原料乳中耐冷假单胞菌的种类及其肽酶活力

在冷藏的原料乳中,假单胞菌经常出现并成为主导菌群,其分泌的耐热酶会使原料乳变质。对从原料乳中分离的102株假单胞菌经rpoB基因测序进行菌种分析,用偶氮酪蛋白测试所有假单胞菌在2种培养条件(30℃培养2d或6℃培养8d)下胞外肽酶的蛋白水解活性和耐热性。结果表明:荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)是假单胞菌中最主要的菌种,其次是莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi)和假单胞菌sp1 (Pseudomonas sp1)。不同假单胞菌菌种之间的产肽酶能力存在明显差异。大多数荧光假单胞菌(23/41)在不同温度(30℃和6℃)条件下培养后能产肽酶,而大多数的假单胞菌sp1不产肽酶,所有分离的莓实假单胞菌(13/13)只在6℃条件下产肽酶,大多数的假单胞菌所产肽酶都有热稳定性。在6℃培养条件下,荧光假单胞菌菌株M02有最高肽酶活力(11.78ΔA/ (h·mL)),其胞外肽酶最佳催化pH值为6.5,最佳催化温度为40℃。当M02的接种浓度为103 CFU/mL时,6℃培养5d就能使脱脂乳溶液产生沉淀。对耐冷假单胞菌的种类和产肽酶能力进行分析和考察有助于提高原料乳或乳制品的质量和安全性。     

沼泽红假单胞菌发酵培养的研究

沼泽红假单胞菌是目前光合细菌中应用和研究得较为广泛的光合细菌之一。通过对沼泽红假单胞菌的生长条件进行研究,发现pH值、温度、接种量等影响沼泽红假单胞菌的生长,并且它们之间又相互影响。经过单因素试验得出:在酵母膏浓度为0.25%、光照强度为5625Lx、pH值为6、接种量为10%、培养温度为25～30℃的条件下,沼泽红假单胞菌的生长态势最好。     

沼泽红假单胞发酵培养的研究

沼泽红假单胞菌是目前光合细菌中应用和研究得较为广泛的光合细菌之一.通过对沼泽红假单胞菌的生长条件进行研究,发现pH值、温度、接种量等影响沼泽红假单胞菌的生长,并且它们之间又相互影响.经过单因素试验得出在酵母膏浓度为0.25%、光照强度为5 625 Lx、pH值为6、接种量为10%、培养温度为25～30℃的条件下,沼泽红假单胞菌的生长态势最好.     

粗状假丝酵母产脂肪酶催化特性及水解猪油的初步研究

通过比较,研究了粗状假丝酵母诱变株产脂肪酶催化水解不同底物的相对活力,包括低级酯、脂肪酸甘油酯和天然油脂。并对粗状假丝酵母产脂肪酶催化水解猪油反应中的pH值、温度、时间、加酶量、乳化剂用量和Ca2+浓度等因素进行了研究,得出pH值为7.5、温度为45℃、水解反应时间为72h、加8ml粗酶液、2%油的乳化剂、Ca2+浓度为75mmol/l时,猪油有最佳水解率。通过对该酶反应动力学进行研究得出其水解反应的米氏常数Km为12.25×10-3mol/l和最大反应速率Vmax为11.14μmol/min。     

β-甘露聚糖酶的酶学性质研究

采用DNS法对黑曲霉产的β-甘露聚糖酶的酶学性质进行了研究。研究结果表明：该酶的最适反应温度为65℃;具有较强的耐热性,在温度为80℃和90℃处理10min仍有超过90％的活性;最适pH值为4．0,在pH值2．0—7．0的范围内,相对酶活保持在80％以上。该酶在最适反应温度、稳定性能等方面表现优良,适于作饲用添加剂。     

大理弥渡热泉耐热脂肪酶产生菌的筛选及其酶活性研究

从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的43℃底泥中筛选到1株高温脂肪酶的高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为不动杆菌属(Acinetobacter sp.)的一株菌,命名为Acinetobacter sp.Lip-43。对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃。所产脂肪酶最适酶活温度为45℃,最适反应pH为5.0。在37℃以下,能保持良好的稳定性,Zn^2+和Ca^2+对该酶有一定的抑制作用,Mn^2+、K^+、Mg^2+、Fe^2+、Cu^2+均对该酶活力起到促进作用,其中Mn2+的促进效果最为明显。     

苜蓿根腐病菌(Fusarium solani)生物学特性研究

主要研究了温度、湿度、pH值、光照、营养对苜蓿根腐病菌(Fusarium solani)生长、产孢和孢子萌发的影响.该病菌菌丝生长的温度范围为8～38℃,最适20～28℃;产生分生孢子的温度范围为10～38℃,最适25℃;分生孢子萌发的温度范围为8～38℃,最适25～32℃.在pH值5～10的范围内该菌均能生长和产孢,菌丝生长最适pH值5～9;分生孢子产生和萌发最适pH值6～7.分生孢子在饱和湿度或水滴中萌发快,相对湿度低于85%时不能萌发.光照处理对该菌生长无显著影响.分生孢子的致死温度为50℃,10 min或55℃,5 min,菌丝体的致死温度为60℃,30 min或65℃,5 min.     

微生物酶和小牛皱胃酶凝乳特性的研究

以黑白花奶牛的新鲜奶为原料,研究了微生物酶和小牛皱胃酶的最适作用温度、热稳定性、酸度影响、pH稳定性、金属离子及有机溶剂的影响.结果表明微生物酶和小牛皱胃酶的最适作用温度分别为65℃和60℃;两种酶在温度分别低于50℃和45℃时,热稳定性较好;二者的活力随酸度增加而上升,并且在pH值为4时其稳定性最好;Ca2+、Fe2+是两种酶的激活剂,Cu2+是二者的抑制剂,Na+、Mg2+对二者无显著影响;丙酮有一定的促凝乳作用.     

产纤维素酶芽孢杆菌的诱变和酶学性质研究

为提高芽孢杆菌产纤维素酶的活性,以实验室保存的产纤维素酶枯草芽孢杆菌作为出发菌株,利用紫外线对其进行诱变处理,采用刚果红染色法初筛和3,5-二硝基水杨酸法进行复筛,并对其酶学性质进行初步研究.结果表明:诱变后突变株的纤维素酶活力较出发菌株提高4.476倍.该纤维素酶的最适pH为6.0,且在pH 5.0～7.0酶活力较稳定;该酶的最适酶促反应温度为60 ℃,在无底物保护且水浴30 min的条件下,酶活力在30～65 ℃保持稳定;此外,金属离子K+和Ba2+对酶活力有激活作用,相对酶活分别为108.11％和105.43％,而金属离子Ca2+和Cu2+对酶活性有抑制作用,二者的相对酶活分别为93.80％和89.08 ％.     

脂肪酶产生菌的筛选、诱变及产酶条件的研究

从长春市油脂厂采集的土壤样品中分离到1株脂肪酶活力较高的白地霉1522(其发酵液酶活力为35U/mL)。以此为出发菌株,经紫外线、氯化锂、盐酸羟胺、亚硝基胍等诱变筛选后,获得1株高活力脂肪酶产生菌N79(其发酵液酶活力达80U/mL)。对诱变株N79最适培养条件的研究表明,其最适培养基组成为:蛋白胨4%,山梨醇0.75%,橄榄油0.5%,MgSO4·7H2O 0.1%;产酶最适发酵条件是,培养液起始pH为6.0～6.5,发酵温度为26～30℃,通气量为每250mL三角烧瓶中盛培养液30mL,发醇时间为32～36h。在量适培养条件下,其发酵液酶活力可达到105-115U/mL。白地霉N79的发酵液经硫酸铵盐析制得脂肪酶粗制品,它在聚乙烯醇橄榄油乳化液系统中,水解橄榄油的最适pH为7.8,最适温度为42℃,在pH4-8、4℃下存放24h及pH7.5、40℃下保温15min,酶活力不变。     

家蚕丝素-RGD融合蛋白的盐析纯化工艺探讨

利用基因重组技术合成了具有良好细胞粘附活性的重组家蚕丝素-RGD融合蛋白质(Silk-RGD),探讨了其盐析的工艺条件。研究发现,在融合蛋白等电点pH8附近,当硫酸铵在溶液中的饱和度较低(10%)时,其蛋白质沉淀量随着温度的升高而增加;当硫酸铵的饱和度升至20%时,蛋白质沉淀量不再随着温度的变化而变化,但与低饱和度硫酸铵时相比,沉淀量明显增加;当硫酸铵的饱和度升至30%或以上时,沉淀中杂蛋白含量明显增多,不利于目的蛋白的纯化。Silk-RGD融合蛋白相对合理而且易操作的盐析纯化条件为:pH8,硫酸铵在溶液中的饱和度为20%,室温(约20℃)。利用该工艺条件,可以低成本、高效率地生产Silk-RGD融合蛋白,从而满足新型材料规模化开发的需要。     

日本鳗鲡及其僵鳗消化酶活性的比较研究

本试验旨在比较不同反应温度下日本鳗鲡(Anguilla japonics)及其僵鳗消化酶活性的差异.试验选取正常生长的日本鳗鲡(126.4～140.2g/尾)以及生长缓慢的僵鳗(3.5～8.6 g/尾)各20尾,取肝胰脏、胃、肠,分别在5、15、25、30、35、40、45和55℃反应温度下测定肝胰脏、胃、肠中蛋白酶、...     

果叶兼用多倍体新桑品种嘉陵30号多酚氧化酶(PPO)酶学特性研究

本文以人工四倍体新桑品种嘉陵30号为供试材料,以邻苯二酚为作用底物,用紫外分光光度吸收法,测定不同pH、反应温度、底物浓度等对多酚氧化酶活性的影响.实验结果表明,嘉陵30号的多酚氧化酶对光的最大吸收波长为410nm,PPO酶活力为0.032nm/min,最适底物浓度为均0.4mol/L,最适pH为4.0,最适温度为25...     

珠芽蓼内生细菌ZA1的抑菌物质产生条件的优化及其稳定性测定

从珠芽蓼中分离的内生细菌ZA1对马铃薯坏疽病菌具有良好的抑菌效果,鉴定为莫海威芽孢杆菌。本文通过平板对峙法对ZA1分泌物抑制马铃薯坏疽病菌的培养条件进行了优化,并对ZA1抑菌粗提物的稳定性进行了测定。结果表明,ZA1的最佳培养基为B培养液,最佳发酵温度为17.8℃,培养基的最佳pH是6.9,150 mL三角瓶的最佳装液量为20 mL,最佳培养方式为暗处理振动培养96 h,经对ZA1进行优化培养,其对马铃薯坏疽病菌的EC₅₀=0.1228 μL/mL,是优化前EC₅₀=4.5888 μL/mL的37倍。ZA1的抑菌粗提物90℃下处理2 h,其相对活性达到76.62%,具有耐高温的特性;对紫外线照射30 min后相对活性差异不明显; pH为3和11时,其相对活性分别为92.87%和85.11%;对蛋白酶和Ag⁺、Cu²⁺、Zn²⁺和Fe³⁺等金属离子不敏感,经Ag⁺处理后的相对活性可达到86.93%。     

地衣芽孢杆菌CP-16脂类水解酶的研究

本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CP-16的脂类水解酶,并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板,扩增脂类水解酶基因,转化入大肠杆菌中表达,获得重组酶L-4。研究重组酶L-4的适宜p H、p H稳定性、适宜温度、温度稳定性以及有机溶剂和金属离子对其相对活性的影响,同时探究其对角蛋白酶K水解天然羽毛角蛋白的作用。结果显示,获得的脂类水解酶基因大小为747 bp,编码248个氨基酸,在大肠杆菌中成功表达出重组酶L-4,其分子质量约为28.3 ku,酯酶活性为0.42 U/m L,适宜p H为6.5,适宜温度为50℃;在p H 6.5~9.5条件下处理30 min相对活性保持80%以上,在低于50℃温度条件下处理30 min相对活性保持70%以上。二价铁离子(Fe~(2+))、钠离子(Na~+)、锰离子(Mn~(2+))、钙离子(Ca~(2+))对重组酶L-4相对活性具有激发作用,钡离子(Ba~(2+))、锌离子(Zn~(2+))、铜离子(Cu~(2+))、镍离子(Ni~(2+))对重组酶L-4相对活性具有抑制作用。当有机溶剂浓度为30%时,重组酶L-4在二甲基亚砜(DMSO)和甲醇中保存97%和85%的相对活性,在丙酮、乙醇中保存45%以上的相对活性,在异丙醇中保存不到20%的相对活性,而在乙腈中相对活性基本完全丧失。用重组酶L-4预处理天然羽毛底物,可提高角蛋白酶K对底物的水解效率,促进率为4.32%。由此可见,脂类水解酶可降解羽毛表层脂质,可在促进角蛋白酶水解羽毛角蛋白中发挥作用。     

温度对星斑川鲽消化酶活性的影响

通过改变酶反应过程中的温度,分析了星斑川鲽蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性。结果表明:胃、肠和肝胰腺蛋白酶活性的最适温度为40,45,45℃;其蛋白酶活性大小顺序为胃肝胰腺肠。胃、肠和肝胰腺淀粉酶活性的最适温度为35,40,35℃;其淀粉酶活性大小顺序为肠肝胰腺胃。胃、肠和肝胰腺脂肪酶活性的最适温度为35,30,30℃;其脂肪酶活性大小顺序为肝胰腺肠胃。     

兔腰大肌和鸡胸大肌三聚磷酸酶特性的比较研究

分离纯化兔腰大肌和鸡胸大肌中的三聚磷酸盐酶(TPPase),比较不同物种TTPase的酶学特性和作用条件。试验结果,显示兔腰大肌和鸡胸大肌的TPPase的最适温度分别为35℃和30℃;最适pH分别是6和5。Mg2+对兔腰大肌和鸡胸大肌的TPPase都有激活作用,在0~20 mmol/L范围内,鸡胸大肌TPPase活性随Mg2+浓度增加而缓慢上升,3 mmol/L的Mg2+对兔腰大肌TPPase激活作用最明显。Ca2+对兔腰大肌TPPase有激活作用,而对鸡胸大肌TPPase有抑制作用。高浓度的EDTA-Na4和KIO3对两种肉TPPase都有明显的抑制效果。EDTA-Na2对兔腰大肌TPPase的活性没有显著影响,但在高于0.5 mmol/L时,对鸡胸大肌TPPase的活性抑制效果明显。     

微囊化沙门菌SP4噬菌体的制备及其缓释特性分析

通过采用阳离子醚化淀粉/海藻酸钠/黄原胶/纳米TiO₂/壳寡糖为原料制备微囊化SP4噬菌体,为控制沙门菌感染提供生物制剂。选用沙门菌SP4噬菌体,采用液滴法来制备微囊化SP4噬菌体,并对其效价、阳离子醚化淀粉浓度、海藻酸钠浓度、黄原胶浓度、壳寡糖浓度、pH稳定性、热稳定性、模拟胃液稳定性、模拟肠液释放行为以及保存稳定性进行分析。结果显示,当阳离子醚化淀粉浓度为2.4%、海藻酸钠浓度为2%、黄原胶浓度为1%、壳寡糖浓度为0.6%时,微囊化SP4噬菌体微球外形规则,包封率为97.5%,在pH5.0~8.0、温度10~30℃、模拟胃液pH2.0、0~30 min和pH3.0、0~150 min噬菌体保持较高的生物学活性,模拟肠液中4 h,噬菌体完全释放,4℃环境下保存6周噬菌体效价无明显降低。综上表明,微囊化沙门菌SP4噬菌体显著提高了噬菌体的稳定性和缓释性能,其耐酸特性利于抵御胃酸的分解,具有应用于生物防治的潜力,为进一步采用多因素试验制备微囊化沙门菌SP4噬菌体奠定了基础。