苜蓿皂苷对大鼠肝脏及肝脏细胞低密度脂蛋白受体、三磷酸腺苷结合盒转运体mRNA表达的影响

本试验旨在研究苜蓿皂苷对大鼠肝脏及大鼠肝脏细胞(BRL细胞)胆固醇清除和转运途径中关键基因低密度脂蛋白受体(LDLR)、三磷酸腺苷结合盒转运体G5(ABCG5)、三磷酸腺苷结合盒转运体G8(ABCG8)mRNA表达量的影响,从个体和细胞水平初步探讨苜蓿皂苷调控胆固醇清除和转运的分子机制。采用高脂饲粮建立大鼠高脂模型,测定苜蓿皂苷对正常、高脂大鼠血清指标[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量]和肝脏LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量的影响;采用高糖DMEM培养液建立BRL细胞脂变模型,测定苜蓿皂苷浓度对BRL细胞活性的影响,测定苜蓿皂苷对正常、脂变细胞LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量的影响。结果表明:1)苜蓿皂苷显著降低高脂大鼠血清中TG、TC和LDL-C的含量(P0.05);2)苜蓿皂苷显著上调正常大鼠肝脏LDLR、ABCG5、ABCG8及高脂大鼠ABCG5、ABCG8 mRNA表达量(P0.05);3)添加200、250μg/m L苜蓿皂苷显著提高了BRL细胞的活性(P0.05);4)苜蓿皂苷显著上调正常BRL细胞LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量(P0.05),而对脂变BRL细胞各基因mRNA表达量无显著影响(P0.05)。结果提示,苜蓿皂苷可通过调控LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA的表达来增加肝细胞内胆固醇的清除和转运,从而降低机体胆固醇的含量。     

苜蓿皂苷对高脂血症大鼠胆固醇代谢及其相关基因表达的影响

本文旨在探讨苜蓿皂苷对高脂血症大鼠胆固醇代谢及肝脏组织中胆固醇7α-羟化酶( CYP7 A1)、低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因表达的影响.取雄性健康SD大鼠40只,随机分为4组,分别为:正常对照组、高脂模型组、苜蓿皂苷预防组和苜蓿皂苷治疗组,每组10只.正常对照组饲喂基础饲粮,其余3组均饲喂高脂饲粮,其中苜蓿皂苷预防组从第1周开始灌胃240 mg/kg苜蓿皂苷,苜蓿皂苷治疗组从第5周开始灌胃240 mg/kg苜蓿皂苷,试验期共8周.测定试验大鼠体重、肝脏系数、血脂水平和肝脏病理变化情况,并采用酶联免疫法和实时荧光定量PCR技术分别检测大鼠肝脏CYP7A1和LDL-R的蛋白和mRNA表达结果.结果表明:1)和高脂模型组相比,苜蓿皂苷极显著降低预防组大鼠体重及预防组和治疗组血清总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇含量(P＜0.01),同时改善肝脏脂化程度.2)苜蓿皂苷预防组和治疗组CYP7 A1和LDL-R的蛋白和mRNA表达量极显著高于高脂模型组(P＜0.01).结果提示,苜蓿皂苷通过促进肝脏CYP7A1和LDL-R的表达,增强肝脏胆固醇的排泄,发挥其对高脂血症的预防和治疗作用.     

苜蓿皂苷对SD大鼠胆固醇代谢的影响及其分子机理的初步探讨

研究了苜蓿皂苷对SD大鼠胆固醇代谢的影响,并初步探讨其分子机理。取雄性健康SD大鼠32只,随机分为4组,分别为:正常对照组、苜蓿皂苷组、高脂模型组和高脂皂苷组,每组8只。前4周为高脂模型建立期,后4周为灌胃期,正常对照组和苜蓿皂苷组饲喂基础饲粮,其余2组饲喂高脂饲粮,苜蓿皂苷组和高脂皂苷组从第5周开始灌胃240 mg/kg苜蓿皂苷,灌胃4周。测定试验大鼠体重、肝脏系数、血脂水平、粪便和肝脏中的胆固醇、胆汁酸含量,并用实时荧光定量PCR技术检测大鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7a1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G5/三磷酸腺苷结合盒转运体G8(ABCG5/ABCG8) mRNA的表达量。结果表明,1)苜蓿皂苷显著降低高脂大鼠体重、肝脏系数;降低血清中总胆固醇含量,加速胆固醇向肝脏的聚集;增加粪便中胆固醇和胆汁酸的排出; 2)显著增加正常血脂水平大鼠粪便中胆固醇的含量,但对其体重、肝脏系数等影响不大;3)添加苜蓿皂苷后正常和高脂水平SD大鼠肝脏CYP7a1和ABCG5/ABCG8 mRNA的表达量均成倍增加。提示苜蓿皂苷能够调节SD大鼠体内胆固醇的分布,具有良好的降血脂效应,其效应可能与增加CYP7a1和ABCG5/ABCG8 mRNA表达量,加速体内胆固醇、胆汁酸排泄有关。     

苜蓿皂甙对高脂血症大鼠胆固醇代谢及肝脏ACAT-2和HMG-CoAr基因表达的影响

探讨苜蓿皂甙对高脂血症大鼠胆固醇代谢及肝脏胆固醇酰基转移酶2(ACAT-2),羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAr)基因表达的影响。取雄性健康Sprague Dawley大鼠(SD)40只,随机分为4组,分别为:正常对照组A、高脂模型组B、苜蓿皂甙预防组C和苜蓿皂甙治疗组D。除正常对照组外,其余各组均饲喂高脂饲料,其中预防组从第1周开始灌胃苜蓿皂甙,治疗组从第5周开始灌胃苜蓿皂甙,试验期8周。观察试验大鼠体重、肝脏系数、血脂水平和肝脏病理变化情况,并用酶联免疫法(ELISA)和Real-time PCR技术分别检测大鼠肝脏HMG-CoAr和ACAT-2的蛋白和mRNA表达结果。结果表明,1)苜蓿皂甙可以显著降低高脂模型大鼠体重、肝脏系数、血清TC和低密度脂蛋白(LDL-C)水平及改善肝脏脂化程度(P<0.05)。2)苜蓿皂甙预防组和治疗组ACAT-2的蛋白和mRNA表达量极显著低于模型组(P<0.01),而HMG-CoAr 的蛋白及mRNA表达水平与模型组比较则差异不显著。苜蓿皂甙通过降低肝脏ACAT-2的表达,抑制机体对外源胆固醇的吸收,发挥对高脂血症的预防和治疗作用。     

苜蓿皂苷对断奶仔猪生长性能、肠道菌群、组织抗氧化能力及相关酶mRNA表达的影响

本试验旨在研究苜蓿皂苷对断奶仔猪生长性能、肠道菌群、组织抗氧化能力及相关酶mRNA表达的影响。选取24头平均体重为8 kg的大×长杂交断奶仔猪,随机分为2组,每组3个重复,每个重复4头猪。对照组饲喂基础饲粮,苜蓿皂苷组饲喂在基础饲粮中添加0.25%苜蓿皂苷的饲粮。预试期10 d,正试期30 d。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加苜蓿皂苷可显著提高断奶仔猪平均日增重(P0.05),并显著降低料重比(P0.05)。2)与对照组相比,饲粮中添加苜蓿皂苷可显著降低仔猪十二指肠和盲肠的pH(P0.05),显著提高十二指肠、空肠和回肠中乳酸菌数量(P0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加苜蓿皂苷可显著提高仔猪肝脏和肾脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性(P0.05),并显著提高仔猪肝脏和空肠中GSH-Px mRNA表达量及十二指肠和回肠中CAT mRNA表达量(P0.05)。综上,苜蓿皂苷可以提高断奶仔猪生长性能,增强其组织抗氧化能力并有效改善其肠道菌群。     

苜蓿皂苷对高脂血症大鼠胆固醇代谢及其相关基因表达的影响

本文旨在探讨苜蓿皂苷对高脂血症大鼠胆固醇代谢及肝脏组织中胆固醇 ７α－羟化酶（ＣＹＰ７Ａ１）、低密度脂蛋白受体（ＬＤＬ-Ｒ）基因表达的影响。取雄性健康 ＳＤ大鼠 ４０只,随机分为 ４组,分别为：正常对照组、高脂模型组、苜蓿皂苷预防组和苜蓿皂苷治疗组,每组 １０只。正常对照组饲喂基础饲粮,其余 ３组均饲喂高脂饲粮,其中苜蓿皂苷预防组从第 １周开始灌胃２４０ｍｇ／ｋｇ苜蓿皂苷,苜蓿皂苷治疗组从第 ５周开始灌胃 ２４０ｍｇ／ｋｇ苜蓿皂苷,试验期共 ８周。测定试验大鼠体重、肝脏系数、血脂水平和肝脏病理变化情况,并采用酶联免疫法和实时荧光定量 ＰＣＲ技术分别检测大鼠肝脏 ＣＹＰ７Ａ１和 ＬＤＬ-Ｒ的蛋白和 ｍＲＮＡ表达结果。结果表明：１）和高脂模型组相比,苜蓿皂苷极显著降低预防组大鼠体重及预防组和治疗组血清总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇含量（Ｐ＜０．０１）,同时改善肝脏脂化程度。２）苜蓿皂苷预防组和治疗组ＣＹＰ７Ａ１和 ＬＤＬ-Ｒ的蛋白和 ｍＲＮＡ表达量极显著高于高脂模型组（Ｐ＜０．０１）。结果提示,苜蓿皂苷通过促进肝脏 ＣＹＰ７Ａ１和 ＬＤＬ-Ｒ的表达,增强肝脏胆固醇的排泄,发挥其对高脂血症的预防和治疗作用。     

猪肾细胞(PK15细胞)ABCA1基因与miRNA-758关系的研究

为了研究猪肾细胞(PK15细胞)中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)mRNA与miRNA-758表达量之间的关系,试验利用miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照分别转染PK15细胞,利用Real-time qPCR技术检测转染24 h后细胞内ABCA1 mRNA与miR-758相对表达量并讨论其之间的关系。结果表明:在PK15细胞中转染miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照后,ABCA1 mRNA表达量均极显著升高(P0.01)。转染miR-758模拟物的PK15细胞miRNA-758表达量高于对照组30 000多倍,差异极显著(P0.01);而其他转染组miR-758表达量均低于对照组,但差异不显著(P0.05)。说明miR-758模拟物、miR-758抑制物及其各自的阴性对照均可导致PK15细胞内ABCA1 mRNA表达量升高;miR-758模拟物可促进PK15细胞miR-758表达量上升30 000多倍,而对ABCA1 mRNA表达量并未表现出抑制作用,PK15细胞中ABCA1mRNA的表达量不受miR-758模拟物影响或受影响小;miR-758抑制物确实能够抑制miR-758表达量,并使ABCA1 mRNA表达量升高。     

不同精粗比对犊牛组织中PepT1和PHT1及PHT2表达的影响

研究不同精粗比全价颗粒饲料对犊牛不同组织中PepT1、PHT2和PHT1 mRNA表达的影响。试验选取日龄相近、体重相近的中国荷斯坦断奶公犊牛12头,分为4组,每组3头,各试验组精粗比分别为75:25(Ⅰ)、70:30(Ⅱ)、65:35(Ⅲ)和60:40(Ⅳ),预试期14 d,正试期56 d。结果表明:脾脏中PHT1mRNA表达量最高,肺中的PHT2mRNA表迭量最高,瘤胃中的PepT1mRNA表达量最高,而它们在心脏中表达量均最低;试验Ⅰ和Ⅱ组肝脏、皱胃、瓣胃和瘤胃中的PHT1 mRNA表达量极显著高于试验Ⅳ组(P0.01),而试验Ⅲ组网胃的PHT1 mRNA表达量极显著高于其他各组(P0.01);试验Ⅲ组犊牛肝脏和网胃以及试验Ⅱ组皱胃中PHT2 mRNA表达量极显著高于其他各组(P0.01),试验Ⅰ和Ⅳ组瘤胃和瓣胃中PHT2 mRNA表达量极显著高于其他2组(P0.01);试验Ⅳ组犊牛肝脏中Pep T1 mRNA表达量极显著高于其他各组(P0.01),试验Ⅰ组瘤胃、网胃和瓣胃中PepT1 mRNA表达量极显著高于试验Ⅲ和Ⅳ组(P0.01)。结果表明,不同精粗比全价颗粒饲料对不同组织的PepT1、PHT1和PHT2表达具有一定的影响作用,其中高精粗料促进其表达。     

高脂饲粮和高碳水化合物饲粮对大鼠脂肪代谢的影响

本试验旨在以相同代谢能水平为基础,研究高脂饲粮和高碳水化合物饲粮对大鼠脂肪代谢的影响。选取48只8周龄雄性SD大鼠,随机分为3组,每组8个重复,每个重复2只。3个组分别饲喂高脂饲粮(HF组)、高碳水化合物饲粮(HC组)和对照饲粮(CON组),试验期9周。结果表明:1)与CON组相比,HF组、HC组大鼠的初重、末重、日增重均无显著差异(P0.05),日采食量极显著降低(P0.01),饲料转化效率极显著升高(P0.01)。2)各组大鼠的Lee’s指数、肾脏指数、胃指数、脾脏指数、肝脏指数无显著差异(P0.05)。3)与CON组和HF组相比,HC组大鼠血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇含量显著或极显著升高(P0.05或P0.01);与HC组和CON组相比,HF组大鼠血清葡萄糖含量极显著增加(P0.01),血清尿素氮含量极显著降低(P0.01)。与CON组相比,HF组和HC组大鼠肝脏甘油三酯含量极显著升高(P0.01),HF组大鼠肝脏总胆固醇含量极显著升高(P0.01)。4)与CON组相比,HF组和HC组大鼠肝脏磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)mRNA表达量极显著增加(P0.01);与CON组和HC组相比,HF组大鼠肝脏胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA表达量极显著增加(P0.01)。综上所述,相同代谢能水平下,HF组和HC组大鼠体重无显著增加。HC组大鼠血脂升高;HF组大鼠血清葡萄糖、肝脏总胆固醇含量升高,血清尿素氮含量下降。HF组和HC组大鼠肝脏甘油三酯含量升高,且通过肝脏PEPCK和SREBP1基因表达调控途径影响脂肪代谢     

爱拔益加肉鸡和北京油鸡脂肪代谢及其相关基因表达的比较研究

为了探讨引起爱拔益加(AA)肉鸡和北京油鸡脂肪沉积表观差异的内在因素,本研究比较了AA肉鸡(56日龄)与北京油鸡(56日龄和114日龄)的体脂沉积、血脂代谢、脂肪细胞因子浓度、脂肪代谢相关酶活性以及相关基因mRNA的表达量.试验选用1日龄AA肉鸡60只和北京油鸡120只,分别随机分为6个重复.结果表明,56日龄AA肉鸡腹脂率高于同日龄的北京油鸡(P<0.05),但是低于114日龄的北京油鸡(P<0.05).56日龄从肉鸡血浆总甘油三酯、游离脂肪酸和脂联素浓度,血浆脂蛋白酯酶和肝脏苹果酸脱氢酶活性均低于56日龄和114日龄北京油鸡(P<0.05).56日龄AA肉鸡肝脏载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)基因mRNA表达量高于56日龄和114日龄北京油鸡(P<0.05),脂联素基因mRNA表达量高于114日龄北京油鸡(P<0.05).56日龄AA肉鸡腹脂中的甘油三酯脂酶(ATGL)基因和心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因mRNA表达量高于114日龄的北京油鸡(P<0.05),脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因mRNA表达量低于114日龄北京油鸡(P<0.05);56日龄AA肉鸡腹脂过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因mRNA表达量低于56日龄北京油鸡(P<0.05).腹脂A-FABP基因mRNA表达量与腹脂率显著正相关(P<0.05);腹脂ATOL基因、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因、肝脏apoA-Ⅰ基因和脂联素基因mRNA表达量均与腹脂H-FABP基因mRNA表达量显著正相关(P<0.05).结果提示:北京油鸡血浆脂蛋白酯酶和肝脏苹果酸脱氢酶活性高于AA肉鸡,从而导致较高的血浆总甘油三酯和游离脂肪酸浓度,这可能是北京油鸡脂肪沉积较高的内在因素之一.A-FABP基因是造成2个品种腹脂沉积量差异的关键基因,H-FABP基因是脂类代谢通路上的关键基因.     

日粮精氨酸水平对生长肉兔氮代谢及肝脏胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)基因表达的影响

探讨日粮精氨酸水平对断奶～2月龄生长肉兔氮代谢和肝脏胰岛素样生长因子( IGF-Ⅰ)基因表达的影响.选用断奶肉兔100只,随机分成5组,在基础日粮中添加不同水平的精氨酸(0、0.2％、0.4％、0.6％和0.8％),预试期7d,正试期23 d.结果表明:日粮中不同水平精氨酸对生长肉兔的尿氮水平影响显著(P值为0.016 7),各添加组的尿氮含量显著低于不添加组(P＜0.05),日粮不同水平精氨酸对其它氮代谢指标均无显著影响(P＞0.05).采用实时荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ荧光染料法对家兔肝脏细胞中IGF-Ⅰ基因的表达水平进行了相对定量分析,结果表明:日粮不同精氨酸水平显著影响肝脏IGF-Ⅰ mRNA表达量(P值为0.018 2),并且添加精氨酸组IGF-Ⅰ mRNA表达量明显高于不添加组 (P＜0.05),各添加组之间差异不显著(P＞0.05).     

两种高脂高糖乳脂配方复制高脂血症大鼠模型的比较

比较两种高脂乳脂配方复制高脂血症模型大鼠的血脂、肝重及肝病理的变化,为高血脂症的预防、治疗以及研究选择合适的动物造模方法。比较两次试验中,正常对照1组和高脂高糖乳剂1组、正常对照2组和高脂高糖乳剂2组SD大鼠,10只/组,按10mL/kg分别给予相应的高脂高糖乳剂连续造模40d,正常对照组则给予等量纯净水,分别于造模前、造模10d、造模40d时测定大鼠体重、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)含量及HDLC/TC比值,并测定肝脏重量以及肝脏病理组织学的变化。结果显示,与相应的正常对照组比较,第一次试验中的高脂高糖乳脂1配方造模40d,可使血脂含量升高,肝脏细胞脂肪变性,第二次试验中的高脂高糖乳脂2配方造模40d,只能使血脂含量升高,未见肝细胞脂肪变性。与高脂高糖乳脂1组相比,高脂高糖乳脂2组造模40d体重下降幅度较小(P0.05),TC、TG、LDLC含量升高幅度较少(P0.05),HDLC/TC比值降低幅度较少(P0.05),肝脏重量增大幅度较大(P0.05),肝脏系数增大幅度较少(P0.05),肝脏未产生肝细胞脂肪变性。结果表明,第一次试验中的高脂高糖乳剂1配方可以制作混合型高脂血症伴脂肪肝大鼠模型,第二次试验中的高脂高糖乳脂2配方可以制作混合型高脂血症大鼠模型。     

甘氨酸对脂多糖刺激仔猪肝脏能量代谢及相关基因表达的调控作用

本试验旨在研究甘氨酸(Gly)对脂多糖(LPS)刺激断奶仔猪肝脏能量代谢、能量代谢关键酶和相关调节因子mRNA表达的调控作用。选取24头杜×长×大仔猪,分成4个组,每组6个重复。4个组分别为:1)对照组(基础饲粮);2)LPS组(LPS+基础饲粮);3)1.0%Gly组(LPS+基础饲粮+1.0%Gly);4)2.0%Gly组(LPS+基础饲粮+2.0%Gly)。试验第28天,试验组仔猪腹膜注射100μg/kg BW的LPS,对照组注射等量的生理盐水。试验猪于注射LPS或生理盐水4 h后屠宰,取肝脏样品待测。结果表明:1)与LPS组相比,1.0%Gly显著提高了仔猪肝脏三磷酸腺苷(ATP)浓度和能荷(EC)水平(P0.05),显著降低了一磷酸腺苷(AMP)/ATP值(P0.05),并有降低AMP浓度的趋势(P0.10);2.0%Gly有降低AMP/ATP值的趋势(P0.10)。2)与LPS组相比,1.0%Gly显著降低了仔猪肝脏己糖激酶2(Hexok2)和柠檬酸合成酶(CS)的mRNA表达量(P0.05);2.0%Gly显著降低了肝脏Hexok2和丙酮酸激酶(PK)的mRNA表达量(P0.05),并有降低肝脏CS mRNA表达量的趋势(P0.10)。3)与LPS组相比,1.0%Gly显著提高了仔猪肝脏腺甘酸活化蛋白激酶α1(AMPKα1)的mRNA表达量(P0.05)。综上所述,饲粮中添加Gly能够改善LPS刺激引起的断奶仔猪肝脏能量代谢紊乱,调控糖酵解和三羧酸循环等代谢途径中相关酶的表达。     

白藜芦醇对氧化应激仔猪肝脏抗氧化酶、细胞因子mRNA表达及核因子E2相关因子2相关因子信号通路的影响

本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对敌草快(diquat)诱导的氧化应激仔猪肝脏抗氧化、抗炎性能的影响。选用健康断奶仔猪30头,随机分为5组,对照组(CON组)和diquat组(DIQ组)饲喂基础饲粮,试验组(RES-10组、RES-30组、RES-90组)饲喂在基础饲粮中分别添加10、30、90 mg/kg RES的试验饲粮。于试验第15天清晨给DIQ组、RES-10组、RES-30组、RES-90组仔猪按照10 mg/kg BW剂量腹腔注射diquat建立氧化应激模型,CON组注射相同剂量灭菌生理盐水。试验期21 d。结果表明:与CON组相比,DIQ组肝脏超氧化物歧化酶1(SOD1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶-1(GPX-1)的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05);肝脏白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),而白细胞介素-10(IL-10)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);肝脏Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),核因子E2相关因子2(Nrf2)和醌氧化还原酶1(NQO1)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);肝脏Keap1和Nrf2蛋白表达量分别上升和下降,NQO1的蛋白表达量则呈现显著下降(P<0.05)。与DIQ组相比,RES-10组、RES-30组、RES-90组肝脏SOD1、SOD2、CAT、GPX-1的mRNA相对表达量均显著上调(P <0.05);RES-30组、RES-90组肝脏TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达量均显著下调(P<0.05),同时肝脏IL-10的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),且RES-90组效果最显著;RES-10组、RES-30组、RES-90组肝脏Keap1的mRNA相对表达量均显著下调(P<0.05),同时肝脏Nrf2、NQO1的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),且RES-90组效果最优;肝脏Keap1蛋白表达量在RES-90组显著下降(P<0.05),Nrf2蛋白表达量在RES-90组有上升的趋势(P=0.057)。综上所述,RES可以提高氧化应激仔猪肝脏抗氧化、抗炎性能,降低肝脏氧化应激程度,其发挥抗氧化机制可能与Nrf2信号通路有关。     

不同硒浓度日粮对小鼠肝脏和睾丸组织中部分硒蛋白mRNA水平的影响

选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8 mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)的mRNA相对表达量明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),且Ⅱ、Ⅲ组在肝脏中差异显著(P<0.05),在睾丸中差异不显著(P>0.05);③Ⅰ、Ⅲ组肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),但均显著低于Ⅱ组(P<0.05),而各试验组间在睾丸中差异均不显著(P>0.05);④随着日粮中硒添加量的增加,肝脏和睾丸中硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase 2,TrxR2)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。因此,在肝脏和睾丸组织中,饲喂低硒饲料能显著降低硒的沉积量和GPx1、GPx4、TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05);而饲喂高硒饲料能显著降低GPx1的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著增加TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05)。提示,硒对GPx1、GPx4和TrxR2 mRNA相对表达量的调节存在组织差异性。     

过氧化氢诱导BRL细胞凋亡损伤模型的建立

动物冷应激过程中肝脏因发生氧化应激而受损。本试验采用过氧化氢(H2O2)诱导buffalo大鼠肝细胞(BRL)凋亡,建立体外氧化应激的凋亡损伤模型,为深入研究冷应激对肝脏损伤的机理奠定基础。试验采用不同浓度H2O2刺激BRL细胞2h,运用WST-1法检测细胞生长活力、Annexin-V/FITC-PI双染技术检测细胞凋亡率及Western blot方法检测Caspase-3的表达量来筛选BRL细胞凋亡的H2O2作用浓度。结果显示,与空白对照组相比,150μmol/L H2O2作用后,细胞增殖率明显下降,Caspase-3的蛋白表达量增加,流式细胞仪检测的凋亡率升高,同时细胞坏死较其他H2O2处理组低。结果表明,150μmol/L H2O2作用BRL细胞2h可模拟氧化应激造成的凋亡损伤。     

TCDCA对大鼠脂肪代谢及其相关受体FXR表达量的影响

为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对大鼠脂肪代谢相关受体FXR表达量的影响,初步分析TCDCA对脂肪代谢的调节作用。将36只雄性Wistar大鼠,随机分成4组:阴性对照组、低剂量组(3mg/kg)、中剂量组(9 mg/kg)及高剂量组(27mg/kg),给药持续21d后,收集肝脏。采用HE染色和免疫组化方法检测FXR是否在大鼠肝脏组织中的表达及其表达位置,以及TCDCA对大鼠肝脏组织结构的影响;采用qPCR和Western blot的方法测定大鼠肝脏FXR mRNA以及相应蛋白的表达量。结果表明,阴性对照组与TCDCA各给药组大鼠肝脏细胞核上的FXR均有表达,但TCDCA处理组的表达量明显高于阴性对照组;TCDCA对大鼠肝脏组织结构物无显著影响;低剂量组大鼠肝脏中FXR mRNA表达量极显著高于阴性对照组(P0.01),低剂量组FXR蛋白表达量显著高于阴性对照组(P0.05)。TCDCA对大鼠脂肪代谢相关受体FXR的表达量呈上调作用。     

谷氨酰胺对过氧化氢诱导氧化应激人结肠癌HT-29细胞损伤和凋亡的影响

本试验旨在通过研究谷氨酰胺对过氧化氢(H_2O_2)诱导氧化应激人结肠癌HT-29细胞损伤和凋亡的影响,阐明谷氨酰胺的抗氧化效果和作用机理。HT-29细胞经不同浓度[0(对照组)、0.5、2.0、10.0 mmol/L]谷氨酰胺和0.35 mmol/L H_2O_2分别处理12、24、32 h后,测定细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并采用荧光定量PCR方法分析谷氨酰胺对H_2O_2诱导的细胞凋亡相关基因的mRNA相对表达量,以及采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法对HT-29细胞染色,并用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果表明:1)处理24 h后,0.5、2.0 mmol/L Gln组SOD活性显著高于对照组(P0.05);处理32 h后,0.5、2.0 mmol/L Gln组SOD活性显著高于对照组(P0.05),MDA含量显著低于对照组(P0.05)。2)处理12 h后,各组天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)mRNA相对表达量无显著差异(P0.05)。与对照组比较,0.5 mmol/L Gln组核转录因子κB(NF-κB)mRNA相对表达量显著降低(P0.05),0.5与2.0 mmol/L Gln组B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA相对表达量显著提高(P0.05)。处理24 h后,与对照组比较,0.5、2.0和10.0 mmol/L Gln组Caspase-3、NF-κB和Bax mRNA相对表达量均显著降低(P0.05),Bcl-2mRNA相对表达量显著升高(P0.05)。处理32 h后,与对照组比较,2.0 mmol/L Gln组细胞表面诱导凋亡分子(FAS)、Caspase-3、NF-κB、Bax mRNA相对表达量均显著降低(P0.05),Bcl-2mRNA相对表达量显著升高(P0.05);10.0 mmol/L Gln组FAS、Caspase-3、NF-κB、Bax mRNA相对表达量均显著升高(P0.05)。3)处理24 h后,与对照组比较,Gln处理使活细胞数量提高了5.32%~11.97%,坏死细胞数量降低了6.75%~12.66%。处理32 h后,与对照组比较,Gln处理使活细胞数量提高了1.39%~7.63%,坏死细胞数量降低了3.40%~4.57%。由此可见,谷氨酰胺可抑制氧化应激反应,降低H_2O_2诱导的HT-29细胞凋亡。     

铁过量或缺乏对新生仔猪血清生化指标及肝脏hepcidin mRNA表达量的影响

本试验旨在研究铁过量或缺乏对新生仔猪血清生化指标及肝脏hepcidin mRNA表达量的影响.挑选新出生的“杜长大”三元杂交仔猪15头[平均体重为(1.22±0.13)kg],随机分为3组,即缺铁组、正常组和铁过量组,每组5个重复,每个重复1头猪.3和7日龄时,缺铁组分别注射1 mL生理盐水,正常组分别注射1 mL右旋糖酐铁(含铁150 mg),铁过量组分别注射3 mL右旋糖酐铁(含铁450 mg).7日龄时,将所有仔猪全部处死,采集血清,并分离肝脏和脾脏,以测定血清生化指标、机体铁含量和肝脏hepcidin mRNA表达量.结果表明:肝脏、脾脏和血清中铁的含量均随着注射铁量的增加而显著或极显著增加(P ＜0.05或P＜0.01).与正常组相比,铁过量组血清中血红蛋白、球蛋白、总蛋白、丙二醛含量以及谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物酶活性显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01),超氧化物歧化酶活性显著降低(P＜0.05);而缺铁组血清中血红蛋白、球蛋白、总蛋白、丙二醛含量以及谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化物酶活性则显著或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),超氧化物歧化酶活性显著升高(P＜0.05).与正常组相比,铁过量组仔猪肝脏中hepcidin mRNA表达量极显著升高(P＜0.01),而缺铁组则极显著降低(P＜0.01).由此得出,铁过量或缺乏均会影响新生仔猪机体的免疫功能和抗氧化功能;铁过量可提高新生仔猪机体铁含量和肝脏中hepcidin mRNA表达量,铁缺乏则会降低新生仔猪机体铁含量和肝脏中hepcidin mRNA表达量.     

黄芩苷黄芩素小檗碱对LLC-PK1细胞炎症模型中TNF-α IL-1β及IL-6表达的影响

研究中药黄芩苷、黄芩素、小檗碱对细菌脂多糖(LPS)诱导的猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)中肿瘤坏死因子-α(TNG-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。用噻唑蓝比色法(MTT法)筛选LPS、黄芩苷、黄芩素和小檗碱对细胞作用的最佳浓度,用RT-PCR检测TNF-α、IL-1βmRNA表达,以确定细胞炎症模型是否建立成功;炎症模型建立后,用最佳浓度的黄芩苷、黄芩素和小檗碱分别作用细胞24h,用qPCR检测TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的表达量。结果LPS刺激组细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达量极显著高于正常对照组(P0.01),黄芩苷、黄芩素和小檗碱作用组细胞TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA表达量比LPS刺激组显著降低(P0.05),与对照组无显著差异(P0.05)。上述结果表明,黄芩苷、黄芩素和小檗碱通过抑制炎症细胞TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA的表达,从而发挥抗炎作用。