山东省猪群TTV感染情况及分子流行病学分析

为了确定Torque teno virus(TTV)在山东省猪群中是否存在及其感染情况,本研究利用套式PCR方法检测了来自山东省不同地区10个猪场的230份血液样品和组织样品。结果表明猪群中TTV1和TTV2感染总阳性率分别为45.2%和85.7%。两者的混合感染率为39.3%。用套式PCR引物扩增出TTV1和TTV2的部分片段,并将扩增出的部分基因与已报道的TTV1和TTV2病毒序列进行比较分析。分析结果显示TTV可分为TTV1和TTV2两大分支,其TTV1和TTV2与参考株相比同源性分别为88.0%～92.8%和91.9%～94.1%。本研究证实在山东省猪群中存在TTV感染,由于TTV可以感染人,其在公共卫生学方面的意义应当引起我们的重视。     

2011年～2012年中国部分地区猪细环病毒在不同猪群中的流行病学调查及其与PCV2、PPV4或PRRSV的共感染分析

为了解猪细环病毒(TTV)在无明显临床症状的猪群和不同发病猪群中的感染情况,本实验于2011年～2012年期间共采集江苏、安徽、天津、湖北、上海、浙江6个省份的无明显临床症状的母猪血清共488份,发病猪群样品352份,包括发生PMWS的猪血清及组织样品203份,发生PRRSV感染的猪群样品105份,发生流产的初产母猪血清23份,以及流产胎儿组织样品21份.对无明显临床症状的猪群进行TTV1和TTV2的病原学检测,对发病猪群样品进行TTV和PCV2、PPV4、PRRSV共感染检测,并对40条TTV1和32条TTV2的UTR部分基因分群区域进行测序和进化分析.结果显示,在488份无明显临床症状的母猪和种公猪中,猪源TTV1和TTV2感染率较高,分别为41％和67％,二者混合感染率为28％.PMWS发病猪样品中PCV2阳性率高达75％,PCV2和TTV2的混合感染高达61％.在PRRSV为阳性的病料中,TTV2的阳性率高达86％.在初产母猪和流产胎儿中,TTV1和TTV2的感染率,以及与不同病毒的混合感染率均高于健康猪群的感染率.对基因序列的进化分析表明,TTV1主要可以分为8个基因群,TTV2可以大致分为4个基因亚群.本研究为研究猪源TTV的潜在致病力以及分子进化提供了进一步的资料.     

TTV1与TTV2 SYBR-Green I实时荧光PCR检测方法的建立和应用

为建立输血性传播病毒(TTV)基因1型(TTV1)和TTV基因2型(TTV2)的检测方法,本研究根据TTV1与TTV2基因的非编码区域序列差异,设计了2对特异引物,建立了鉴别TTV1和TTV2的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法。分别进行了特异性、敏感性及重复性检验,结果表明:重组质粒建立的标准曲线相关系数为99%;可以同时鉴别检测TTV1和TTV2,检测PCV2和PRRSV阳性样品均呈阴性,表明该方法具有良好的特异性;最低检出量为10 copies/μL;重复试验结果显示,TTV1组内和组间变异系数分别为0.14%和0.74%;TTV2组内和组间变异系数均为0.13%;检测现地采集的189份样品,TTV1阳性率32.3%,TTV2阳性率6.3%,TTV1和TTV2混合感染的阳性率28.6%。TTV检测方法的建立为猪群TTV病的流行病学调查提供了有效的手段。     

2009年我国部分猪群输血传播病毒感染情况调查

为调查输血传播病毒(TTV)在我国猪群中的感染状况,本研究对2009年采自29个省市的1990份猪血清样品进行了TTV1、TTV2的双重PCR方法检测,并对结果进行了统计分析.结果表明,我国猪群中TTV总的感染率为63.37％(1261/1990),其中TTV1感染率为55.88％(1112/1990),TTV2为32.91％ (655/1990),TTV1和TTV2双重感染率为25.43％(506/1990).进而对样品的地区性分布特征、样品来源等影响因素进行分析,表明我国猪群中TTV感染率以东北地区最高,西北地区最低.样品来源不是影响感染率的关键因素.     

猪细环病毒的检测及与多种病原混合感染的调查分析

为了解细环病毒(Torque teno virus,TTV)在广西猪群中的感染情况,本研究运用Nest-PCR方法,对2009—2011年采自广西140个规模猪场的156份血液、流产胎儿及肺脏、脾脏、肾脏、肝脏、淋巴结等组织样品进行检测,并对阳性样品的非编码区(UTR)进行克隆测序及遗传进化分析;同时对部分样品进行猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、典型猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)检测及细菌的分离鉴定。结果发现,广西猪群中TTV总感染率达到93.6%,TTV2的感染率(76.9%)不仅明显高于TTV1(16.7%),且毒株间遗传变异较大。TTV多与PCV2和PRRSV混合感染,且以与PRRSV混合感染率更高(64.29%)。猪群中存在2重、3重,甚至4重TTV与其他病毒的混合感染。临床上TTV与细菌的混合感染(或细菌继发感染)以链球菌和副猪嗜血杆菌多见。本研究证实在广西猪群中存在TTV感染,且存在普遍的TTV与PRRSV、PCV2和CSFV混合感染。     

对4家猪场猪细环病毒I型的分子流行病学调查

为了解猪细环病毒Ⅰ型（TTV1）的流行情况,对莱西、城阳、胶州、莱阳四家规模化养猪场的59份血清进行了TTV1分子流行病学调查,从血清中提取病毒DNA,然后通过TTV1引物进行PCR检测样品的感染情况。检测结果表明,所检测的4家养猪场均检测到TTV1感染。其中,莱西某猪场的感染率最高,为55.2%;莱阳、城阳、胶州猪场的感染率分别为30%、10%、20%。目前TTV1不能造成直接的致病作用,但是在我国很容易与其他病原发生混合感染,导致协同致病,因此了解TTV1在猪场中的存在情况具有重要意义。     

猪圆环病毒2型与猪TTV混合感染的流行病学调查

根据GenBank_h发表的猪圆环病毒2型（Porcinecircovirustype2,PCV2）基因组序列和TTV（Torquetenovirus）1、2型的UTR序列设计合成引物,建立了分别用于检测PCV2和TTV1、TTV2的PCR及巢式PCR方法。应用建立的PCR方法对送检的广东、福建和江西等7个省份258份血液和组织样品进行了PCV2、TTV1和TTV2的检测,确定猪群中PCV2与TTV1和／或TTV2混合感染情况。结果表明,94份样品表现为PCV2和TTV1的混合感染,占样品总数的36．4％;193份样品表现为PCV2和TTV2的混合感染,占74．8％;另外,还有一些样品为三重感染,占34．5％。由此可以看出,猪群中PCV2和／或TTV1和／或TTV2的混合感染很普遍。     

猪源TTV Taqman实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用

根据TTV1和TTV2的非编码区（UTR）的保守序列分别设计并合成两套特异性引物和Taqman探针,建立了鉴别TTV1和TTV2的Taqman实时荧光定量PCR方法。通过常规PCR方法分别克隆TTV1和TTV2的非编码区（UTR）的保守序列并将其连入pMD18-T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品分别绘制标准曲线,TTV1标准曲线的相关系数为0.984,TTV2标准曲线的相关系数为0.994。检测结果显示,两种方法的灵敏度均可达10 copies/μL,除猪源TTV外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪2型圆环病毒、猪流感病毒检测结果均为阴性。该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于3%。检测采集自广西和内蒙古的44份病料,TTV1的阳性率为47.73%,TTV2阳性率为70.45%,TTV1和TTV2混合感染的阳性率为31.82%。猪源TTV检测方法的建立为该病毒的流行病学调查和定量提供了有效的手段。     

我国部分地区猪圆环病毒2型和猪细环病毒混合感染的调查

为了解猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪细环病毒(TTV)混合感染情况,用PCR方法对来自湖南、江西、广东、福建和广西五省区的193份猪组织样品进行PCV-2、TTV-1和TTV-2进行检测。结果显示,PCV-2感染率为61.1%(118/193),PCV-2和TTV-1混合感染率为32.1%(62/193),PCV-2和TTV-2混合感染率为16.9%(32/193),3种病原混合感染率为9.8%(19/193),2006年PCV-2和TTV的混合感染率最高。由此可见,目前猪群中存在PCV-2和猪TTV的混合感染,PCV-2和TTV-1型混合感染率高于和TTV-2型的混合感染率,且存在一定比例的三重感染情况。     

我国猪群中TTV的鉴定及其分子流行病学分析

为了确定Torque teno virus(TTV)在我国猪群中是否存在及其感染情况,本研究利用套式PCR方法首次检测了来自广东、福建和江西等7个省份的258份血液样品和组织样品.结果表明猪群中TTV1和TTV2感染总阳性卒分别为37.6%和82.6%.两者的混合感染率为38.4%.挑选部分阳性样品用套式PCR引物扩增出TTV1和TTV2的部分非编码区(UTR)片段,并将扩增出的部分UTR基因与已报道的TTV1和TTV2病毒UTR序列进行比较分析,同时我们选择了8份阳性样品进行了TTV1和TTV2的全长基因的扩增和克隆.分析结果显示TTV可分为TTV1和TTV2两大分支,其中我们分离获得的TTV1和TTV2之间的UTR核苷酸同源性分别为80.8%～98.5%和94.2%～100%,而与参考株相比同源性分别为82.7%～100%和95.5%～99.1%.本研究首次证实在我国猪群中存在TTV感染,提示我们对猪群感染的TTV是一个不容忽视的新病原.     

Torque Teno病毒感染研究进展

Torque Teno virus (TTV)是1997年从输血后非甲-戊型肝炎病人中分离到的新病毒,归属于圆环病毒科指环病毒属,根据基因序列差异,可分为TTV1和TTV2 两个基因型.TTV感染谱很广,已知可感染人、灵长类和家养动物.论文重点对人类、部分灵长类动物和猪的TTV感染状况进行了综述,表明这些动物均易感或有较高的阳性率.虽然目前未能证实TTV感染与人和动物的特定疾病相关联,但必须予以关注.     

PCR检测猪输血传播病毒Ⅱ型方法的建立及其应用

根据GenBank中猪源输血传播病毒Ⅱ型（Swine torque teno virus genogroupⅡ,TTVⅡ）基因序列设计并合成了1对特异性引物,扩增468bp目的片段。将PCR扩增产物测序,结果与GenBank中猪TTVⅡ型基因序列同源性为95%。利用该方法对猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪链球菌、猪多杀性巴氏杆、猪霍乱沙门菌和大肠杆菌等病原核酸进行扩增,均无条带出现,表明该方法具有较高的特异性。该方法的灵敏性试验表明,最低能检测到10.2pg核酸。利用所建立的PCR方法检测来自我国华南地区192份临床样品,阳性率为21.4%（41/192）。     

中国圈养野生动物疫苗使用调查

2005年对中国动物园协会单位中的18家动物园饲养野生动物疫苗免疫情况进行调查。受调查动物园在野生动物疫苗使用和动物种类方面具有一定的代表性。调查结果显示动物园动物现共使用18类36种疫苗,预防31种疫病。其中哺乳动物使用14类24种疫苗,预防24种疫病;禽类使用4类12种疫苗,预防7种疫病。使用范围最广的有禽流感、犬瘟热疫苗等、新城疫疫苗、猫瘟热疫苗等。共有24目58科动物接种疫苗,其中食肉动物类1目8科,食草动物类3目9科,杂食动物类2目3科,禽类18目38科。研究结果提示应加强动物园之间疫病信息交流、防疫资源的利用、疫病监测和研究,加大对动物园动物疫病的研究投入,逐步建立动物园动物统一的防疫规程。     

Comparison of in vitro and in situ methods in evaluation of forage digestibility in ruminants

The objective of this study was to compare the application of different in vitro and in situ methods in empirical and mechanistic predictions of in vivo OM digestibility (OMD) and their associations to near-infrared reflectance spectroscopy spectra for a variety of forages. Apparent in vivo OMD of silages made from alfalfa (n = 2), corn (n = 9), corn stover (n = 2), grass (n = 11), whole crops of wheat and barley (n = 8) and red clover (n = 7), and fresh alfalfa (n = 1), grass hays (n = 5), and wheat straws (n = 5) had previously been determined in sheep. Concentrations of indigestible NDF (iNDF) in all forage samples were determined by a 288-h ruminal in situ incubation. Gas production of isolated forage NDF was measured by in vitro incubations for 72 h. In vitro pepsin-cellulase OM solubility (OMS) of the forages was determined by a 2-step gravimetric digestion method. Samples were also subjected to a 2-step determination of in vitro OMD based on buffered rumen fluid and pepsin. Further, rumen fluid digestible OM was determined from a single 96-h incubation at 38°C. Digestibility of OM from the in situ and the in vitro incubations was calculated according to published empirical equations, which were either forage specific or general (1 equation for all forages) within method. Indigestible NDF was also used in a mechanistic model to predict OMD. Predictions of OMD were evaluated by residual analysis using the GLM procedure in SAS. In vitro OMS in a general prediction equation of OMD did not display a significant forage-type effect on the residuals (observed - predicted OMD; P = 0.10). Predictions of OMD within forage types were consistent between iNDF and the 2-step in vitro method based on rumen fluid. Root mean square error of OMD was least (0.032) when the prediction was based on a general forage equation of OMS. However, regenerating a simple regression for iNDF by omitting alfalfa and wheat straw reduced the root mean square error of OMD to 0.025. Indigestible NDF in a general forage equation predicted OMD without any bias (P ≥ 0.16), and root mean square error of prediction was smallest among all methods when alfalfa and wheat straw samples were excluded. Our study suggests that compared with the in vitro laboratory methods, iNDF used in forage-specific equations will improve overall predictions of forage in vivo OMD. The in vitro and in situ methods performed equally well in calibrations of iNDF or OMD by near-infrared reflectance spectroscopy.     

湖南山羊附红细胞体病的感染调查

对湖南省2个规模化山羊养殖场进行附红细胞体病的感染调查,结果表明:山羊附红细胞体总感染率为51.4%,其中A场感染率为53.4%,B场感染率为0。将镜检阳性山羊血液人工感染小白鼠,10d后小白鼠体内出现附红细胞体。