生物矿化的口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫原性评价

生物矿化技术可以增强口蹄疫(foot-and-mouth, FMD)病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)的耐热性，但并无试验数据支撑矿化FMD VLPs用于临床的可行性。本研究旨在评价矿化FMD VLPs疫苗在牛和猪上的免疫原性。用VLPs和矿化VLPs免疫猪，采用液相阻断ELISA(LPBE)检测猪血清中的特异性抗体滴度，并经酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测免疫猪外周血淋巴细胞(PBLs)经体外刺激后分泌的特异性IFN-γ。用矿化A型VLPs、矿化O型VLPs、矿化的A型和O型二价VLPs分别免疫牛，采用LPBE、中和试验、夹心ELISA检测血清中的特异性抗体、中和抗体以及IL-4和IFN-γ的含量。结果显示，VLPs与矿化VLPs免疫猪的血清抗体水平无显著差异，相对于VLPs,矿化VLPs免疫猪的PBLs分泌的IFN-γ水平高于VLPs免疫猪(P<0.05);3种疫苗免疫牛血清中IL-4和IFN-γ水平均高于PBS组，矿化二价疫苗与相应的矿化单价疫苗免疫牛的血清特异性抗体和中和抗体效价均无显著差异。综上所述，矿化VLPs对牛和猪均具有良好的...     

猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验

为了更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与灭活疫苗免疫后抗体水平之间的差异．在梅小市选择2个规模化养猪场,每个猪场分2组,对试验猪分别免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型灭活疫苗．对接种疫苗的试验猪进行免疫应激观察,结果显示：注射合成肽疫苗试验猪未出现不良免疫副反应．说明用合成肽疫苗临床使用的安全性较高;采用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验分别对使用上述两种口蹄疫疫苗免疫21d后的猪血清进行检测,结果表明：免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒检测．抗体阳性合格率达到92．50％,免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗用正向间接血凝试验检测,免疫合格率为35．83％,说明猪口蹄疫O型合成肽疫苗接种后的免疫效果明显优于传统灭活疫苗。     

磷酸钙作为O型口蹄疫多肽疫苗佐剂的研究

为了探索磷酸钙(calcium phosphate,CaP)作为多肽疫苗佐剂的可行性,本研究以O型口蹄疫多肽疫苗为抗原,采用共沉淀法制备CaP-多肽复合物,测定包封率。将制备好的疫苗,分别在0、14、28 d腹腔注射免疫Wistar大鼠,尾静脉采血检测口蹄疫抗体水平。结果显示,CaP可包裹一定量的O型口蹄疫多肽,包封率达到50%,免疫大鼠后油佐剂组抗体效价在14 d达到26,42 d增至210并可维持35~42 d;CaP组在21 d后陆续产生抗体,抗体水平较油佐剂低,为27~28。结果表明,CaP作为佐剂相对游离多肽可以提高O型口蹄疫多肽疫苗免疫效果,但抗体水平相对油佐剂低。     

规模猪场不同日龄仔猪O型和A型口蹄疫母源抗体消长规律及免疫效果监测

猪O型口蹄疫是政府强制免疫的动物疫病之一,而A型口蹄疫也明确规定根据各省的评估结果进行自行免疫。对猪场进行科学免疫是防控猪口蹄疫病毒感染的重要途径,为确定猪场口蹄疫疫苗的首免时间,以及掌握猪口蹄疫O/A二价灭活苗(O/HB/HK/99株+AF/72株)的免疫效果及应用,试验采用口蹄疫病毒O型/A型特异性抗体固相竞争ELISA(SPCE)检测试剂盒对不同日龄阶段仔猪母源抗体进行检测。结果显示:猪O型口蹄疫在7日龄后抗体水平可达到有效保护,21日龄左右达到最高水平,持续到50日龄左右抗体阳性率下降到50%;猪A型口蹄疫的母源抗体变化规律同O型,但同一日龄抗体水平均低于O型,在43日龄左右抗体阳性率便下降到了50%。结合两种母源抗体检测情况,在45日龄左右进行首免比较合适。同时通过对免疫后抗体水平的检测显示,90日龄后两种抗体阳性率均持续在77.8%以上,但口蹄疫O型在58～70日龄抗体阳性率只有66.7%,可能是该场首免时间太早,因此建议将该场首免时间调整到45日龄,同时3次免疫可确保猪对猪口蹄疫O型和A型野毒的抵抗力,能较好防止口蹄疫疫情的发生。     

四种试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体的对比试验

使用国产的4种猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒(VP1-ELISA)、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒(LB-ELISA)、猪口蹄疫正向间接血凝试剂盒、猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒(O-ELISA)同时检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清样品,阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同时使用农业部规定的3种试剂盒分别检测20份血清样品的抗体滴度发现,VP1-ELISA试剂盒和LB-ELISA试剂盒阳性符合率为95%,平均抗体滴度相差0.7,与IHA试剂盒符合率为55%,平均抗体滴度相差3.8,故LB-ELISA试剂盒可以用来评价合成肽疫苗免疫的抗体,而IHA试剂盒不能用来检测合成肽疫苗免疫的抗体。     

五种牛羊口蹄疫疫苗免疫效果评价试验

疫苗免疫是防控口蹄疫的重要措施,我国对口蹄疫采取强制免疫政策。本试验在使用环节抽取了5批牛羊口蹄疫疫苗,按照国家口蹄疫免疫方案和疫苗说明书对30日龄左右的羔羊进行了两次免疫,抗体监测结果显示：二免后O型口蹄疫抗体合格率均在80%以上,Asia I型口蹄疫抗体合格率均高于75%,A型口蹄疫抗体合格率均高于70%,免疫效果均达到农业部规定的要求。     

口蹄疫纳米乳疫苗免疫持续期的试验研究

试验用同一批次相同抗原含量的口蹄疫病毒灭活抗原,分别采用纳米乳佐剂和ISA206佐剂配制口蹄疫O型、A型双价灭活疫苗,并对仔猪进行免疫,免疫后6个月内用液相阻断ELISA方法检测O型、A型免疫抗体效价(lg)。结果:免疫后6个月内纳米乳疫苗免疫猪产生的抗体lg平均值均高于ISA206佐剂疫苗,抗体水平在免疫后1个月达到最高。免疫后第6个月,纳米乳疫苗O型抗体lg平均值为2.19,A型抗体lg平均值为2.175,按液相阻断ELISA试剂盒的判定标准免疫猪抗体lg≥1.8,具有99%以上保护效力,纳米乳疫苗属于完全保护范围,而ISA206佐剂疫苗属于不完全保护范围。     

西藏牦牛O型、AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫抗体效价分析

为调查口蹄疫疫苗对西藏牦牛的免疫保护情况,应用口蹄疫液相阻断ELISA方法对随机选取的西藏五区一市844头牦牛的血清进行O型、AsiaⅠ型口蹄疫抗体水平检测。结果显示,西藏地区牦牛口蹄疫O型、AsiaⅠ型疫苗抗体具有50%以上保护力的比例分别为83.44%、71%,口蹄疫疫苗免疫状况良好,但西藏同一地区不同县、市的牦牛口蹄疫疫苗免疫情况存在较大差异。     

奶牛AsiaⅠ-O型口蹄疫双价灭活疫苗免疫程序对比试验

本试验分4组进行了AsiaⅠ-O型口蹄疫疫苗免疫效果对比试验,结果表明,AsiaⅠ-O型FMD双价灭活疫苗对奶牛O型口蹄疫免疫效果好,一次免疫180d后还有较高的保护抗体;对奶牛AsiaⅠ型口蹄疫免疫效果差,抗体水平很难维持较高水平和较长时间。首免40d后加强免疫1次,以后每间隔4个月免疫1次,这种免疫程序比较适合衢州地区的奶牛口蹄疫免疫。     

抗原浓缩纯化工艺对口蹄疫灭活疫苗免疫效果评价

为增强牛口蹄疫O型、Asia-Ⅰ型二价灭活疫苗免疫效果,本试验应用超滤技术浓缩口蹄疫(FMD)抗原来制备浓缩疫苗,通过免疫血清学检测及本动物攻毒保护试验来评价所制疫苗效果.结果显示,浓缩抗原疫苗安全检验合格,全剂量(2 mL)、1/3剂量(0.67 mL)、1/9剂量(0.22 mL)组牛血清抗体水平均较常规疫苗有显著提升(P＜0.05),阳转率高于常规灭活疫苗;本动物攻毒保护试验效果明显,Asia-Ⅰ型、O型抗原PD50值分别达到了每剂12.51和10.32.结果表明,应用超滤技术浓缩FMD抗原可提高FMDV二价灭活疫苗的免疫效果.     

猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验

使用猪O型口蹄疫合成肽疫苗与猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫30-40日龄商品猪,免疫采用正向间接血凝试验、液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA检测免疫前和首次免疫后14d、28d、35d、42d、56d及二次免疫后7d、14d、28d抗体水平。同时,对接种疫苗的实验猪进行免疫应激观察。结果显示:注射合成肽疫苗试验猪未出现不良免疫副反应;采用正向间接血凝试验检测,两种疫苗免疫抗体合格率差异不显著;运用液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA进行检测,注射合成肽疫苗试验猪二免7d后抗体水平快速上升,抗体检测合格率达到73%-100%。与注射高效灭活苗组比较表明:合成肽疫苗临床使用的安全性较高,免疫抗体合格率明显优于猪O型口蹄疫高效灭活苗。     

青海省4县市牦牛藏羊O型口蹄疫疫苗免疫抗体水平监测报告

为掌握牦牛、藏羊在注射O型口蹄疫灭活疫苗后产生的抗体水平及消长趋势，2022年2～12月在青海省牦牛、藏羊4个主产县每月采集血清样品，采用液相阻断ELISA方法进行了O型口蹄疫(FMD)免疫抗体水平监测。结果显示牦牛群体中O型口蹄疫免疫抗体水平全年都处于较高水平，O型口蹄疫抗体平均合格率为83.4%,藏羊群体O型口蹄疫抗体平均合格率为59.8%。其中5～6月和11～12月集中注射疫苗后1个月牦牛、藏羊群体的平均抗体水平达到最高，以后逐渐降低，3～4月和8～9月达到最低值。     

五省牛、羊和猪口蹄疫疫苗免疫效果的试验

为了监测O、A和AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫后引起的抗体水平,采用口蹄疫液相阻断ELISA法和病毒非结构蛋白3ABC-ELISA法对我国云南、内蒙古、甘肃、新疆和西藏的部分地区牛、羊和猪的血清样品共65591份进行三型口蹄疫抗体水平监测。液相阻断ELISA方法显示加强免疫后各地合格率均能达到100%;非结构蛋白3ABC-ELISA方法显示五省抗体检测合格率分别为91.13%、88.38%、78.04%、88.15%和85.15%;不同动物口蹄疫分型抗体检测结果以云南最高(均在85%以上),其它四省抗体检测合格率均在70%以上。结果表明,该疫苗免疫可产生较好的免疫效果。     

猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测

为了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,选用了两个厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗,对80头试验仔猪进行了免疫注射,并在6、7、8、9、11、13、20周龄采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体;疫苗的免疫副作用小;使用VP1ELISA和LPB-ELISA检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好。     

不同猪口蹄疫O型疫苗免疫效果的对比试验

为研究猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果,试验选择40~45日龄保育猪160头,随机分为两组,分别注射猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型灭活疫苗,免疫后25 d采集血清、检测抗体效价。结果表明,合成肽疫苗组抗体合格率为90%,出现应激反应的比例为0;灭活疫苗组抗体合格率为75%,出现应激反应的比例为3.75%。结论:注射猪口蹄疫O型合成肽疫苗比灭活疫苗的效果好、出现应激反应的仔猪少。     

不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测方法评估

为更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果与合理的检测方法,广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场在某肥育场进行了此次试验。试验猪分3组,分别注射不同厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型OS／99株灭活疫苗,并采用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验（HI）分别对使用上述口蹄疫疫苗免疫效果进行检测。结果表明,猪注射口蹄疫O型合成肽疫苗后,用猪0型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率达到100％;用正向间接血凝试验方法检测不到注射合成肽疫苗后产生的抗体效价。免疫猪口蹄疫O型OS／99株灭活疫苗后,用VP1抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率只有30％;用HI方法进行检测,抗体阳性率为60％。     

通过检测非结构蛋白抗体评价口蹄疫疫苗纯度的研究

为探索通过检测非结构蛋白(NSPs)抗体的方法评价口蹄疫疫苗纯度的可行性,用不同纯化工艺制备口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活疫苗,重复免疫牛至少3次后,定期检测NSPs的ELISA抗体并统计分析抗体情况。结果显示,高度纯化疫苗组的NSPs抗体阴性率远高于普通纯化疫苗组,表明通过检测NSPs抗体评价口蹄疫疫苗纯度可以作为质量控制的一种方法。     

口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病3种疫苗不同组合对猪的免疫效果评价

为探索口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)和高致病性猪蓝耳病(HP-PRRS)3种疫苗以不同组合方式对猪免疫的效果,选择广西玉林市非疫区2个小型本地品种猪场,40日龄左右仔猪各75头,随机分成5组,对3种疫苗的5种免疫组合方式分别进行了免疫试验,检测免疫后各时间点FMD、CSF和HP-PRRS的抗体水平和免疫副反应情况,对不同免疫组合方式的免疫效果进行评估。结果表明,先免疫FMD和CSF疫苗,7 d后再免疫HP-PRRS疫苗的免疫组,免疫后3种疫病的抗体水平和免疫副反应情况均优于其他组,说明该免疫组合方式适合在玉林市农村散养猪中推广应用。     

木鳖子提取物对Asia Ⅰ-O型口蹄疫双价灭活苗的免疫佐剂作用

分别将2 500、500、100、20μg的木鳖子提取物(ECMS)或100 μg皂树皂甙(QA)和Asia Ⅰ-O型口蹄疫(FMD)双价灭活苗混合免疫豚鼠,以不另加佐剂的疫苗为对照组,于二免后3、6、10、14周采血并分离血清,观测血清中抗O型FMDV的抗体滴度、抗O型FMDV VP1结构蛋白抗体水平和抗Asia Ⅰ型FMDV的抗体水平.结果显示,当ECMS剂量等于或少于500 μg时,ECMS和FMD双价灭活苗混合免疫豚鼠,未见不良反应;疫苗中加入ECMS和QA后,则诱导更高的抗O型FMDV抗体滴度、抗O型FMDV VP1结构蛋白抗体和抗Asia Ⅰ型FMDV抗体水平,尤其ECMS100 μg组和QA 100 μg组(P＜0.01)或(P＜0.05);且ECMS 100 μg组抗体水平高于QA 100 μg组.本研究结果提示ECMS可作为FMD灭活疫苗的候选佐剂.     

规模猪场不同口蹄疫疫苗的免疫效果试验

为比较猪场不同口蹄疫疫苗的免疫效果,选择健康仔猪134头,选用猪口蹄疫O型合成肽疫苗及由政府招投标的3家公司生产的猪口蹄疫(O型Ⅱ)灭活疫苗进行免疫效果试验。经试验,134头健康仔猪在60日龄、90日龄、120日龄分别注射不同种类的疫苗,于免疫后30 d抽取血样进行抗体检测。结果表明,经二免后的抗体合格率均能达到农业部规定的抗体合格率≥70%要求,表明采用O型合成肽疫苗及不同厂家生产的O型Ⅱ灭活疫苗经二免后猪群都能产生良好的抗体保护率。