｂ的吉氏巴贝斯虫ｃＤＮＡ片段以光照活化法标记光敏生物素，制备成光敏生物素探针。与吉氏巴贝斯虫基因组ＤＮＡ、伊氏锥虫基因组ＤＮＡ、犬白细胞ＤＮＡ的斑点杂交试验表明，该探针可与０．００１ｎｇ以上量的吉氏巴贝斯虫ＤＮＡ杂交，而不与任何浓度的伊氏锥虫ＤＮＡ和犬ＤＮＡ杂交，具有很高的敏感性和特异性。     

牛巴贝斯虫C51A重组质粒在大肠杆菌中的转化技术

我们在应用光敏生物素直接标记牛巴贝斯虫C51A质粒DNA探针检测牛巴贝斯虫DNA的研究基础上，研究了牛巴贝斯虫C51A重组PUC18导入并建立大肠杆菌DH52转化株的技术，为研制牛巴贝斯虫核酸探针建立了必要的技术条件。材料和方法】．材料（l）牛巴贝斯虫（BQbesiabovis）基因C51A重组质粒PUC18为澳大利亚CSIROB．P．D8iPyyPle博士惠赠的冻干品。该基因已于1992年收人国际基因库。（2）试剂：蛋白陈为日本进口品；EcoRI酶和x／EcoRI＋mudIll均购自华美工业公司。2．方法（1）导入试验：挑取大肠杆菌DH52单菌落移植到smlLB液体培…     

牛巴贝斯虫核酸探针检测中血样处理优化试验

分别采用光敏生物素，地高辛标记的牛巴贝斯虫ＤＮＡ探针检测三种血样处理方法提取的虫体ＤＮＡ，结果表明：ＴｒｉｔｏｎＸＺ－１００／乙酸处理方法与全血提取法有相同检测水平；但前者操作简便；皂素处理法不能回收全部虫体，降低了探针敏感性。     

地高辛标记空肠弯曲菌DNA探针的研究

应用地高辛标记核酸技术将地高辛结合到空肠弯曲菌染色体ＤＮＡ上,制备了地高辛标记的ＤＮＡ探针。地高辛标记的空肠弯曲菌ＤＮＡ探针仅与空肠弯曲菌ＣＪ１、ＣＪ２发生反应,而与大脾性杆菌、鼠沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副结核分枝杆功不发生反应,具有很高的特异性,其敏感性可检测出０．２２ｎｇ的样品ＤＮＡ,较光敏生物素（８ｎｇ）、＾３２Ｐ同位素（４ｎｇ）标记的核酸探针高。     

光生物素标记DNA探针检测牛巴贝斯虫研究初报

光生物素标记重组质粒DNA(c51A)探针检测牛巴贝斯虫研究的初步试验结果表明,能特异地检出感染牛血中的巴贝斯虫,灵敏度为10pg质粒DNA,相当于约150个感染红细胞的虫体DNA。     

应用核酸杂交技术检测畜禽衣原体病的研究

从纯化山羊流产衣原体颗粒提取ＤＮＡ，用ＤＮＡ限制性内切酶切割，进行酶切图谱分析，与文献报道的图谱对比，证实确系纯的衣原体ＤＮＡ制品。将衣原体ＤＮＡ用光敏生物素标记，制成核酸探针，用斑点杂交法检测衣原体核酸，灵敏度可达１０ｐｇ。又用重组克隆技术将衣原体ＤＮＡ片段克隆于大肠杆菌质粒载体上，筛选出衣原体特异的ＤＮＡ片段制成光生物素探针，可以同样有交效地检测衣原体核酸。用光生物素衣原体探针检测了山羊、绵羊、豚鼠、小白鼠、鸡胚等的衣原体感染病料，结果准确。与间接血凝法检测衣原体感染做了对比试验，证明核酸杂交法检测衣原体病更为灵敏和特异     

光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究

采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。     

识别牛巴贝斯梨形虫的特异性DNA探针

用质粒PuN121从墨西哥虫株M建立牛巴贝斯梨形虫DNA的基因族,并克隆于大肠杆菌上,选择几个与标记的牛巴贝斯梨形虫基因DNA杂交的重组质粒,进一步分析,发现PMu—B_1敏感性较高,能检测出25pg纯净的牛巴贝斯梨形虫DNA。10μl感染全血中300个梨形虫或0.00025％虫血症,PMu—B_1含有6.0kb牛巴贝斯梨形虫DNA插人物,该插人物不与双芽巴贝斯梨形虫、伊氏锥虫、恶性疟原虫、边缘边虫、微小牛蜱和奶牛DNA发生交叉反应,基因组DNA Southem印迹析,PMu—B_1能识别两种牛巴贝斯梨形虫地方株,即墨西哥虫株M和泰国TS_4株,因此,PMu—B_1探针可用于诊断牛和蜱巴贝斯梨形虫感染及识别牛巴贝斯梨形虫虫株。     

光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究

采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异，灵敏，稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。