牦牛皮蝇蛆病低残留防治技术研究

应用埃普利诺菌素注射剂采用常规与微量给药技术,进行对牦牛皮蝇蛆病的防治试验,10月下旬给药,翌年3、5月份两次触摸检查牛背部皮下瘤疱和皮肤虫孔,并设阳性对照组,评价两种给药技术对牦牛皮蝇蛆病的防治效果。结果:两次检查阳性对照组平均感染率为39.15%,平均感染强度6.75(1~17)个;埃普利诺菌素注射剂常规剂量100、200、300μg/kg试验组牦牛两次检查平均治愈率和驱虫率均达100.0%;埃普利诺菌素注射剂微量10、20、30μg/kg防治组平均治愈率分别为86.3%、94.2%和100.0%,驱虫率分别为79.7%、93.2和100.0%。使用安全。给泌乳牦牛皮下注射埃普利诺菌素注射液0.2mg/kg后54.00h,牛奶中的埃普利诺菌素浓度达到峰值7.38±2.61ng/m L,低于美国(12 ng/m L)和欧盟(20ng/m L)规定的埃普利诺菌素在牛奶中的最高残留限量标准,不需休药期;皮下注射0.4mg/kg后56.00±26.31h,牛奶中的皮下注射浓度达到峰值6.98±2.98ng/m L,低于欧盟规定(20ng/m L),不需休药期,高于美国规定(12ng/m L),需休药期。适合当前家畜健康养殖中对牦牛寄生虫病防治的需要。     

牦牛主要寄生虫病高效低残留防治技术研究(下)

为制定埃普利诺菌素(EPR)休药期及建立牦牛主要寄生虫病高效低残留防治技术提供科学依据。采用荧光高效液相色谱法(HPLC-FLD)检测埃普利诺菌素(EPR)浇泼剂在牦牛组织中的残留消除规律。结果:给牦牛按推荐剂量0.5mg.kg~(-1)给予EPR浇泼剂后,EPR在牦牛体内分布广泛,牦牛组织中EPR于2d达到最高浓度,之后浓度逐渐下降,药物浓度由高至低依次为肝脏、肾脏、脂肪、肌肉组织,浇泼部位肌肉与后腿肌肉药物残留量无差异,肝脏是EPR作用的靶组织,检出药物浓度由高到低分别为肝脏1050.50ng.g~(-1)、肾脏139.47ng.g~(-1)、脂肪20.76ng.g~(-1)、血浆10.24ng.g~(-1)、后腿肌肉5.63ng.g~(-1)、背部肌肉5.00ng.g~(-1)。第9d组织中残留量为肝脏505.12ng.g~(-1),肾脏66.23ng.g~(-1),脂肪14.87ng.g~(-1),血浆4.09ng.g~(-1),肌肉2.41～2.47ng.g~(-1)。略低于欧盟(EU)、国际食品法典委员会(CAC)规定的标准。研究结果表明,EPR浇泼剂0.5mg.kg~(-1)推荐剂量用于泌乳牦牛无需弃奶期,牦牛肉用时无需休药期或建议休药期为1d。为建立牦牛主要寄生虫病高效低残留防治技术提供了依据。     

不同剂量埃普利诺菌素注射液在牛奶中的残留消除试验

本试验通过给奶牛1次皮下注射两种剂量(0.2mg/kg,0.4 mg/kg)的埃普利诺菌素(EPR)注射液后,在不同的时间点采集牛奶样品,加入多拉菌素(DOR)作为内标物,运用高效液相色谱法(HPLC)测定其中的EPR含量,获得不同剂量的EPR注射液在牛奶中的残留消除规律,以指导和规范实际生产中的合理用药.     

埃谱利诺菌素注射剂对绵羊体内外寄生虫的驱杀效果试验

埃普利诺菌素(eprinomectin,EPR)是一种新型的阿维菌素类药物,EPR的抗虫活力及抗虫谱与其他阿维菌素类药物相似,对家畜的绝大多数线虫和螨、虱、蜱、蝇等节肢动物均有很强的杀灭作用,其显著之处为用于奶牛和肉牛时无需休药期。     

兽药休药期及抗生素安全使用常识

(一)兽药休药期的含义、规定,必要性、范围和查找根据 1.含义.休药期系指畜禽最后一次用药到该畜禽许可屠宰或其产品(乳、蛋)许可上市的间隔时间. 2.规定.休药期是依据兽药在可食性组织的残留浓度及其消除规律的实验数据来确定的.经数理统计,必须确保有9 5%的可信限使99%的残留都低于最高残留限量(MRL).也就是晚,临床用药后,有95%的把握可以保证99%的用药动物,其组织中残留都低于MRL.     

TNF-α对牦牛卵母细胞HIF-1α和HSP70的表达及后续胚胎发育能力的影响

旨在研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对牦牛卵母细胞体外成熟和对低氧诱导因子1α(HIF-1α)、热休克蛋白70(HSP70)的表达以及后续胚胎发育能力的影响。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的TNF-α(最终浓度分别为0、10、25、50 ng·mL^-1),牦牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)培养成熟后,统计其卵母细胞成熟率及体外受精后早期胚胎的发育率,采用RT-PCR扩增牦牛 HIF-1α、 HSP 70基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)和免疫荧光染色技术检测HIF-1α、HSP70在基因和蛋白水平的表达情况。结果发现:1)成熟液中加入TNF-α,卵母细胞的成熟率提高,且随着TNF-α浓度的升高,卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率逐渐升高,当TNF-α浓度为 25 ng·mL^-1 时,卵母细胞的成熟率和卵裂率达到最高,分别为84.98%和66.85%,而囊胚率也达到了21.48%,均显著高于对照组( P <0.05);2)随着TNF-α浓度的升高, HIF-1α的表达量逐渐降低,对照组 HIF-1α的表达量极显著高于其他组(P <0.01),50 ng·mL^-1 TNF-α组 HIF-1α的表达量极显著低于其他组(P <0.01),HIF-1α在卵丘细胞和卵母细胞上均有表达;3)25 ng·mL^-1 TNF-α组的HSP 70表达量最高,极显著高于其他组(P <0.01),而当TNF-α达到50 ng·mL^-1 时,HSP 70的表达量最低。综上表明,在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,TNF-α明显提高了卵母细胞的发育能力,同时还诱导了HSP 70的表达,抑制了HIF-1α的表达,为今后探讨TNF-α、 HIF-1α和HSP70在牦牛生殖过程中发挥的作用以及对胚胎发育的影响提供理论依据。     

喹胺醇在鸡组织的消除及残留研究

以鸡为靶动物,多次口服(50 mg/kg,每12 h 1次,连续6次)喹胺醇,测定其在肝脏、肾脏及肌肉中的残留.用乙腈-乙酸乙酯(3/2,V/V)提取组织中的药物,反相高效色谱法测定组织中喹胺醇的浓度.色谱条件:C18-ODS柱(25 ㎝×4 .6),流动相为乙腈:水(2/3,V/V);流速1.0 ml/min,紫外检测波长为334 nm.鸡多次口服喹胺醇,于第6次给药后在肝脏、肾脏、肌肉药物的消除半衰期为5.91、6.489、5.727 h.若规定组织中喹胺醇浓度最高残留限量为1ng/g可食用,则休药期应为2天.     

肉鸡组织中四种氟喹诺酮类药物休药期的探讨

选择27日龄健康艾维茵肉仔鸡,研究了四种氟喹诺酮类药物残留消除规律。饲喂剂量遵循《中国兽药手册》药物用量之规定,饲喂方式有四种药物单独饲喂、两种药物混合饲喂、四种药物混合饲喂三种类型,饮水给药,连续5 d。对不同停药时间所取鸡胸肉、鸡腿肉和肝脏样品中的药物残留进行分析,发现肝脏中的消除最慢,鸡腿肉中的消除最快。根据日本最高残留限量制定休药期,四种药物单独饲喂,氧氟沙星(OFL)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIF)、恩诺沙星(ENR)的休药期分别为4 d、6 d、7 d、9 d;CIF和ENR两种药物联合饲喂时,休药期定为9 d;四种药物混合饲喂时,休药期定为9 d。根据我国最高残留限量制定休药期,四种药物单独饲喂,OFL、NOR、CIF、ENR的休药期分别为3 d、3 d、3 d、6 d;CIF和ENR两种药物联合饲喂时,休药期定为6d;四种药物混合饲喂时,休药期定为6 d。     

盐酸多西环素在猪体内的药物动力学及其残留

试验建立了反相高效液相色谱(RT-HPLC)法测定盐酸多西环素的浓度,探讨了盐酸多西环素在猪体内的药物动力学和残留特征。结果表明,盐酸多西环素以2.5mg/kg单剂量肌内注射给猪(n=6),药物动力学模型符合有吸收一室模型,药物动力学参数:吸收半衰期(t1/2ka)、消除半衰期(t1/2ke)为(0.400±0.312)h、(9.530±0.956)h,药时曲线下面积(AUC)为(44.414±4.123)mg·h·L-1,最大血药浓度(Cmax)为(2.811±0.136)mg/L,达峰时间(Tp)为(1.910±0.213)h。另外,以相同剂量肌内注射给猪(n=6),每天1次,连续给药4d后,在不同时间测定盐酸多西环素在猪的肌肉、肝脏、肾脏、皮肤和脂肪中的残留量。在给药后16d,盐酸多西环素在各组织均能检测到,且残留均低于残留限量。盐酸多西环素注射液在猪体内消除缓慢,残留期较长,建议休药期不低于16d。     

土拉霉素在猪体内残留消除规律的研究

本研究旨在分析土拉霉素在猪体内的残留消除规律并为制定休药期提供依据。采用猪颈部一次性肌内注射土拉霉素注射液,注射剂量为2.5mg.kg-1体质量,分别在给药后第0.5,5,12,18,25,36,48天,各宰杀5头取样。样品经乙腈提取,正己烷脱脂,C18固相萃取柱(SPE)净化后用高效液相色谱—串联质谱仪分析。结果显示,给药后第0.5天注射部位药物浓度最高,第36天所有组织的药物浓度均低于最高残留限量(MRL)。用WinNonlin软件分析各组织中的消除动力学参数,消除快慢依次为注射部位,肝脏,皮脂,肌肉,肺脏和肾脏,其消除半衰期(t1/2β)分别为117.06,193.14,197.60,207.64,228.99和232.61h。肺脏的药时曲线下面积(AUC)为1 220.59μg.h.g-1仅次于注射部位及肾脏,显著高于肌肉,肝脏及皮脂。由于肾脏为代谢器官,因此可确定肺脏为土拉霉素作用的靶部位。根据欧美等国家对土拉霉素制定的最高残留限量,计算得注射部位的休药期最长,为33d。结果提示土拉霉素注射液吸收迅速,体内分布广,作用时间长。建议休药期为33d。     

牛奶中利福昔明残留消除规律研究

为研究新型奶牛干乳期乳房注入剂利福昔明在牛奶中的残留消除规律,在常规饲养条件下,选择处于干乳期的12头健康奶牛分为2组(每组6头),在预产期前60天,按推荐剂量(100mg)及2倍推荐剂量(200mg)两种剂量通过乳房注入方式给药,在产犊泌乳后的12、24、36、48、60和72h共6个时间点采集奶样,用超高效液相色谱-串联质谱法检测。液相条件：色谱柱为BEH C18(50?2.1mm,1.7μm),0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。质谱条件：ESI＋离子源,MRM方式采集。结果表明：推荐剂量组12h时6头奶牛有2头检出利福昔明,残留量分别为2.84和4.50μg/kg;24h时已全部检不出药物。2倍推荐剂量组12h时6头奶牛均检出利福昔明,残留量仅在1.56~10.2μg/kg之间,24h时有2头检出,残留量分别为1.41和1.28μg/kg,36h时全部检不出药物。两组检出的残留量均远低于欧盟规定的牛奶中最高残留限量60μg/kg。因此,实验用12头干乳期奶牛使用利福昔明乳房注入剂后在产犊泌乳时牛奶中的休药期均为零。     

喹烯酮在鸡食用组织中的残留研究

为建立定量测定鸡食用组织中喹烯酮的高效液相色谱检测方法,并依据测定的结果制定最高残留限量,确定其休药期。选用63只鸡,按正常饲料添加喹烯酮(75 mg/kg)饲喂2.5月后,按既定时间点采样。组织样品用乙酸乙酯等试剂提取处理纯化后进样,在312 nm波长处检测,流动相为甲醇-水(70∶30),流速为1.0 mL/min。结果表明,在试验条件下,脂肪、肝脏、肾脏、肌肉组织中的最低检出浓度均为0.005μg/g。平均回收率肌肉为99.23%±2.75%,脂肪为105.15%±8.65%;肝脏为93.55%±11.16%;肾脏为104.10%±9.80%。喹烯酮在肌肉皮脂中1 d后均无残留,而在肝脏和肾脏中的残留量也很小,2 d以后再无残留。精密度考察喹烯酮的日内和日间各组织各浓度的相对标准差均小于8.5%。因此,本试验测定方法灵敏度高,重复性好。停药后4 h所有可食用鸡组织中喹烯酮浓度均低于计算所得的安全组织浓度,故该药在鸡上使用无休药期,即休药期为0 d。     

链霉素在牛奶中残留检测

采用生物法定量检测了链霉素在牛奶中的残留，该方法灵敏度高，操作简便，检测结果准确可靠，结果表明，该方法回收率高，符合残留检测要求，可靠检测限可达0．1μg/ml，低于国家规定残留最高限量0．2μg/ml。样品浓度的对数与抑菌圈直径呈良好的线性关系，可用于残留检测的定量分析。该方法可用于牛奶中链霉素残留的检测。     

西班牙又发现新的疯牛病病例

澳大利亚近日拟修改奥新食品标准法典，调整部分农兽药的最大残留限量，包括：调整动物产品中抗生素新霉素(neomycin)最大残留限量，将牛奶内新霉素的最大残留限量由0．5mg／kg放量到1．5mg／kg；将浆果、芸苔、甘橘等食品中磷化氢(phosphine)最大残留限量调整为0．01mg／kg；将鲍鱼及长须鲸苯坐卡因(benxocaine)的最大残留限量调整为0．05mg／kg；     

氨苄西林在鸡组织中的残留消除规律

旨在研究氨苄西林在鸡组织中残留消除规律。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白质,正己烷去脂肪,饱和二氯甲烷萃取,上清液经甲醛在酸性条件下沸水浴衍生化后,在激发波长327nm、发射波长409nm处用高效液相色谱荧光检测器检测。结果显示:该方法测定鸡组织中氨苄西林的检测限为3.5μg·kg-1(S/N=3)、定量限为10.0μg·kg-1(S/N=10)。氨苄西林在鸡组织样品中平均回收率在75.31%~85.87%,变异系数均低于10.20%。各试验组京海黄鸡分别按体重以120、240mg·(kg·d)-1剂量内服氨苄西林,每天1次,连续7d给药后,休药4h(零休药期),各组织中氨苄西林的残留量最高,并在休药后第3天迅速降低。休药第5天后所有组织中氨苄西林残留量均低于最高残留限量(50μg·kg-1),休药第9天各组织中氨苄西林残留量均低于检测限。休药后相同时间点鸡肌肉中药物残留量最低,肝中的药物残留量最高;氨苄西林在肾中残留比肌肉、肝消除缓慢且消除时间长。氨苄西林在鸡肌肉、肝和肾中的残留量均与给药剂量呈正相关。根据WT1.4软件按95%置信区间计算所得,建议黄羽肉鸡按体重以120、240mg·(kg·d)-1剂量给药,每天1次,连续7d后,其休药期(WT)分别为4和5d。     

土霉素在斑节对虾体内药代动力学和生物利用度

在自然海水（盐度33）．水温为（28．0±1．0）℃养殖条件下,采用反相高效液相色谱法（RP—HPLC）,研究口灌（100mg／kg）和围心腔注射（20mg／kg）2种给药途径下,土霉素在斑节对虾（Penaeus7YlOylodoYl）体内的药代动力学和生物利用度。围心腔注射和口灌给药下,血药药时曲线均适合采用二室模型拟合。围心腔注射下血药达峰浓度（Cmax）、药时曲线下面积（AUC0-1）、消除半衰期（t,m）分别为（80．71±13．12）mg／L 378．25nag·h·L-1、17．398h;口灌给药下的相应值分别为（21．98±3．32）mg／I。324．52nag·h·L-1、23．372h,土霉素在斑节对虾体内的生物利用度（F）为17．16％。口灌土霉素后,肝胰腺Cmax为（138．655±21．375）μg／g,是血药的6．3倍、肌肉峰浓度的130．2倍,药物在肝胰腺中含量最高;然而。肌肉和肝胰腺中土霉素消除较快,消除半衰期（t1/2x）分别为28．18h和19．311 h。根据我国水产品中药物残留限量规定,水产品中土霉素的最高残留限量（NY5070—2002）为0．1mg／kg,结合本试验研究结果,斑节对虾使用土霉素后的休药期为5d,肌肉可食组织即符合无公害食品标准要求。     

联合国颁布农牧食品中农药高残留限量

联合国粮农组织和卫生组织颁布了农牧食品中农药最高残留量的标准,其具体为(mg/kg)艾氏剂和狄氏剂的最高限量(ppm):粮谷0.02;牛奶0.005;水果0.05;甘兰、胡萝卜、黄瓜、茄子等19个蔬菜品种0.01;肉、蛋0.02;狄氏剂最高残留限量:牛奶0.008;苹果、粗米、甜     

妥曲珠利在鸡组织内的残留研究

研究鸡单剂量喂服(50 mg/kg·d,100mg/kg·d,连服2 d)妥曲珠利后在肝脏、肾脏、肌肉组织中的残留量,以便制定妥曲珠利预混剂的休药期.用乙腈-乙酸乙酯(3/2,v/v)提取组织中的药物,利用高效液相色谱法测定组织中妥曲珠利的浓度.试验结果表明,100mg/kg饲料添加妥曲珠利在鸡体内休药期为14 d,50 mg/kg时休药期为8 d.该结果与农业部制定的无公害食品饲养兽药使用准则中所规定的75～100 mg/kg鸡饮水妥曲珠利的休药期一致.     

酶免疫法测定鸡血清中磺胺喹恶啉的残留

磺胺喹恶啉（ｓｕｌｆａｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ，ＳＱ）作为一种常见的抗球虫药，常与氨丙啉等混合使用。但该药物有一定的毒性［１］。美国ＦＤＡ规定，鸡的ＳＱ休药期为１０ｄ，并规定母鸡在产蛋期内禁用ＳＱ。我国规定磺胺类药物的总残留量不得超过３００ｎｇ／ｇ，但尚未有ＳＱ在鸡体最高残留限量及休药期的规定。测定磺胺喹恶啉残留的方法有高压液相法［２］、化学发光法［３］等。酶免疫法测定药物残留具有灵敏、快速、方便等优点，磺胺二甲嘧啶等药物用该法已有成功测定的报道［４］，快速测定牛奶中磺胺二甲嘧啶的酶免疫测定试剂盒…     

复方磺胺氯吡嗪钠在鸡体内残留消除研究

为研究复方磺胺氯吡嗪钠混悬液在鸡体内的残留消除规律,制订该制剂在鸡体内的休药期,在常规饲养条件下,将30只健康肉鸡随机分为5组,按最高推荐剂量(即每升饮水300mg(以磺胺氯吡嗪钠计))连续饮水给药7d,停药后分别于4h、1d、3d、5d、7d共5个时间点各宰杀一组鸡,采集每只鸡的肌肉、肝脏、肾脏和皮脂,采用HPLC法对磺胺氯吡嗪在各组织的残留量进行测定。结果显示:停药后磺胺氯吡嗪在皮脂中消除最慢,在肌肉中消除最快,且在停药第7天所有检测组织中磺胺氯吡嗪已全部低于方法的定量限(0.04mg/kg),根据农业部对磺胺类药物在禽组织的最高残留限量的规定(0.1mg/kg)和WT1.4休药期软件计算结果,建议该制剂的休药期为7d。