大熊猫粪便菌群ERIC-PCR指纹图谱的分析及优势菌群的鉴定

探讨1只野生大熊猫和不同年龄段圈养大熊猫粪便菌群的多样性和相似性,并鉴定野生大熊猫圈养之后,其粪便中的优势菌群.对来自3个年龄段9只(3只亚成体、3只成年体、3只老年体)圈养大熊猫及1只野生大熊猫圈养前、后的11份粪便细菌的DNA进行ERIC-PCR指纹图谱分析,并利用16S rRNA基因序列分析对优势菌条带进行鉴定.结果显示:该只野生大熊猫粪便菌群多样性比圈养大熊猫丰富;圈养大熊猫粪便菌群多样性:成年体＞亚成体＞老年体;16s rRNA和ERIC-PCR指纹图谱优势条带鉴定的优势菌结果有差异性.结果表明:大熊猫的肠道菌群多样性易受生长环境、年龄因素的影响;其次, 不同年龄段的圈养大熊猫,其肠道菌群的相似性与年龄因素不相关;利用ERIC-PCR指纹图谱优势条带鉴定优势菌的方法有一定的局限性.     

圈养老年大熊猫肠道菌群16SrDNA克隆文库的建立

为了研究老年大熊猫肠道菌群的构成,本试验对3只圈养老年大熊猫粪便细菌构建16S rDNA克隆文库,采用限制性内切酶Hinf Ⅰ、Msp Ⅰ对其进行限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)及测序分析.结果显示,老年大熊猫肠道细菌主要由变形菌门和厚壁菌门组成;变形菌门中又以大肠埃希氏菌属为主,其次为假单胞菌属、志贺氏菌属、气单胞菌属;而厚壁菌门中以链球菌属为主,其次为魏斯氏菌属、梭菌属;此外还发现一定比例的未培养细菌.本试验第一次建立了较丰富的老年大熊猫肠道菌群的克隆文库,为分析比较各年龄层大熊猫的肠道菌群结构的异同提供了参照,也为合理饲喂老年大熊猫,保障老年大熊猫的健康提供重要信息.     

大熊猫铜绿色假单胞菌感染诊断

北京动物园1只大熊猫腹泻,粪便呈浅红色、带粘液和胶冻样.经对粪便作细菌培养,分离出铜绿色假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).该菌对多种抗生素不敏感,对小白鼠有较强的致病力,是引起本次大熊猫腹泻的病原菌.介绍如下.     

大熊猫不动杆菌病的病原鉴定

成年雄性大熊猫患病死亡，剖检：心、肝、肺肿大郁血，伴有胸水和腹水，从心、肝、肺、脾、肾和胸水中分离到纯粹的醋酸钙不动杆菌，该菌在加有1％醋酸钙的肉汤中培养后增菌1倍，该菌对丁胺卡那霉素、磺胺等敏感，对青霉素不敏感。不动杆菌为机会致病菌，广泛分布于自然界，少有致病性，但该菌株毒力很强，以0.001ml菌液腹腔注射小白鼠于20h内死亡，该菌是卢大熊猫死亡的致病菌。     

大熊猫幼仔尸体组织LDH同工酶酶谱分析

利用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法对产后30小时死亡的大熊猫幼仔的七种组织(心肌、肝、肾、骨骼肌、肺和肾上腺)的LDH同工酶的酶谱进行了分析。结果显示,其酶谱与成体大熊猫尸体组织的酶谱基本一致,也呈现出明显的组织特异性。同时进一步提供了七种组织对应酶带的迁移率基本一致,幼仔肝脏的LDH_2含量较多及小肠的LDH同工酶酶谱等新资料。此外实验还证实经急冻(-20℃)保留一段时间的大熊猫幼仔组织器官的LDH同工酶酶谱较稳定,可做电泳分析。大熊猫(Ailuropoda melanleuca)是世界珍稀动物之一,我国的国宝。近年来,对大熊猫研究主要有野外生态调查、形态解剖、人工驯化及饲养繁殖,还有少量生化方面的研究,其中主要是血清学的研究。由于大熊猫的新鲜整体和组织材料难以得到,冯文和等曾对成体大熊猫尸体组织的LDH同工酶进行了研究。本文对出生后30小时死亡的大熊猫幼仔的七种组织的LDH同工酶进行分析,旨在探讨大熊猫幼仔与成体LDH同工酶酶谱的异同及整体冰冻贮存对组织同工酶的影响。     

圈养老年大熊猫肠道菌群16S rDNA克隆文库的建立

为了研究老年大熊猫肠道菌群的构成,本试验对3只圈养老年大熊猫粪便细菌构建16SrDNA克隆文库,采用限制性内切酶HinfⅠ、MspⅠ对其进行限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)及测序分析。结果显示,老年大熊猫肠道细菌主要由变形菌门和厚壁菌门组成;变形菌门中又以大肠埃希氏菌属为主,其次为假单胞菌属、志贺氏菌属、气单胞菌属;而厚壁菌门中以链球菌属为主,其次为魏斯氏菌属、梭菌属;此外还发现一定比例的未培养细菌。本试验第一次建立了较丰富的老年大熊猫肠道菌群的克隆文库,为分析比较各年龄层大熊猫的肠道菌群结构的异同提供了参照,也为合理饲喂老年大熊猫,保障老年大熊猫的健康提供重要信息。     

圈养大熊猫戊型肝炎病毒感染调查

采用ELISA、巢式RT—PCR、免疫组织化学等多种方法对北京动物园保存的大熊猫组织材料和部分现存活个体的粪便、血清等样品进行戊型肝炎病毒抗原调查。调查发现在死亡大熊猫肝脏组织中戊肝病毒抗原阳性检出率为88．9％（8／9）,肾脏的阳性检出率为85．7％（6／7）。现活体动物的粪便、血清抗原检查没有出现阳性结果。结果说明死亡大熊猫曾感染过戊型肝炎病毒,现有个体中没有戊肝病毒感染。     

野外放归大熊猫肠道菌群变化的研究

对四川卧龙中国保护大熊猫研究中心的一只野外放归亚成体大熊猫肠道菌群的组成和季节变化规律进行了研究,同时与其圈养双胞胎兄弟的肠道菌群进行了比较。从放归大熊猫粪便中分离出17种肠道菌,优势菌群为肠杆菌、肠球菌和乳杆菌。与圈养大熊猫相比,放归大熊猫肠道菌群中优势菌群的种类未发生改变,但是肠球菌数量增加,肠杆菌和乳杆菌的数量减少。研究发现放归大熊猫肠道菌群中的肠杆菌和肠球菌的数量随季节变化有较大波动,乳杆菌的数量随季节变化波动不大;而圈养大熊猫三种优势菌的数量随季节变化波动都不大。     

野外大熊猫内寄生虫病调查

大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)是我国特有的珍稀动物,近年来在死亡的大熊猫体内常发现大量施氏蛔虫(Ascaris schroederi)寄生,或进入胆管、胰脏,不仅影响大熊猫的生长发育,也是造成死亡的原因之一。为了摸清自然界野生大熊猫感染寄生     

圈养老年大熊猫肠道内菌群结构研究

为了研究圈养大熊猫肠道内菌群结构,试验采用高通量测序技术分析4只圈养老年大熊猫新鲜粪便中细菌和真菌组成,并对比分析不同年龄大熊猫肠道内的菌群结构。结果表明:在门水平上,圈养老年大熊猫粪便细菌主要由变形菌门(63.98%)、厚壁菌门(35.29%)组成,真菌主要由子囊菌门(46.82%)、担子菌门(2.18%)组成;在属水平上,细菌主要由大肠杆菌属(45.26%)、链球菌属(15.80%)、不动菌属(15.34%)、梭菌属(9.79%)和串珠菌属(5.93%)组成,真菌主要由腐质霉属(19.35%)、德巴利酵母属(15.82%)、镰刀菌属(2.91%)、曲霉菌属(1.51%)组成。不同年龄的大熊猫肠道内菌群组成存在差异,与亚成年、成年大熊猫相比,老年大熊猫肠道内细菌和真菌在门、属水平上组成相似,但细菌变形菌门丰度提高、厚壁菌门丰度降低,不动菌属丰度增加;真菌子囊菌门丰度提高、担子菌门丰度下降,德巴利酵母属丰度增加。     

大熊猫源肺炎克雷伯菌研究进展

近年来,肺炎克雷伯菌在圈养大熊猫中的耐药性不断上升,甚至出现多重耐药情况,对大熊猫健康构成了严重威胁。肺炎克雷伯菌感染可能导致出血性肠炎、泌尿道感染等多种疾病。随着大熊猫数量的增加和抗菌药物的广泛应用,肺炎克雷伯菌的耐药性问题日益显著。其致病机制涉及荚膜、脂多糖、菌毛及铁载体等多个因素,共同参与了该菌的定植和侵袭过程。从传统培养到现代分子检测,针对大熊猫肺炎克雷伯菌的病原鉴定和诊断技术变得简便快速、可靠性逐渐凸显。目前,积极开展抗菌药物研发,寻找新的治疗方案,探索中药和植物提取物等替代治疗方式,抑制细菌生长并减缓耐药性发展势在必行。笔者综述了国内外关于大熊猫肺炎克雷伯菌病原生物学特性、耐药现状及诊断和防治方法的研究成果。通过对现有文献的回顾和分析,为进一步控制和延缓耐药菌株的出现,以及耐药性的传播提供了新的思路,并为大熊猫源肺炎克雷伯菌的防控提供了有益参考。     

一例老龄大熊猫死亡后的实验室检验与体会

本研究通过对大熊猫"娟娟"进行病史调查,病理学检查,细菌与真菌学检验等方法,探究大熊猫"娟娟"的死亡原因。结果表明该只老龄大熊猫是由于年老体弱、全身多器官功能衰竭导致褥疮及微生物感染引起死亡。     

大熊猫肠道菌群年龄演替规律分析

本研究旨在探究不同年龄段大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)肠道菌群多样性、结构及功能的演替规律。于秦岭大熊猫研究中心采集16只不同年龄段大熊猫的新鲜粪便，基于16S rDNA高通量测序技术及层次聚类方法分为5个年龄组进行分析。结果表明，不同年龄段大熊猫共有优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes, 60.44%)和变形菌门(Proteobacteria, 38.69%),且随年龄增长，厚壁菌门的相对丰度逐渐增加，变形菌门的相对丰度逐渐降低；共有优势菌属为埃希菌属-志贺菌属(Escherichia-Shigella,57.35%)和狭义梭菌属1(Clostridium＿sensu＿stricto＿1,15.17%),且性别差异对大熊猫肠道菌群结构影响不大。不同年龄段大熊猫的肠道菌群Alpha多样性存在显著差异(P<0.05),呈现随年龄增长先增加后降低的趋势，在18～22岁达最高；Beta多样性结果表明，组间差异大于组内差异，不同分组对样品差异的解释具有可信度。13～14岁成年大熊猫特有的优势菌属——魏斯菌属(Weissella,9.975%)为肠道益生菌，34...     

引起大熊猫腹泻的克雷伯氏菌强毒株

引起大熊猫腹泻的克雷伯氏菌强毒株陈永林关孚时张成林１朱飞兵１张金国１中国兽药监察所北京１０００８１；１北京动物园北京动物园一只大熊猫经常出现腹泻和便血，从其发病期间的粪便中分离到一株毒力很强的肺炎克雷伯氏菌，用对该菌敏感的药物治疗后，大熊猫的疾病得到...     

不同年龄大熊猫肠道菌群及其酶活特征分析

旨在探究年龄对大熊猫个体肠道微生态的影响。本研究采集大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)(J_1(亚成年大熊猫个体)、J_2(成年大熊猫个体)、J_3(老年大熊猫个体))的新鲜粪便,基于16S rRNA基因技术,测定不同年龄的大熊猫个体肠道细菌组成,分析其物理和化学特征及酶活特异性,利用冗余分析(redundant analysis,RDA)分析大熊猫肠道微生物菌群丰度与其环境因子之间的关系。结果表明:在门水平上,变形菌门的相对丰度随着年龄的增加而升高,厚壁菌门的相对丰度随着年龄的增加而降低;在属水平上,链球菌属的相对丰度随着年龄的增加而降低;淀粉酶和纤维素酶的酶活力在J_2肠道最高,淀粉酶活力在J_3肠道最低,纤维素酶活力在J_1肠道最低,蛋白酶活力在J_1肠道最高,在J_3肠道最低;厚壁菌门和拟杆菌门的相对丰度均与淀粉酶活力和还原糖含量呈正相关,变形菌门的相对丰度与还原糖含量和氨基酸含量呈负相关。研究表明,不同年龄大熊猫个体的肠道微生物菌群的表现特征不同,其肠道细菌优势菌的相对丰度与其消化酶等环境因子存在相关性;建议需对亚成年大熊猫加强饮食和生活环境管理,并可以通过添加益生菌等方式加强对老年大熊猫肠道健康的管理。     

大熊猫源杯梗孢属真菌(Cyphellophora pluriseptata)的分离鉴定与致病性研究

为探究大熊猫真菌性皮肤病的病因,取发生肉芽肿大熊猫患部的皮屑、被毛进行真菌学检查和病原分离。采用沙氏培养法对采集的皮屑和毛发样品进行分离纯化,对分离株进行形态学、分子生物学鉴定和小鼠致病性试验及药敏试验。结果显示,从样品中分离到一株真菌(JYZ030101)。对分离株JYZ030101的ITS区进行PCR扩增获得长度为617 bp片段,经Blast比对结果显示该序列与杯梗孢属真菌Cyphellophora pluriseptata的相似性为99%。结合形态学和分子生物学方法将分离菌鉴定为C.pluriseptata。动物致病性试验显示该菌对小鼠有选择性致病作用。药敏试验显示该菌对特比萘芬、两性霉素B、伊曲康唑和氟胞嘧啶耐药,对氟康唑、伏立康唑敏感。本研究为诊断和治疗C.pluriseptata引起的大熊猫真菌性皮肤病提供重要参考。     

第二次全国保护抢救大熊猫工作汇报会召开

1984年12月12日至16日在兰州市召开第二次全国保护抢救大熊猫工作汇报会。林业部副部长董智勇、林政保护司副司长李贵令、甘肃省人民政府等120多名代表参加了会议。自1983年5月,根据各地汇报,共抢救病饿大熊猫30只,其中救活21只,有13只已放回野外,余下8只仍在护养中,抢救无效死亡9只。另外,还在野外发现病饿和自然死亡大熊猫尸体33只。据材料初步统计,大熊猫分布区共有各种竹林资源966.2万亩,开花枯死     

亚成体大熊猪细菌性败血症的病理学观察

对１只由病原性大肠埃希氏菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）和肺炎克雷白氏菌（Ｋｌｅｂｓｉｉｅｌｌ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）混合感染引起急性细菌性败血症死亡的亚成体大熊猫进行了病理解剖学和病理组织学观察,眼观可见心包积液,心内膜和心外膜有出血点;肺有萎隐灶和气肿灶,坛气管内有较多粘液样物质肝肿胀、质脆,有小坏死灶;脾肿用成败血脾;胃底部有溃疡,肠道扩张充气,淋巴结红肿。病理学检查,内脏器官主要表现     

圈养大熊猫食性转换前期肠道细菌多样性

为了探讨大熊猫食性转换前期肠道菌群的多样性与差异性。对3只处于夏季食性转换前期大熊猫粪便细菌总DNA进行ERIC—PCR分析,并构建16SrDNA克隆文库,采用限制性内切酶HinfI、MsPI对其进行RFLP（restric—tionfragmentlengthpolymorphism）及测序分析。研究表明,食性转换前期大熊猫肠道细菌主要由硬壁菌门和变形菌门组成。其中7月份样品中以梭菌属和醋杆菌属为主;8月份以八迭球菌属和埃希氏菌属为主;9月份以链球菌属和埃希氏菌属为主。此外在3个月中均发现一定比例的未培养细菌。结果表明：随着食性转换前期的过渡,大熊猫肠道菌群发生了改变。由硬壁菌门中的梭菌属渐变到以球菌属为主,由变形菌门的醋杆菌属渐变到以肠杆菌为主。     

不同年龄大熊猫肠道菌群及其酶活特征分析

旨在探究年龄对大熊猫个体肠道微生态的影响。本研究采集大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）（J₁（亚成年大熊猫个体）、J₂（成年大熊猫个体）、J₃（老年大熊猫个体））的新鲜粪便,基于16S rRNA基因技术,测定不同年龄的大熊猫个体肠道细菌组成,分析其物理和化学特征及酶活特异性,利用冗余分析（redundant analysis,RDA）分析大熊猫肠道微生物菌群丰度与其环境因子之间的关系。结果表明：在门水平上,变形菌门的相对丰度随着年龄的增加而升高,厚壁菌门的相对丰度随着年龄的增加而降低;在属水平上,链球菌属的相对丰度随着年龄的增加而降低;淀粉酶和纤维素酶的酶活力在J₂肠道最高,淀粉酶活力在J₃肠道最低,纤维素酶活力在J₁肠道最低,蛋白酶活力在J₁肠道最高,在J₃肠道最低;厚壁菌门和拟杆菌门的相对丰度均与淀粉酶活力和还原糖含量呈正相关,变形菌门的相对丰度与还原糖含量和氨基酸含量呈负相关。研究表明,不同年龄大熊猫个体的肠道微生物菌群的表现特征不同,其肠道细菌优势菌的相对丰度与其消化酶等环境因子存在相关性;建议需对亚成年大熊猫加强饮食和生活环境管理,并可以通过添加益生菌等方式加强对老年大熊猫肠道健康的管理。