家兔实验性肝坏死血清γ—谷氨酰转移酶及其同工酶的变化

对CCl_4所致家兔实验性肝坏死前后血清γ—谷氨酰转移酶(γ—GT,E·C·2·3·2·2)活性进行了测定,并作了其同工酶的电泳分析。结果。注射CCl_4后24、48、72和96h血消γ—GT活性均增高,经电泳后,该血清出现两诺带—同工酶(γ一GT_a和γ一GT_b),新谱带(γ-GT_b)来自肝脏。由此认为,γ-GT同工酶的分析对肝脏疾病的诊断具有一定的特异性。     

华支睾吸虫γ-谷氨酰转移酶7基因的原核表达及反应原性分析

γ-谷氨酰转移酶7(GGT7)是华支睾吸虫生长发育的各个时期都存在且高表达的蛋白,为探索其作为诊断抗原的潜能,依据GenBank中华支睾吸虫GGT7基因序列,设计了特异性引物,并构建了 pET-32a-GGT7重组表达质粒转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞中,进行蛋白表达和反应原性分析.生物分子信息学分析显...     

华支睾吸虫感染FVB小鼠的试验研究

为了观察华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏组织病理变化,将12只健康雌性FVB小鼠随机分成2组,分别为正常组与感染组,每组6只。感染组小鼠经口灌饲45个华支睾吸虫囊蚴。于感染后25d用NaOH消化法检测粪便虫卵阳性率,感染后第112天收集肝脏组织,进行HE染色及Masson染色观察肝脏病理变化情况;收集外周血,ELISA检测血清中华支睾吸虫特异性IgG抗体。虫卵检查结果显示,感染组小鼠在感染后25d检查到虫卵,肉眼观察小鼠肝小叶边缘有白色结节样病变,肝脏表面有白色透明水泡。感染组小鼠血清中华支睾吸虫特异性IgG水平显著高于正常组(P0.01)。HE染色观察小鼠肝脏组织,见到虫体,炎症细胞浸润严重,纤维化明显并伴有点状坏死。肝细胞肿胀,肝窦狭窄,胆管扩张增生显著,胆管上皮细胞水肿、坏死,部分胆管上皮细胞胞浆均质红染。Masson染色显示肝脏组织尤其是虫体周围出现大面积纤维化。试验结果表明,华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏病变严重,因此可利用该品系小鼠建立华支睾吸虫感染模型,为深入研究华支睾吸虫的致病机制奠定基础。     

鱼源性人兽共患吸虫囊蚴感染的季节性分析

为了解齐齐哈尔地区淡水鱼人兽共患吸虫囊蚴感染的季节性差异,笔者自2017年3月份—2018年3月份,每月月初从各个市场及江边售卖点等购买淡水麦穗鱼807尾,采用直接压片法和人工消化法分离鱼肉中的吸虫囊蚴,采取形态学方法对吸虫囊蚴种类进行鉴定,并且对感染囊蚴的种类和感染率进行统计及分析。结果表明:此次调查共检出人兽共患吸虫囊蚴两种,分别为华支睾吸虫囊蚴和东方次睾吸虫囊蚴,其中华支睾吸虫囊蚴感染率为44.73%(361/807),东方次睾吸虫囊蚴感染率为32.59%(263/807)。华支睾吸虫囊蚴和东方次睾吸虫囊蚴感染差异有统计学意义(P0.05);华支睾吸虫囊蚴感染率和东方次睾吸虫囊蚴感染率四季差异有统计学意义(P0.05)。华支睾吸虫囊蚴一年四季都有不同程度的感染,在8—11月份感染达到高峰,感染强度最大为每克鱼肉含150个囊蚴;东方次睾吸虫囊蚴在9—10月份期间感染最为严重,感染强度最大为每克鱼肉含100个囊蚴。     

华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定

构建华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础,也为进一步研究华支睾吸虫后囊蚴感染宿主的信号传导机制、探究其致病机理提供新的起点。从中国东北疫区（镇赉县）麦穗鱼肉里分离收集华支睾吸虫囊蚴,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,加EcoRⅠ接头,经XhoⅠ酶切,用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后,与载体λZAP Express连接,Gigapack III Gold包装蛋白体外包装,构建华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库。结果表明,构建的华支睾囊蚴cDNA表达文库的库容量为9.15×10⁵ PFU,重组率为99.5%,扩增后文库滴度为1.6×10¹⁰PFU/mL。成功构建了一高质量的华支睾吸虫后囊蚴cDNA表达文库。     

氟中毒对家蚕幼虫血淋巴中γ-谷氨酰转肽酶活性的影响

试验测定了家蚕5龄幼虫血淋巴中γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活性和不同浓度NaF溶液添食处理对γ-GT活性的影响.结果表明,血淋巴中γ-GT的活性在5龄中期活性最强,龄初和龄末活性较弱.NaF溶液添食后γ-GT的活性明显增强,NaF溶液浓度越高,酶的活性越强.     

氟中毒对家蚕幼虫血淋巴中γ-谷氨酰转肽酶活性的影响

本试验测定了家蚕5龄幼虫血淋巴中γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活性和不同浓度NaF溶液添食处理对γ-GT活性的影响.结果表明,血淋巴中γ-GT的活性在5龄中期活性最强,龄初和龄末活性较弱.NaF溶液添食后γ-GT的活性明显增强,NaF溶液浓度越高,酶的活性越强.     

粪便中华支睾吸虫虫卵DNA的提取及PCR检测方法的优化

华支睾吸虫病又称肝吸虫病,是由华支睾吸虫寄生在人或多种动物胆管内所引起的一种人兽共患病.目前,华支睾吸虫的分离鉴定主要集中在成虫或囊蚴,对虫卵的研究甚少.采用分子生物学方法成功建立了感染人粪便中华支睾吸虫虫卵DNA的提取方法及华支睾吸虫基因片段PCR检测方法,同时对PCR反应条件进行优化,为从分子水平上检测华支睾吸虫虫卵提供科学依据.     

河南省宠物猫华支睾吸虫和其他肠道寄生虫感染状况分析

旨在了解宠物猫肠道寄生虫(特别是华支睾吸虫)的感染情况并分析其相关影响因素及临床表现，通过离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法对河南省11个地区898份宠物猫粪便样品进行显微镜检查，结果显示，总感染率为10.58%(95/898)。在95份阳性样本中，优势虫种为球虫(49.47%)和华支睾吸虫(29.47%),其次为钩口线虫(16.84%)、芽囊原虫(7.37%)、贾第虫(3.16%)和蛔虫(3.16%)。总体来看，肠道寄生虫在焦作地区、6月龄及以下、未驱虫、未免疫和出现腹泻症状的宠物猫中检出率更高。除与性别因素无关外(P>0.05),年龄、驱虫情况、免疫情况等因素均显著影响宠物猫华支睾吸虫的感染率，同时发现宠物猫的腹泻情况也与华支睾吸虫的感染率有显著相关性。临床症状分析表明，华支睾吸虫感染的宠物猫比其他寄生虫感染的宠物猫更消瘦(P<0.001)。综上所述，河南省宠物猫主人今后应重视对幼猫的科学饲喂、做好定期免疫和驱虫，以降低肠道寄生虫的危害及人兽共患华支睾吸虫病的传播风险。     

华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选

为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因,首先利用λZAP栽体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库:即从我国东北疫区(镇赉县)家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,用CHROMA SPIN-400柱离心层析纯化后,与栽体λZAP Express连接,体外包装后成功获得我国东北疫区华支睾吸虫成虫cDNA表达文库.文库容量为1.5×106pfu,重组率为99%,插入片段长度在0.4～2.0 kb之阀,扩增文库的滴度为1.5×1010pfu/mL.然后利用免疫学方法对该cDNA表达文库进行筛选:以自然感染华支睾吸虫的人血清为抗体探针,从2.0×105个重组噬菌体筛选强反应原性抗原基因,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析.共获得41个阳性克隆,测序结果分析表明,这些cDNAs根据其编码的蛋白可分为以下几种,即与来自华支睾吸虫的甘氨酸-2、脯氨酸-2及Cs44抗原高同源的基因及分别与来自Nematostella vectensis的未知蛋白、转录延伸因子及果蝇CG3446基因编码蛋白较低同源性的基因.本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定了理论基础和实验依据.     

华支睾吸虫病流行病学研究进展

华支睾吸虫病(Clonorchiasis)是由华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)寄生于人和动物肝胆管内引起的以肝胆病变为主的一种重要的人畜共患寄生虫病,病原体为中华支睾吸虫,简称华支睾吸虫病[1].     

东北地区华支睾吸虫ITS1基因序列分析

为研究我国东北地区华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)ITS1基因的变异情况及多态性,本研究以采自宾县、大庆、海伦、双城、泰来、同江和长春7个地区的华支睾吸虫为研究对象,PCR扩增ITS1基因,并与GenBank登录的麝猫后睾吸虫、猫后睾属吸虫、东方次睾吸虫、广西株华支睾吸虫、沈阳株华支睾吸虫和韩国株华支睾吸虫的ITS1基因进行比对分析.结果表明,各地区华支睾吸虫样品ITS1基因大小均为661bp,同源性在99.4%～100%之间.构建的系统发生树显示,分支情况与地区距离呈正相关,广西株与其它地区华支睾吸虫所属分支相隔较远,韩国株与东北地区各株相隔较近,海伦株与泰来株,大庆株与沈阳株,长春株与同江株,双城株与宾县株分别位于同一分支.结果显示,ITS1片段除了可作为遗传标记用以鉴定华支睾吸虫科内属间遗传关系,还可以区分属下种间的遗传关系.     

肇源县淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况的调查及分析

为了解肇源县常见淡水鱼华支睾吸虫囊蚴的感染情况,试验采用直接压片法和消化法对肇源县12种常见淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况进行了调查。结果表明:在调查的510尾淡水鱼中,检出阳性鱼186条,感染率为36.47%,其中麦穗鱼、柳根鱼和船丁鱼的感染率分别为92.45%(98/106)、78.95%(15/19)和52.00%(13/25),未在鲈塘鳢、黄颡鱼和泥鳅体内检出华支睾吸虫囊蚴;麦穗鱼的感染强度最高,达到88个/g。说明肇源县淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染率高、感染强度大,在该地区生食或吃未煮熟的淡水鱼感染华支睾吸虫的风险较高。     

山东省聊城地区野生淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况调查

旨在了解聊城地区野生淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴情况,为防治工作提供理论依据。从聊城地区徒骇河中采集鲫鱼、麦穗鱼、白鱼、洛氏鱥、鳑鲏鱼5种野生淡水鱼共计693尾,采用直接压片法和消化法分别检查华支睾吸虫囊蚴的感染率、感染强度,并用豚鼠感染的方法证实鱼体内所染虫种。结果发现5种淡水鱼全部感染华支睾吸虫囊蚴,总感染率为41.13%(285/693),以麦穗鱼的感染率最高为58.88%(136/231),洛氏鱥最低为6.87%(9/131),单尾感染强度最高为鲈塘鳢(784个/尾),单尾感染强度最底为洛氏鱥(5个/尾),鱼背部肌肉感染率最高为100%,其次为腹部肌肉38.25%、鱼鳃为5.97%。聊城地区野生淡水鱼华支睾吸虫囊蚴的感染情况较为严重,应加强宣传和防治工作,以保护人体的健康。     

谷氨酰胺和牛磺酸对断奶仔猪肠道粘膜酶活性的影响

研究甘氨酰谷氨酰胺和牛磺酸对早期断奶仔猪小肠粘膜中不同肠段中AKP酶、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、麦芽糖酶、蔗糖酶活性的影响。结果表明:Gly-Gln组显著提高了十二指肠粘膜中的γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、麦芽糖酶活性(P0.01),碱性磷酸酶(AKP)活性(P0.05);显著提高了空肠粘膜中的AKP酶、麦芽糖酶活性(P0.01);显著提高了回肠粘膜中的麦芽糖酶活性(P0.05)。Tau组显著提高了十二指肠粘膜中的麦芽糖酶活性,空肠粘膜中的蔗糖酶(P0.01);显著提高了回肠粘膜中的γ-GT、麦芽糖酶、蔗糖酶活性(P0.05)。复配组显著提高了十二指肠粘膜中的麦芽糖酶活性(P0.01),γ-GT、蔗糖酶活性(P0.05);显著提高了空肠粘膜中的麦芽糖酶、蔗糖酶(P0.01);显著提高了回肠粘膜中的γ-GT、麦芽糖酶、蔗糖酶活性(P0.01)。     

猫华支睾吸虫病的诊断报告

<正>华支睾吸虫病是后睾科(Opisthorchiidae)、支睾属(Clonochis)的华支睾吸虫(Clonorchissinensis)寄生于肝脏、胆囊和胆管中引起的一种寄生虫病,又称肝吸虫病。华支睾吸虫可感染人、犬、猫、猪及虎、水獭、海豹等野生动物,并寄生在动物的肝胆管内,引起以肝胆病变为主的危害人类健康的人兽共患病。本病对动物体危害极大,不仅可诱发急慢性肝炎、胆囊炎、胆管炎、阻塞性黄疸等疾病,严重者可     

华支睾吸虫病在我国的流行及诊断方法研究进展

华支睾吸虫病是由华支睾吸虫引起的危害严重的鱼源性人兽共患寄生虫病,主要引起人和多种动物的肝胆病变,严重者可引起胆管上皮癌,因此华支睾吸虫被国际癌症署(IARC)归为第Ⅰ类生物性致癌因子。我国华支睾吸虫病主要流行于淡水资源丰富的地区,在我国27个省、市、自治区均有该病人体感染的报道。近年来,我国华支睾吸虫感染率呈上升趋势,且受威胁地区和人数不断增加。对该病的诊断和防控已刻不容缓,传统的病原学诊断方法存在着一定的局限性和弊端。免疫学方法和分子生物学技术的不断发展为该病的诊断提供了新的途径,今后在华支睾吸虫病的基础研究与防控中起到更加重要的作用。论文就华支睾吸虫病的流行特点及诊断方法研究进展进行综述,以期为华支睾吸虫病的研究提供参考。     

藏西北绒山羊血液γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）指标偏高原因调查

为阐明藏西北绒山羊血液γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）指标偏高原因,选取血液γ-GT指标偏高的藏西北绒山羊个体,利用电子血压计测定其血压,采用试剂盒法和肝脏穿刺等方法对其进行乙型肝炎、戊型肝炎、肝包虫病、胆结石等疾病的诊断,同时观察应激因素对其γ-GT指标的影响,研究血压、相关疾病及应激因素与藏西北绒山羊血液γ-GT指标偏高的相关性。结果表明,在血清γ-GT指标偏高的25只实验羊中,有4只血压高,有11只呈HEV-Ig G阳性,无HBV抗原阳性羊只,有12只呈肝棘球蚴（包虫）抗体阳性,有3只胆囊胆管结石,应激因素刺激后有7只羊血清γ-GT指标偏高。综上提示,戊型肝炎病毒、肝棘球蚴（包虫）所引起的肝炎、胆结石以及应激因素等是引起藏西北绒山羊血液γ-GT指标偏高的主要原因。     

冷应激蛋鸡呼吸频率、心电与血清酶活性的变化及其相互关系

采用冷束缚应激的方法建立冷应激动物模型,测定冷应激前后蛋鸡的呼吸频率、心电及5种血清酶的各项参数值.结果表明:随着冷应激时间的延长,蛋鸡心率和呼吸频率先上升后下降,冷应激3、5 h与冷应激0 h相比差异显著(P<0.05).丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)活性在冷应激后明显下降(P<0.05);γ-谷氨酸氨基转移酶(γ-GT)活性先上升后下降,冷应激1、2、3、5 h时与冷应激0 h相比差异显著(P<0.05);肌酸激酶(CK)活性呈上升趋势变化,冷应激0.5、1、2、3 h时与冷应激0 h相比差异显著(P<0.05),乳酸脱氢酶(LDH-L)活性呈上升趋势,各时间点与冷应激0 h相比无显著性差异(P>0.05);天门冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)先下降后上升,各时间点与冷应激0 h相比差异不显著(P>0.05).心率与呼吸频率、γ-GT、ALT呈强正相关;呼吸频率与γ-GT、ALT呈中等强度正相关,与AST呈中等强度负相关:γ-GT与ALT呈中等强度正相关,其余各指标之间呈弱相关.上述结果说明,冷应激对海兰褐蛋鸡呼吸频率、心率及血清酶活性有较大改变,并且所测定的各指标之间存在不同程度的相关关系.     

华支睾吸虫囊蚴SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立

为了建立一种特异且敏感的华支睾吸虫囊蚴SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，试验针对华支睾吸虫线粒体细胞色素c氧化酶亚基1(CSCOⅠ)基因设计特异性引物，筛选最佳引物浓度和退火温度，绘制标准曲线，优化扩增体系和程序建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，并评价该方法的敏感性、特异性、重复性及符合性。结果表明：最佳引物浓度为750 nmol/L,最佳退火温度为57℃。标准曲线的斜率为-3.21,截距为35.23,相关系数(R²)为0.982 3。该方法的最低检出限为1×10² copies/μL;批间和批内变异系数分别为1.53%～2.59%和0.36%～0.76%,表现出良好的重复性；仅标准阳性质粒、华支睾吸虫囊蚴及肝片吸虫出现特异性扩增曲线，具有较好的特异性；与传统压片镜检法比较符合率为96%。说明试验建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法敏感、特异、稳定，为后续开展淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴的流行病学调查提供了技术支持。