理囊散治疗卵泡囊肿不孕奶牛血清白介素与激素的相关性分析

探讨理囊散治疗卵泡囊肿不孕奶牛血液生殖激素和白介素含量关系,分析其相关性与回归方程.用ELISA法测定理囊散治疗卵泡囊肿不孕奶牛前后血清中促卵泡激素（FSH）、促黄体激素（LH）、孕激素（P）和雌二醇（E2）的浓度以及血清IL-1、IL-6含量,统计分析了4种激素和两种白介素间的相关关系与回归方程.结果表明,IL-1、IL-6与P呈正相关,与FSH、LH、E2为负相关.提示卵泡囊肿不孕奶牛血清中白介素与激素的分泌存在一定的相关性.     

理囊散治疗排卵延迟不孕奶牛血清白介素与激素的相关性分析

为探讨理囊散治疗排卵延迟不孕奶牛血液生殖激素和白介素含量关系,以及分析其之间的相关性与回归方程,通过用ELISA法测定了理囊散治疗排卵延迟不孕奶牛前后血清中促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、孕激素(P)和雌二醇(E2_)的浓度,以及测定了血清IL-1、IL-6含量,统计了4种激素和2种白介素间的相关关系与回归方程。结果表明IL-1、IL-6与P正相关;IL-1与E_2正相关,IL-6与E_2为负相关;IL-1、IL-6与FSH为负相关;IL-1、IL-6与LH负相关。由此得出排卵延迟不孕奶牛血清中白介素含量与生殖激素的分泌存在一定的相关性。     

大豆异黄酮对奶牛脾脏和肠系淋巴结淋巴细胞干扰素γ、白介素2和白介素4浓度以及雌激素受体β mRNA表达的影响

本试验旨在研究大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系淋巴结淋巴细胞增殖、活化及细胞因子分泌的影响.采用单因素试验设计,不同浓度的大豆异黄酮[0.00(对照)、0.25、1.00、5.00、25.00和100.00μg/mL]与淋巴细胞于37℃、5％CO2下分别共育4、24和48h,采用双抗夹心酶联免疫法测定培养上清液中的干扰素γ、白介素2和白介素4的浓度,用实时定量PCR法测定脾脏和肠系淋巴结的淋巴细胞中雌激素受体βmRNA表达量.结果表明:1)0.25和1.00 μg/mL的大豆异黄酮与脾脏淋巴细胞共育一定时间后均能显著或极显著提高培养上清液中干扰素γ和白介素2的浓度(P＜0.05或P＜0.01),48 h后,5.00和25.00 μg/mL大豆异黄酮能显著抑制脾脏淋巴细胞干扰素γ和白介素2分泌(P＜0.05).2)1.00和5.00 μg/mL大豆异黄酮与肠系淋巴结淋巴细胞共育一定时间后干扰素γ和白介素2浓度均显著或极显著提高(P＜0.05或P＜0.01);0.25 μg/mL大豆异黄酮趋于增加二者浓度,但差异不显著(P＜0.05);48 h后,25.00 μg/mL大豆异黄酮抑制了干扰素γ(P＜0.05)和白介素2(P＜0.05)的分泌.3)与对照组相比,试验组脾脏淋巴细胞白介素4浓度无显著变化(P＞0.05),而肠系淋巴结淋巴细胞白介素4浓度显著或极显著降低(P ＜0.05或P＜0.01).4)大豆异黄酮能够提高脾脏淋巴细胞干扰素γ/白介素4,但趋于降低肠系淋巴结淋巴细胞干扰素γ/白介素4.5)大豆异黄酮显著或极显著提高了奶牛脾脏和肠系淋巴结中淋巴细胞雌激素受体βmRNA的表达量(P＜0.05或P＜0.01),且二者间存在正比的剂量关系.总之,大豆异黄酮能够促进奶牛脾脏和肠系淋巴结中淋巴细胞分泌干扰素γ和白介素2,提高干扰素γ/白介素4,促进雌激素受体βmRNA表达,降低白介素4浓度;低剂量(0.25～5.00 μg/mL)的大豆异黄酮能够获得较好免疫促进效果,而高剂量(25.00～100.00μg/mL)更能促进雌激素受体βmRNA表达.     

鸡白介素的分子生物学和应用研究进展

白介素(IL)是鸡体内一类重要的细胞因子,在机体的免疫应答中起重要作用,近几年随着鸡白介素基因(IL-1、IL-2、IL-6、IL-15、IL-18等)相继克隆成功,其分子生物学和应用等方面的研究也逐步展开.白介素还可以作为免疫治疗剂、免疫增强剂、构建新型基因工程苗等.文章对其应用研究进行了综述,对其未来的发展进行了展望.     

板连败毒口服液解热作用及其机理研究

对板连败毒口服液(BBO)的解热作用及其可能的作用机制进行探索。48只清洁级新西兰大白兔随机分成6组(8只/组),分别为阴性对照组、阳性对照组、阳性药物组(布洛芬)、BBO低剂量组、BBO中剂量组、BBO高剂量组。阴性对照组家兔耳缘静脉注射生理盐水4mL/kg;其余各组家兔耳缘静脉注射330mL/L脱脂牛奶溶液4mL/kg建立发热模型。造模1h后,低、中、高剂量组分别灌胃给予BBO(0.6、1.2、2.5g/kg),连续3次,每次间隔1h;阳性药物组灌胃给予布洛芬水溶液(0.03g/kg)连续3次,阳性对照组与阴性对照组给予等体积灭菌生理盐水灌胃,连续3次,每次间隔1h。造模后每1h测定体温一次,连续监测5次,观察BBO对家兔发热的解热作用。监测完最后一次体温后麻醉家兔取下丘脑,ELISA检测下丘脑中与炎性发热相关因子,包括白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、环磷酸腺苷(cAMP)和前列腺素E2(PGE2)等,探讨BBO的解热机制。结果表明,BBO能够显著降低家兔体温;能够显著降低下丘脑中IL-1β、IL-6、cAMP、PGE2的含量。BBO的解热机制可能与抑制下丘脑IL-1β、IL-6、PGE2等内生致热源从而降低cAPM分泌有关。     

病毒白介素10基因研究进展

综述了常见病毒编码的白介素10(viruse interleukin,vI L-10s)功能性同源基因的起源,基因结构,蛋白结构,基因的转录组及蛋白质组表达,生物活性,和潜在的应用研究,以期有助于研究免疫相关疾病或病毒性疾病的对抗策略。     

东北民猪荷包猪抗性基因多态性及其与免疫指标的相关性研究

研究目的是检测荷包猪FUT 1和Mx1基因位点多态性及其与免疫指标的相关关系。采用PCR-RFLP技术分析基因多态性,采用ELISA方法检测免疫指标白介素-4(IL-4)、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、α-干扰素(IFN-α)的表达量。结果表明,荷包猪FUT 1基因和Mx1基因Hin6I点酶切位点上显示多态性,优势基因型分别为GG和AA型,在Mx1基因其他两位点处未发现多态性;荷包猪免疫指标IL-4、sIgA、IFN-α的表达量明显高于大白猪(P<0.05),但抗性基因型与免疫指标间的相关性表现不明显。     

鸡IL-2和IL-4融合基因真核表达质粒的构建及其表达产物的生物学活性

为提高鸡球虫病活疫苗的免疫效果并降低其副作用,本试验用合成的鸡白介素2(chIL-2)和鸡白介素4(chIL-4)基因片段构建3个融合基因真核表达质粒,并利用脂质体法将其转染至原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其表达水平,MTT法测定其表达的分泌产物活性。结果显示：成功构建的pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP、pCI-chIL-2-EGFP、 pCI-chIL-4-EGFP重组真核表达质粒能在原代鸡胚盲肠上皮细胞中高效表达;3种重组真核表达质粒转染后24～96 h的鸡脾淋巴细胞活性极显著高于空载组(P<0.01),且在72 h时达峰值;而单一因子组鸡脾淋巴细胞增殖活性极显著低于pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP组(P<0.01)。由此可见,本试验成功构建了能表达分泌chIL-2和chIL-4的融合基因重组质粒;且chIL-4-chIL-2融合蛋白生物学活性显著高于单一因子。     

猪白介素-18基因的克隆及其序列分析

通过对猪PBMC刺激诱导，提取总RNA，然后采用RT-PCR技术克隆了猪白介素-18(plL-18)基因。序列分析结果表明，克隆的plL-18基因序列与GenBank上登录的plL-18基因序列完全一致，与其他各物种的IL-18基因间具有较大的种属差异性。该基因在国内的成功克隆为IL-18的进一步研究和开发奠定了基础。     

猪白细胞介素-6的原核表达及其生物学活性研究

本研究采用RT-PCR方法自细菌脂多糖(LPS)刺激的猪脾脏细胞总RNA中扩增、克隆猪白介素-6(porcine interleukin-6,PoIL-6)成熟肽基因,并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的重组融合猪白介素-6(rPoIL-6)蛋白通过尿素变性、低浓度复性液复性、PBS透析等步骤进行复性、纯化,采用PoIL-6 ELISA试剂盒检测rPoIL-6蛋白与抗PoIL-6单抗发生特异性免疫反应的活性;采用MTS法检测rPoIL-6蛋白促猪脾脏细胞的增殖活性。结果表明,成功克隆了全长555 bp的PoIL-6成熟肽基因;表达的rPoIL-6蛋白分子质量大小约20 ku;纯化后的rPoIL-6蛋白纯度在95%以上,可和抗PoIL-6单抗发生特异性免疫反应,并且具有显著促猪脾脏细胞增殖活性。     

猪IL-10 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测方法的建立

白介素-10(IL-10)是一种具有免疫抑制作用的多能细胞因子.能够引发猪免疫抑制效应的多种病毒在感染宿主时均伴随有明显的IL-10上调,其中就包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),然而并不是所有的PRRSV毒株都能上调IL-10.为了详细探讨PRRSV免疫抑制与IL-10上调之间的关系以及PRRSV感染上调IL 10的具体分子机制,本研究针对猪IL-10以及看家基因β actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建了各自含有IL-10、βactin引物扩增序列的重组质粒为阳性标准品,建立了以2△△ct为基础的SYBR GreenⅠrealtime PCR检测方法.该方法线性关系良好;敏感性高,两种基因的检测下限均为1×101 copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性良好,批内变异系数小于2％,批间变异系数小于3％;目的基因及内参基因的扩增效率较高,分别为92.7％、97.8％.综上所述,该方法可以用于猪IL-10 mRNA水平的表达分析.     

串珠镰刀菌素对鸡血清白介素2含量的影响

从广东某饲料厂所用玉米中分离到串珠镰刀菌,并将该菌株接种玉米面进行产毒培养,培养物采用乙腈:水(95:5)提取串珠镰刀菌素(MON),用提取的M()N对雏鸡进行毒性试验,固相夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)测定试验鸡血清中白介素2(IL-2)的含量.结果表明:MON对鸡有毒害作用,鸡血清中IL-2含量比对照组降低(P<0.01).     

北极狐白介素-18基因的克隆与序列分析

根据GenBank中登录的犬白介素-18（IL-18）基因序列,设计了1对特异性引物。将北极狐外周血淋巴细胞经植物血凝素（PHA）诱导,用TRIzol裂解,提取总RNA,通过反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）扩增狐狸IL-18基因,连接pMD18-T载体,转化DH5d感受态细胞,获得阳性重组质粒。核苷酸测序结果显示,获得的基因序列全长590bp,含582bp的开放阅读框,编码193个氨基酸,与已知犬IL-18序列的同源性高达98．7％,氨基酸同源性为96．4％。     

黄芪多糖注射液对猪瘟耐热保护剂活疫苗在兔体内免疫效果的影响

试验旨在研究黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)注射液作为猪瘟疫苗稀释液及黄芪多糖作为疫苗佐剂提供数据支持。用1%的黄芪多糖注射液、猪瘟疫苗专用稀释液、生理盐水3种不同猪瘟疫苗稀释液稀释兔源猪耐热保护剂活疫苗免疫兔体,比较免疫后不同时间段内血液中的淋巴细胞的活性及血清中的猪瘟抗体、白介素2(interleukin 2,IL-2)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)、新蝶呤(neopterin,Npt)水平,综合评价3种不同猪瘟疫苗稀释液对兔源猪瘟耐热保护剂活疫苗在兔体内免疫效果的影响。结果表明,黄芪多糖能不同程度的提高抗体水平和多种细胞因子的含量。因此,黄芪多糖注射液可以作为猪瘟疫苗稀释液或改良现有猪瘟疫苗稀释液,黄芪多糖也可以作为猪瘟疫苗佐剂。     

草地放养鹅血清中免疫因子及细胞因子的影响

试验旨在对草地放养狮籽鹅血清中免疫球蛋白(Ig)、补体(C)、白介素(IL)及干扰素(IFN)的水平进行研究。2周龄狮籽鹅于6月初放入草地,在2,4,8和12周龄时,各随机选取5只进行免疫因子及细胞因子的检测,试验数据均用SPSS 17.0的独立样本T检验与前期已测舍饲组数据进行差异显著性分析。结果显示:草地鹅血清中IgG、IgM、C3、C4、IL-4、IL-6、IFN-α及IFN-γ的水平均高于舍饲鹅,且二者在不同周龄存在显著(P<0.05)或极显著差异(P<0.01);草地鹅血清中IL-2水平在4周龄时极显著低于舍饲鹅(P<0.01),8周龄时显著低于舍饲鹅(P<0.05);IL-12水平在4周龄时显著低于舍饲鹅(P<0.05),12周龄时显著高于舍饲鹅(P<0.05)。草地放养能提高狮籽鹅血清中免疫球蛋白、补体、白介素及干扰素的水平,增强鹅的免疫力,是值得推广的低成本养殖模式。     

大豆异黄酮对奶牛泌乳后期泌乳性能、免疫功能和乳腺肥大细胞白介素-4水平的影响

本试验旨在研究大豆异黄酮对泌乳后期中国荷斯坦奶牛泌乳性能、免疫功能和乳腺肥大细胞白介素-4水平的影响.选择12头泌乳后期的荷斯坦奶牛随机分为4组,每组3个重复.对照组和A、B、C组分别添加不同水平的大豆异黄酮(0、10、20、30 mg/kg).分离采自奶牛乳腺的肥大细胞,并分别与0、0.25、0.50、0.75 mg/mL的大豆异黄酮共育.结果表明:1)大豆异黄酮可显著减缓泌乳后期奶牛产奶量下降趋势(P<0.05),其中A、B和C组奶牛的产奶量比对照组提高7.29%、12.66%和10.13%;2)B和C组乳蛋白质率显著高于对照组(P<0.05);3)大豆异黄酮可提高血清和乳中生长激素(GH)和催乳素(PRL)的含量,B和C组效果显著(P<0.05),显著降低生长抑素(SS)含量(P<0.05);4)大豆异黄酮可显著提高血清(P<0.05)、乳(P<0.01)和乳腺组织(C组,P<0.05)中白介素-4(IL-4)的水平;5)0.25 mg/mL大豆异黄酮能够极显著增加奶牛乳腺肥大细胞的IL-4表达量(P<0.01).由此可知,大豆异黄酮能够通过对乳腺免疫指标表达量的调控,提高奶牛泌乳性能,增强奶牛的免疫功能,可促进乳腺肥大细胞IL-4的分泌.     

不同方法诱导鸡IL-2基因转录及cDNA克隆的研究

应用反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，从鸡新城疫Ⅰ系疫苗诱导的鸡胚和成鸡脾脏及成鸡白细胞中提取的总RNA中扩增得到鸡白介素-2(IL-2)基因cDNA。结果表明：以50倍或100倍稀释度接种鸡胚48h提取脾脏总RNA扩增效果最好；以5倍或10倍免疫剂量免疫成鸡48-72h，提取脾细胞或血液白细胞总RNA扩增效果最佳。为进一步研究鸡IL-2基因分子生物学特性提供了简便的诱导方法。     

免疫应激对不同品种仔猪白介素-1β、皮质醇和生长激素的影响

试验选用体重(12.6±0.7)kg的健康莱芜猪、鲁莱和大约克夏仔猪各12头,每个品种随机分对照组和试验组,每组6头。试验组腹膜注射200μg/kg体重的脂多糖(LPS),对照组注射等量生理盐水。于注射前、后采血,测定血浆中白介素-1β(IL-1β)、皮质醇和生长激素(GH)含量。结果表明:用LPS刺激后2、4h和7h每个品种的试验组与对照组相比,血浆中IL-1β和皮质醇含量均显著提高(P0.05),GH含量均降低,且LPS刺激后2h的GH水平显著降低(P0.05)。3个品种猪相比,莱芜猪在LPS刺激后2h时IL-1β、皮质醇的升高幅度和GH降低幅度均最小,与大约克夏猪相比差异均显著(P0.05)。结果显示,用LPS进行免疫应激,不同品种猪抗应激能力不同,莱芜猪相对于引进品种、地方品种有较强的抗免疫应激能力。     

猪白介素18成熟肽基因在真核细胞中的表达

为了获得有活性的猪白介素18(IL-18),本实验是将猪白介素18的成熟肽基因片段连接到真核表达载体上,用脂质体转染的方法将真核阳性质粒转染仓鼠肾细胞BHK21,经过G418抗性筛选,利用SDS-PAGE电泳分析表明表达的猪IL-18成熟肽在转染后的细胞上清中,同时收取转染后的细胞提取总RNA并除掉其中的DNA后通过RT-PCR方法扩增出500bp左右的DNA务带,证明已经得到可以稳定传代培养的能分泌猪IL-18蛋白的细胞系.     

黄芪对雏鸭IL-2基因表达的影响

为研究黄芪对白介素2基因表达的影响，将20只雏鸭随机分成对照组和试验组，试验组雏鸭用黄芪拌料饲喂，对照组雏鸭不用黄芪拌料饲喂，15d后处死，提取脾组织总RNA，通过实时荧光定量RT—PCR测定两组雏鸭IL-2基因表达情况。结果表明，实验组雏鸭IL-2基因表达量是对照组IL-2基因表达量的7．892倍。因此，黄芪能够提高雏鸭体内IL-2基因的表达，提高机体免疫力，从而增强雏鸭的抗病能力。