钙离子跨膜吸收相关基因在内蒙古白绒山羊胃肠道中的差异表达

本试验旨在研究钙离子(Ca~(2+))跨膜吸收途径中的相关基因在内蒙古白绒山羊胃肠道中的表达差异分析。选用9只4月龄内蒙古白绒山羊断奶羔羊,屠宰后取瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠组织样品用于RNA提取,利用实时荧光定量PCR检测维生素D依赖性钙结合蛋白(CaBP-D9k)、瞬时性受体电位通道香草酸受体6(TRPV6)和维生素D受体(VDR)的mRNA表达量。结果表明:CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA均在十二指肠中表达量最高,CaBP-D9k和TRPV6 mRNA与VDR mRNA分别在大肠内、胃内处于较低的表达水平;CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA表达量随着小肠的延伸而逐渐降低。综合来看,CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA表达量与胃肠道Ca~(2+)跨膜吸收能力存在关联性。     

饲粮阴阳离子差水平对围产期小鼠血钙浓度与胃肠道组织维生素D受体mRNA表达水平的影响

本试验旨在通过研究饲粮阴阳离子差(DCAD)水平对围产期小鼠血钙浓度和胃肠道组织维生素D受体(VDR)mRNA表达水平的影响,揭示低DCAD水平防治低血钙症的作用机理。将120只围产期小鼠分为3组,每组40只,分别饲喂DCAD水平为+300(高DCAD水平组,HD组)、+150(对照组,CON组)、-150 mmol/kg DM(低DCAD水平组,LD组)的饲粮。在小鼠产前20 d(-20 d)、产前5 d(-5 d)、产仔当天(0 d)、产后3 d(3 d),每组随机选取10只采血并采集胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠样品,测定血钙浓度与组织VDR mRNA表达水平。结果表明:在整个试验期和单个采血时间点,LD组较CON组、HD组显著提高小鼠血钙浓度(P0.05)。与CON组、HD组相比,在-20 d,低DCAD水平显著提高了空肠、回肠和结肠的VDR mRNA表达水平(P0.05);在-5 d,低DCAD水平显著提高了空肠、结肠VDR mRNA表达水平;在0 d,低DCAD水平显著提高了十二指肠VDR mRNA表达水平(P0.05);在+3 d,低DCAD水平显著提高了十二指肠、空肠和结肠VDR mRNA表达水平(P0.05)。由此可见,低DCAD水平可提高围产期小鼠胃肠道组织VDR mRNA表达水平,增加血钙浓度。这可能是低DCAD水平有效防治低血钙症的作用机理。     

产蛋循环过程中TRPV6、CaBP-D_（28K）和PMCA 1b在蛋壳腺的动态表达

将40羽220日龄ISA蛋鸡分为5组,于产蛋后0、2、4.5、8、16h断头处死,采集蛋壳腺组织,运用Real-time PCR和Western-blot方法检测产蛋循环过程中瞬时性受体单位香草精受体6（Transient receptor potential vanilloid receptor 6,TRPV6）、钙结合蛋白（calbindin D28K,CaBP-D28K）、质膜钙离子ATP酶1b（plasma membrane Ca2＋-ATPase 1b,PMCA 1b）mRNA和蛋白浓度的动态变化。结果显示,卵子未进入蛋壳腺前（产蛋后0~4.5h）,蛋壳腺内TRPV6、CaBP-D28K和PMCA 1bmRNA表达水平较低,随后表达量逐渐升高,在蛋壳钙化过程中达到最大值（产蛋后16h）,与0h相比,TRPV6和CaBP-D28KmRNA表达差异均极显著（P〈0.01）;另外,产蛋循环过程中,TRPV6、CaBP-D28K和PMCA 1b蛋白浓度变化与mRNA变化一致,产蛋后16h到达最大值,其中CaBP-D28K蛋白浓度与0h相比,差异显著（P〈0.05）。结果表明,产蛋循环可调控蛋壳腺内TRPV6、CaBP-D28K和PMCA 1b的表达,并提示钙离子跨细胞转运途径在钙离子进入蛋壳腺形成蛋壳过程中发挥重要作用。     

TRPV6基因沉默对蛋鸡十二指肠和空肠钙离子跨细胞转运相关蛋白表达的影响

本试验旨在研究瞬时性受体电位通道香草酸受体6(transient receptor potential vanilloid receptor 6,TRPV6)基因沉默对蛋鸡十二指肠和空肠跨细胞钙离子转运相关蛋白表达、血浆钙磷浓度、PTH水平及骨密度的影响。将64只220日龄高产蛋鸡随机分为对照组和TRPV6基因沉默组,分别一次性注射生理盐水和pSIRENTRPV6-3质粒,连续观察28d。结果表明,与对照组相比,pSIREN-TRPV6-3质粒注射第7、14和21天,十二指肠和空肠中均检测到ZsGreen蛋白表达;TRPV6、CaBP-D28K mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.05或P0.01);血浆PTH浓度显著升高(P0.05或P0.01);此外,血浆钙、磷浓度不受影响,股骨和胫骨骨密度有降低趋势,但与对照组相比差异不显著(P0.05)。由此可见,siRNA TRPV6质粒抑制十二指肠和空肠TRPV6和CaBP-D28K的表达,但不影响血液中钙离子浓度和骨密度水平,表明在正常日粮钙水平条件,沉默TRPV6通道蛋白不影响蛋鸡体内正常的钙转运。     

维生素D受体在体外培养SD大鼠脂肪细胞中的表达

为了探索维生素D受体(VDR)在SD大鼠脂肪细胞分化过程中的表达规律,采用Ⅱ型胶原酶消化法进行SD大鼠脂肪细胞的分离培养,并将其诱导分化为成熟的脂肪细胞,分别在细胞生长至单层汇合后的第0、4、8、12、16天收集细胞样品。对VDR和脂滴进行荧光染色,同时采用Western blot对脂肪细胞分化过程中的VDR蛋白表达量进行分析,采用real-time PCR定量分析脂肪细胞分化过程中的VDR表达量。结果显示,随SD大鼠脂肪细胞的分化,细胞中脂滴逐渐增加,VDR mRNA和蛋白的表达量与脂质积累过程呈负相关性,表明VDR的表达在脂肪细胞分化过程中有一定的变化规律,其可能以负反馈的调节机制参与了脂肪细胞的分化过程。     

饲粮阴阳离子差水平对小鼠血钙浓度及胃肠道组织钙结合蛋白-D9k mRNA相对表达水平的影响

本试验在前期建立了动物胃肠道钙代谢相关基因表达水平检测体系与表达谱分析的基础上,旨在进一步确定饲粮阴阳离子差(DCAD)水平对动物血钙浓度和胃肠道组织钙结合蛋白-D9k(Ca BP-D9k)mRNA相对表达水平的影响,为揭示低DCAD水平防治动物低血钙症的作用机制提供依据。将120只昆明小鼠随机分为3组,每组40只,自配种前3 d起分别饲喂DCAD水平为+300(高DCAD水平组,HD组)、+150(对照组,CON组)、-50(低DCAD水平组,LD组)的饲粮。检测母鼠产前20 d(-20 d)、产前5 d(-5 d)、产后当天(0 d)、产后3 d(+3 d)血钙浓度和胃肠道组织Ca BP-D9k mRNA相对表达水平。结果表明,与HD组相比,LD组显著提高了围产期内0 d、+3 d小鼠血钙浓度(P0.05),显著上调了小肠肠段(十二指肠、空肠、回肠)与结肠Ca BP-D9k mRNA相对表达水平(P0.05),这一效应在-5 d、0 d表现最为显著(P0.05),并在+3 d提高了小鼠空肠与结肠的Ca BP-D9k mRNA相对表达水平(P0.05)。统计结果显示,十二指肠、空肠与结肠3个位点的Ca BP-D9k mRNA相对表达水平与DCAD水平、血钙浓度具有显著的关联性(P0.05)。由此可见,降低DCAD水平可上调动物小肠及结肠肠段Ca BP-D9k mRNA相对表达水平,同时伴随更高的血钙浓度。这可能是低DCAD水平有效维持动物围产期血钙稳恒,降低低血钙发生率的重要途径。     

过表达TRPV6基因对小鼠破骨细胞钙转运基因与凋亡相关基因表达的影响

破骨细胞是体内唯一的骨吸收细胞,对钙离子跨细胞膜转运及维持正常血钙水平有非常重要的作用。瞬时性受体电位通道香草酸受体6(transient receptor potential vanilloid receptor 6,TRPV6)是TRP家族中的一员,对钙离子有高度选择性,且是钙离子跨细胞转运的限速门控通道。本试验旨在研究TRPV6过表达对破骨细胞钙转运相关基因及细胞凋亡相关基因表达的影响。用TRPV6过表达慢病毒载体(LV-TRPV6)转染培养7 d的破骨细胞构建TRPV6过表达破骨细胞模型,以阐释小鼠破骨细胞中TRPV6与钙离子转运和细胞凋亡的关系。将破骨细胞分为3组:空白对照组、阴性对照组和LV-TRPV6组。结果显示:与空白对照组比较,破骨细胞TRPV6过表达后钙离子转运相关基因(calbindin-D28K,NCX1) mRNA和蛋白表达水平显著增加(P0.05);破骨细胞TRPV6过表达后细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达水平显著降低(Fas和Fas L除外)(P0.05)。流式细胞仪分析显示,LV-TRPV6组凋亡率显著下降6.33%±0.235%(P0.05)。研究表明,破骨细胞过表达TRPV6基因导致钙转运相关基因表达增加并抑制破骨细胞凋亡。     

1,25-( OH)2D3及LPS对2型糖尿病肾病尿毒症患者单核细胞维生素D受体表达的影响

目的 探讨1,25-(OH)2D3及TLR4配体(脂多糖,LPS)对2型糖尿病(T2DM)和糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)尿毒症患者血清干预的单核细胞维生素D受体(VDR)表达的影响,进一步探索1,25-( OH)2D3在T2DM和DN炎症性免疫反应中的作用.方法 分离研究对象(健康对照组、T2DM组和DN尿毒症组)外周血血清,孵育THP-1单核细胞,然后于含或不含10-7 mol/L的1,25-(OH)2D3培养液中培养48 h后,再用终浓度为1μg/ml的LPS干预24h,收集单核细胞和培养上清.采用RT-PCR检测VDR mRNA表达,Western blot、免疫荧光检测THP-1单核细胞内VDR蛋白表达.ELISA法检测细胞培养上清IL-6和IL-10浓度.结果 与正常对照组比较,在LPS的刺激下T2DM组和DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR mRNA水平下调[对照组(0.99±0.25);T2DM组(0.65±0.24);DN尿毒症组(0.62±0.27),P＜0.05];DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR蛋白表达比正常对照组和T2DM组显著下调[对照组(0.48 ±0.05);T2DM组(0.50±0.06);DN尿毒症组(0.20±0.01),P＜0.01],且LPS增强以上患者血清孵育的THP-1单核细胞炎症细胞因子IL-6的分泌[对照组(15.13±1.61);T2DM组(24.06 ±2.92);DN尿毒症组(70.77 ±5.48),P＜0.05];而1,25-(OH)2D3可部分阻断上述作用.结论 LPS能下调T2DM和DN尿毒症患者单核细胞VDR mRNA和蛋白的表达,引起促炎和抗炎细胞因子失调.1,25-(OH)2D3可部分逆转LPS的作用,对T2DM和DN尿毒症可能具有一定的保护作用.     

维生素D的免疫功能

维生素D是动物所必需的营养素,除对钙和骨代谢具有重要影响外,对免疫系统也有重要作用。1,25(OH)2维生素D3是维生素D的活性形式,1,25(OH)2维生素D3的生物学效应是由维生素D3受体(VDR)介导的。淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞都有VDR的表达,这表明,维生素D对免疫系统功能有重要调节作用。     

维生素D受体基因与骨代谢关系的研究

维生素D(VD)与骨代谢的钙磷吸收有着非常密切的关系,其体内活性形式为1,25 (OH)₂D₃。而VD受体（VDR）是介导1,25 (OH)₂D₃发挥生物效应的核内生物大分子。近年来,随着对骨病研究的深入,对VDR基因与骨代谢关系的研究越来越受到国内外学者的重视。在不同群体甚至不同个体中,VDR基因极容易表现出多态性。目前大量的研究集中在VDR基因4个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点FokI、BsmI、ApaI、TaqI与骨代谢之间的关系。作者分别从钙吸收、骨量、骨密度、骨质疏松、佝偻病等方面对VDR基因与骨代谢关系进行综述。     

维生素D通过Wnt信号通路对肠道发育调控机制的研究进展

Wnt信号通路广泛存在于脊椎和无脊椎动物体内,对动物机体各组织器官发育,如肝脏、肾脏、肠道等起着至关重要的作用。维生素D是一组脂溶性类固醇衍生物,维生素D不直接作用于靶器官,而是通过与维生素D受体(VDR)结合从而发挥其生物学效应。近年来研究表明,VDR可以通过影响Wnt信号通路的传导进而影响肠道发育,本文就VDR对Wnt信号通路的影响、Wnt信号通路对肠道发育的调控机制等方面作一综述,以期为Wnt信号通路在肠道发育调控研究提供参考。     

维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡卵巢繁殖基因表达和抗氧化功能的影响

试验旨在研究维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡卵巢繁殖基因表达和抗氧化功能的影响。采用3×3试验设计，维生素A添加量为0、7000、14000IU/kg，维生素K3添加量为0、2.0、4.0 mg/kg。选取1 080羽88周龄罗曼粉蛋鸡，随机分为9组，每组8个重复，每个重复15羽。预试期2周，正式试验期8周。结果表明：与0 IU/kg维生素A相比，添加7 000、14 000 IU/kg维生素A增加了卵巢中骨形态发生蛋白15和骨形态发生蛋白受体1B的mRNA相对表达量（P<0.05），降低了卵巢中总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力以及核因子E2相关因子2和GSH-Px1 mRNA相对表达量（P<0.05）；添加2.0 mg/kg维生素K3上调了卵巢中激活素受体I型和促卵泡激素受体的mRNA相对表达量（P<0.05）；维生素A和维生素K3对血清中孕酮含量、卵巢繁殖基因雌激素受体1、抗氧化基因GSH-Px3的mRNA相对表达量以及卵巢中GSH-Px、T-SOD有显著交互作用。由此可见，添加7 000、14 000 IU/kg维生素A可...     

饲粮维生素D添加形式对公猪繁殖性能的影响

本试验旨在研究饲粮维生素D添加形式对种用公猪繁殖性能的影响。选取16头18月龄的约克公猪,随机分成2组,2组饲粮中分别含有50μg/kg维生素D3(VD3)和25-羟基维生素D3(25-OHD_3),每组8个重复,每个重复1头猪。试验期16周。结果表明,与VD3组相比:1~16周,25-OHD_3组公猪精子活力和每次射精的有效精子数显著提高(P0.05),而精子畸形率显著降低(P0.05);第112天,25-OHD_3组血浆钙离子(Ca2+)和雌二醇含量及芳香化酶活性显著提高(P0.05),精清25-OHD_3、Ca2+、果糖含量和酸性磷酸酶的活性显著提高(P0.05);25-OHD_3组芳香化酶、维生素D 25-羟化酶、维生素D 24-羟化酶和维生素D受体基因的表达量显著升高(P0.05)。综上所述,与同等水平VD3相比,种公猪饲粮中添加25-OHD_3能更有效增加血浆维生素D含量,从而改善精子的形态和运动能力,提高公猪的繁殖性能。     

花生四稀酸影响绒山羊毛乳头细胞中维生素D受体基因表达的研究

为了研究花生四稀酸(AA)对绒山羊毛乳头细胞(DPCs)增殖的影响,探讨AA对DPCs中维生素D受体(VDR)基因表达的影响机制。通过体外培养DPCs给予不同浓度的AA作用不同的时间,采用CCK8法检测DPCs存活率,利用免疫荧光染色与实时定量PCR检测VDR的表达水平变化。通过体外培养DPCs和VDR基因缺陷型DPCs给予AA处理,利用实时定量PCR检测毛囊相关基因(IGF1、Noggin、b-catenin和Lef1)的mRNA表达变化。结果表明:AA(10~(-7) mol/L)可显著促进DPCs的增殖(P0.05),显著提高VDR基因的mRNA和蛋白表达;显著提高IGF1和Lef1基因的mRNA表达(P0.05);VDR基因缺陷型DPCs中添加AA时,IGF1基因的mRNA表达没有显著变化。研究结果表明,AA促进DPCs细胞的增殖和毛囊中VDR、IGF1和Lef1基因的表达,且AA对于毛囊中IGF-1表达的促进作用受到VDR基因的调控作用。     

钙和维生素D对生长肉鸡免疫及抗氧化功能的影响

本试验旨在研究日粮中钙(ca)和维生素D水平对生长肉鸡免疫及抗氧化功能的影响.采用2× 2完全随机试验设计,选用体重相近的4周龄爱拔益加(AA)肉鸡144只,随机分成4个处理,每个处理6个重复,每个重复6只鸡,分别饲喂含Ca 0.90%、1.15%和维生素D 750、5 000 IU/kg的试验日粮,试验期为4周.结果表明,1)维生素D对胸腺和脾脏指数作用显著(P<0.05),随维生素D添加量的增加免疫功能增强;与0.90%Ca组相比,1.15%Ca组町降低法氏囊指数(P<0.05)和血清免疫球蛋白含量(P>0.05);维生素D和Ca的互作显著影响脾脏指数和血清白介素-2(IL-2)(P<0.05),5 000 IU/kg维生素D+0.90%Ca组脾脏指数和IL-2较高;2)随维生素D添加量的增加,血清和肝脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、总抗氧化能力(T-AOC)升高,丙二醛(MDA)含量降低;随Ca添加量的增加,生长肉鸡的抗氧化性能降低,且对机体肝脏T-SOD、GSH-Px、T-AOC影响显著(P<0.05);维生索D和Ca的互作对血清和肝脏T-SOD、GSH-Px、MDA影响显著(P<0.05),5 000 IU/kg维生素D+0.90%Ca组在抗氧化方面优势明显.综合分析,5 000 IU/kg维生素D+0.90%Ca组在抗氧化和免疫方面具有一定的优势.因此,实际生产中在满足生长肉鸡Ca基本需要量的同时,适当增加维生素D添加量对提高生长肉鸡免疫和抗氧化功能具有重要的作用.     

不同磷水平对Na+/PiⅡb转运载体蛋白mRNA表达和磷吸收的影响

本文通过大鼠饲喂试验研究了不同磷水平对磷吸收的影响,旨在进一步揭示无机磷的吸收机理.试验选用120只体重相近的昆明大白鼠,随机分成4个处理,每处理5个重复,每个重复6只大白鼠,分别饲喂含磷(总磷)0.2%、0.4%、0.6%、0.8%的饲粮,试验期14d,测定血钙血磷、骨钙骨磷及不同肠段Na+/PiⅡb载体转运蛋白mRNA表达量和磷的吸收等指标.结果表明,0.2%低磷组回肠、空肠、十二指肠Na+/PiⅡb载体转运蛋白mRNA表达量分别是0.6%磷水平组的3.10(P<0.01)、3.07(P<0.01)、2.17倍(P<0.05);但肾脏中Na+/PiⅡb mRNA表达量比其他3个磷水平组分别低9.19、12.86、23.15倍,差异均极显著(P<0.01);0.2%低磷组中回肠Na+/PiⅡb mRNA表达量分别是空肠、十二指肠和肾脏的1.34(P>0.05)、3.43(P<0.05)和95.53倍(P<0.01);肾脏中Na+/PiⅡb mRNA的表达量最低,分别比空肠、十二指肠低70.92、27.85倍,差异均极显著(P<0.01).0.2%低磷组磷吸收比0.6%和0.8%磷水平组分别提高了22.11%(P<0.05)和19.35%(P<0.05),同时还提高了血清中维生素D3含量(P<0.05).研究表明,低磷提高了小肠中Na+/PiⅡb载体转运蛋白mRNA表达量和磷的吸收,且在低磷条件下,大鼠Na+/PiⅡb载体转运蛋白mRNA表达量以回肠最高,肾脏最低.     

利维爱(Livial)对动脉粥样硬化兔组织内雌激素受体和低密度脂蛋白受体的影响

以去势雌兔作为对照,用高胆固醇饮食法复制动脉粥样硬化(AS)模型,研究了利维爱(Livial)在防治兔动脉粥样硬化过程中对雌激素受体和低密度脂蛋白受体mRNA表达的影响。应用RT-PCR方法,β-actin做内参照,对各组去势雌兔心脏、肝脏组织内雌激素受体和低密度脂蛋白受体mRNA的表达进行了检测。结果,2种受体在兔心脏和肝脏内均有表达。对照组,雌激素受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.43±0.12、0.39±0.20;低密底脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.27±0.05、0.86±0.12,差异显著(P<0.001)。AS模型组,雌激素受体和低密度脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量分别为0.29±0.03、0.27±0.06和0.04±0.01、0.17±0.02,2种受体的mRNA表达均比对照组降低,差异显著(P<0.001)。利维爱组(饲喂高胆固醇饲料同时给予利维爱),雌激素受体在心脏、肝脏内的相对表达量为0.41±0.09、0.36±0.06,与模型组相比表达量显著提高(P<0.001),与对照组表达量接近;低密度脂蛋白受体在心脏、肝脏内的相对表达量为0.04±0.02、0.18±0.04,与模型组比较未见显著变化。由此认为,组织内2种受体的mRNA表达量降低可促进动脉粥样硬化的发生;利维爱通过提高组织内雌激素受体mRNA的表达可防治AS的发生与发展,对低密度脂蛋白受体的mRNA表达影响较小。     

妊娠期小鼠下丘N-垂体-卵巢轴中PrRP和PrRP-R mRNA表达规律的研究

为探讨妊娠期小鼠下丘脑一垂体一卵巢轴中催乳素释放肽(PrRP)及其受体(PrRP-R)mRNA的表达规律,选用妊娠6、12、18 d小鼠(n=6),取下丘脑、垂体、卵巢组织,利用半定量PCR方法测定下丘脑-垂体-卵巢轴中PrRP和PrRP-R mRNA表达水平,另外利用放射免疫法(RIA)测定血浆孕酮(P)、雌二醇(E2)和催乳素(PRL)水平,探究下丘脑-垂体-卵巢轴PrRP和PrRP-R mRNA与血浆P、E2、PRL的相关关系.结果表明:妊娠期小鼠下丘脑、垂体、卵巢中都有PrRP、PrRP-R mRNA的表达,其中卵巢PrRP mRNA表达量较高,而下丘脑PrRP-R mRMA的表达量较高.妊娠期小鼠血浆P水平与垂体PrRP mRNA表达量呈显著负相关,而垂体PrRP mRNA与下丘脑PrRP-R mRNA表达量呈显著正相关,结果提示妊娠期m浆高水平的P可能通过抑制垂体PrRP mRNA的表达,进而作用于下丘脑参与妊娠相关调控.妊娠期小鼠血浆PRL水平与下丘腩、垂体、卵巢PrRP和PrRP-R mRNA的表达晕均无显著相关关系,提示血浆PRL水平可能小受上述组织PrRP的影响.     

体外成熟培养前后山羊卵泡发育相关基因及其受体表达特性的研究

为研究山羊卵母细胞体外成熟培养前后部分转移生长因子β基因及其受体表达特性,本试验以6~8周龄晋岚绒山羊母羔超数排卵获取的卵丘细胞-卵母细胞复合体为研究对象,应用Real time PCR技术检测成熟培养前后BMP15、GDF9、BMP6及其受体基因BMPRⅡ、TGFβRI和BMPRIB的表达差异。结果显示:山羊卵母细胞体外成熟培养后,卵泡发育相关的基因及受体基因中,BMP6 mRNA表达量显著增加(P0.05),BMPRⅡ、TGFβRI和BMPRIB的mRNA表达量极显著上调(P0.01),Ptgs2基因的表达量极显著下调(P0.01),BMP15和GDF9基因差异不显著(P0.05)。     

1,25(OH)2D3及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)₂D₃是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊，分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞，用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^-1 1,25(OH)₂D₃处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染，同时设置阴性对照组和空白对照组，每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)₂D₃处理以及VDR基因敲除后，分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达，用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明，1,25(OH)₂D₃能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD109tr1、gBD109tr2、gBD113...