鸡肝细胞中L-BABP基因表达对脂类代谢基因及甘油三酯和总胆固醇的影响

本研究以鸡原代肝细胞为试验材料,探讨鸡L-BABP基因对脂类代谢相关基因及生化指标(总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密脂蛋白)的影响。利用RNAi和过表达技术下调和上调该基因的表达,分别在干扰和过表达24、36、48、60和72h时检测鸡肝细胞中脂类代谢相关基因的表达量变化及细胞培养基中脂类代谢相关生化指标的变化。结果显示,鸡L-BABP基因表达量的变化显著或极显著影响APOB、APOAΙ和PERILIPIN基因表达,且显著地改变细胞培养基中的甘油三酯和总胆固醇的含量。基于以上结果,本研究推测鸡肝细胞中LBABP基因可能参与禽类脂肪沉积、总胆固醇代谢和脂解过程。     

基于液质联用技术的卵巢静止奶牛血浆代谢轮廓分析

旨在应用代谢组学技术筛选产后卵巢静止奶牛血浆中差异代谢物,探究差异代谢物与奶牛卵巢静止的关系。试验选取了产后45～60 d卵巢静止奶牛和正常发情奶牛各15头,应用LC/MS技术检测两组奶牛血浆样品,运用多元统计分析与单变量分析,结合生物信息学分析,筛选出血浆差异代谢物,揭示不同代谢通路中的差异代谢物与奶牛卵巢静止的关系。结果显示:LC/MS分析共筛选出14种血浆差异代谢物。与发情组奶牛相比,卵巢静止组奶牛有11种差异代谢物明显升高:分别是D-塔格糖、L-亮氨酰-L-脯氨酸、L-鹅肌肽、脯氨酸-缬氨酸、赖氨酸-亮氨酸、N-(3-苯基丙酰基)甘氨酸、7-烯胆(甾)烷醇、γ-生育酚、β-隐黄素、视黄醛和鞘磷脂;3种差异代谢物降低:分别是胞嘧啶、1-棕榈酰溶血磷脂酰胆碱和1-硬脂酰-SN-甘油-3-磷酰胆碱。代谢通路分析代谢组学所获得的奶牛卵巢静止血浆差异代谢物,提示奶牛产后糖代谢、脂类代谢、氨基酸代谢和谷胱甘肽代谢等的异常会阻碍卵泡发育,从而导致奶牛产后发生卵巢静止。本试验获得了卵巢静止奶牛血浆差异代谢物,探究了奶牛产后卵巢静止发生中差异代谢物在糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢以及其他代谢的变化,为今后深入研究奶牛卵巢静止的发病机理及防治新策略提供了方向。     

饲粮中添加沙棘果渣对蛋鸡生产性能和脂类代谢的影响

为了研究沙棘果渣对蛋鸡生产性能及脂类代谢的影响,试验采用随机分组设计,将180只280日龄海兰褐蛋鸡随机分为4组,每组3个重复,每个重复15只鸡,对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,试验1,2,3组分别在基础日粮中添加0.5%、1%、2%沙棘果渣,进行为期42 d的饲养试验。结果表明:添加沙棘果渣对蛋鸡产蛋率和饲料转化率均有一定改善作用,随着添加量的增加,蛋重、产蛋率有逐渐升高的趋势,日粮中添加沙棘果渣粉显著影响了蛋鸡血液中总胆固醇和三酰甘油含量(P0.05),随着沙棘果渣粉添加水平的升高,总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇含量有下降的趋势,而高密度脂蛋白胆固醇含量有升高的趋势。说明日粮中添加沙棘果渣能够提高蛋鸡的生产性能,并能有效调节脂类代谢。     

基于气相色谱-质谱技术的鸡胸肉代谢组学研究

为鉴定不同鸡种上市日龄胸肌中小分子代谢物与肌肉风味形成的相关性,研究采用气相色谱-质谱联用技术对上市日龄分别为120 d和42 d的北京油鸡和科宝肉鸡(Cobb500)的胸肌进行代谢组学研究。结果表明,北京油鸡和科宝肉鸡胸肌差异代谢物共46种,差异代谢物种类主要包括氨基酸类(19种)、脂肪酸类(10种)、碳水化合物类(7种)、有机酸类(5种)、核苷酸类(2种)等物质外,还包括尿素、胆固醇和多巴胺等代谢物。其中北京油鸡上调表达的差异代谢物14种,下调表达的差异代谢物32种。代谢通路分析显示氨基酸代谢、脂肪酸代谢、半乳糖代谢、生物碱的生物合成和磷酸转移酶系统等代谢通路在不同鸡种胸肌上市日龄风味形成中起主要调节作用。研究结果可为进一步阐明不同鸡种中胸肉风味物质的调控机制提供科学依据。     

鸭LXRα基因过表达对原代肝细胞及PC3细胞脂质代谢的效应研究

旨在探究鸭LXRα基因对脂肪代谢的表达调控机制,本试验以pEGFP-N3为载体,构建携带HIS标签的LXRα基因真核过表达载体,并将过表达载体分别转染鸭原代肝细胞及PC3细胞,使用鸭HIS标签试剂盒测定LXRα基因在肝细胞及PC3细胞中的过表达量,分析该基因分别在两种细胞中过表达与各脂质指标含量的相关性,进而探究其对鸭肝细胞及PC3细胞脂质代谢的调控作用。试验结果显示,LXRα基因在两种细胞中过表达与三酰甘油含量(triglyceride,TG)及高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)含量均呈极显著正相关关系(P<0.01),与总胆固醇(total cholesterol,TC)含量及低密度脂蛋白含量(low density lipoprotein,LDL)则均呈极显著负相关关系(P<0.01)。本研究揭示了LXRα基因过表达对TG和HDL的合成代谢有重要的正向调控作用,对TC和LDL具有反向调控作用,且在这两种类型的细胞中调控机制相似。这一研究结果将对今后深入研究LXRα基因在脂质代谢网络通路中的作用及解决鸭体脂肪过度沉积等问题奠定理论基础。     

鸡原代肝细胞的分离及培养

选用18日龄肉仔鸡作为试验动物,应用半原位酶消化法分离鸡肝细胞。在获取鸡肝细胞过程中,先用灌流液在原位对肝脏进行灌流,然后取下肝脏用Ⅳ型胶原酶对肝脏进行灌流消化,200目筛网、300 g离心5 min可获得大量的、纯度均一、活力较高的细胞。细胞经形态学动态观察、电镜观察内部结构及对脂类相关基因表达的检测,证明肝细胞具有功能活性。本研究建立了鸡肝细胞原代培养方法,为研究鸡肝细胞脂类代谢的生物学过程提供技术平台。     

基于GC/TOF-MS技术对流感感染小鼠粪便代谢组学的研究

为了探讨小鼠感染流感病毒后粪便代谢物的变化情况,寻找潜在生物标志物及相关的代谢通路,本研究运用气相色谱-飞行时间质谱联用技术(GC/TOF-MS)检测对照组和病毒组小鼠的粪便。结果显示:在正交偏最小二乘法分析(OPLS)模型中,对照组与病毒组的得分图呈现明显差异,病毒组中一些代谢物发生了显著性的改变。α-酮戊二酸、甲硫氨酸、果糖-6-磷酸、苯丙氨酸、草酸、乳糖、棕榈酸、正缬氨酸、腺嘌呤、胆固醇、葡萄糖-6-磷酸、油酸、甘油、十五烷酸、β-丙氨酸等代谢物显著降低,而L-苹果酸、天冬氨酸、乳酸等代谢物显著上升。结论:病毒组与对照组之间存在脂类代谢、氨基酸代谢及糖代谢的差异,代谢组学的研究可以为流感病毒引起的肠道损伤机制提供新的依据。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS代谢组学研究土霉素和穿心莲内酯对鸡代谢的影响

本研究旨在建立基于色谱-质谱联用技术的代谢物分析技术平台，利用等剂量中兽药穿心莲内酯和广谱抗生素土霉素对3周龄仔鸡进行干预，分析药物干预对鸡的排泄物代谢变化，通过数据统计分析寻找差异性代谢物，探讨穿心莲内酯和土霉素对鸡肠道菌群代谢的干预机制。采用UPLC-Q-TOF-MS/MS检测各组黄羽鸡排泄物样本，通过MetaboAnalyst平台进行代谢通路的富集与分析，运用QI软件筛选出差异代谢物。结果表明，相较于空白组，土霉素与穿心莲内酯组分别存在12个和10个差异化合物，土霉素组涉及15条代谢通路，其中，2条最相关代谢通路分别为亚油酸代谢和甘油磷脂代谢的通路；穿心莲内酯组涉及17条代谢通路，其中，5条最相关代谢通路分别为甘油磷脂的代谢、鞘磷脂代谢、半胱氨酸和蛋氨酸的代谢、不饱和脂肪酸的生物合成以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢通路。综上，土霉素和穿心莲内酯影响鸡代谢的作用机制十分相似，均可通过改变磷脂代谢、脂肪酸代谢、氨基酸代谢等途径对鸡正常代谢功能产生影响，尤其是土霉素组与对照组的分布规律有明显差异。     

鸡营养应激中SIRT1基因对肝脏脂类代谢的影响

本研究旨在探讨SIRT1基因在鸡肝脏脂类代谢中的功能。采用荧光定量PCR和免疫印迹检测34日龄广西三黄鸡在禁食24 h之后肝内SIRT1及其他糖脂代谢相关基因的表达水平,并测定血糖、血脂变化;检测SIRT1低表达的LMH-gSmiR30细胞系在葡萄糖和棕榈酸处理后细胞内糖脂代谢相关基因的表达水平及胞内脂滴的形成。结果表明:禁食24 h后,血液中甘油三酯浓度显著降低,肝内SIRT1基因的mRNA和蛋白水平显著增加,PGC-Lα、PPARα和ATGL基因表达也显著增加,但FASN基因表达则显著下降;禁食24 h后恢复2h采食,血糖和血液中甘油三酯浓度迅速回升,而肝内SIRT1、PGC-Lα、PPARα和ATGL基因的mRNA水平迅速降至正常喂饲组水平,FASN基因的mRNA水平则回升至对照组的25%;ATGL在SIRT1基因低表达的LMH-gSmiR30细胞中的mRNA表达水平略低于对照组细胞LMH-pmirG中的表达,而高浓度的葡萄糖和棕榈酸对LMH-gSmiR30细胞中ATGL的mRNA表达抑制更为明显,而且细胞内脂滴显著增多。以上结果说明,鸡肝脏中SIRT1基因的表达受营养状态的调控,同时SIRT1基因影响着肝细胞内脂类代谢过程。     

家禽脂类代谢调控机理的研究进展

利用营养和分子生物学手段来调控家禽脂类代谢 ,有赖于对其机理的深入了解。本文详细讨论了脂蛋白转运体系在家禽脂类代谢中的作用。通过营养因素和激素水平调控脂蛋白的合成、组装、转运和降解可影响机体脂肪沉积及蛋黄的形成。低密度脂蛋白LDL -受体基因家族在家禽脂蛋白代谢的调控过程中发挥着至关重要的作用     

基于GC-MS代谢组学技术对内脂素调控雏鸡采食机制的研究

旨在探索内脂素(Visfatin)调控家禽采食的分子机制,为完善家禽的食欲调控和能量平衡理论奠定基础。选取1日龄罗曼褐健康雏鸡20只,随机分为4个处理(C、L、M、H组)。常规饲粮饲养至10日龄进行下丘脑导管埋置,通过脑室注射技术对雏鸡下丘脑部位注射不同浓度的重组人内脂素(0、40、200、400ng)。脑室注射Visfatin60min后,记录各处理组累积采食量,并采集下丘脑组织,通过GC-MS系统进行代谢组学检测,建立PLS-DA模型,并将差异代谢物输入KEGG数据库进行代谢通路的构建。结果表明,脑室注射Visfatin 60min后,M组和H组的雏鸡累积采食量与C组相比均显著升高(P0.05)。在对雏鸡下丘脑进行GC-MS代谢组学分析后,处理组与对照组间共鉴定获得73个差异性代谢物,富集到51条通路上。脑室注射Visfatin后下丘脑产生的差异性代谢物与氨基酸、糖和脂代谢有着密切的联系,其中脂肪酸合成通路被显著富集。结果提示,中枢营养物质下降导致稳态发生改变可能是Visfatin发挥促食作用的主要机制。     

共轭亚油酸影响边鸡胸肌脂类代谢的相关差异基因的筛选

旨在通过转录组测序技术筛选出共轭亚油酸(conjugated linoleic acids,CLA)影响边鸡胸肌脂类代谢的相关基因,为日粮中CLA调控边鸡脂类代谢的作用机制提供理论依据。本试验选取90日龄健康边鸡180只,随机分为5组,每组3个重复,每组日粮中分别添加不同比例的CLA 0%(对照组)、0.5%、1.0%、1.5%和2.0%,预饲期1周,正饲期6周。饲养试验结束后采集胸肌组织进行转录组测序,使用DESeq2软件对测序数据进行差异表达分析,对差异表达基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,筛选出与胸肌脂类代谢相关的差异表达基因,利用qPCR对差异表达基因进行验证。通过转录组测序数据分析,共筛选出1 229个差异表达基因,其中594个基因上调,635个基因下调。随机选取9个差异表达基因进行qPCR验证,其相对表达量变化趋势与测序结果一致。GO功能分析发现,差异表达基因主要集中在生物学过程中的细胞过程、单一生物过程、生物调节和代谢过程。KEGG通路富集分析发现,各试验组中差异表达基因显著富集在不同的信号通路中,主要富集在ECM-受体相互作用、黏着斑、吞噬体、细胞凋亡、肌动蛋白细胞骨架调节和细胞因子-细胞因子受体相互作用等通路中。通过GO和KEGG功能注释分析,共筛选出MCAT、APOA1、PTGDS、ALDH3A2、PLTP、FABP3、FOXO1、UCP3和FABP4等18个主要的参与脂类代谢相关的差异表达基因,可能在调控边鸡胸肌脂类代谢中发挥重要的作用。本研究通过转录组测序筛选出CLA影响边鸡胸肌脂类代谢过程中的主要调控基因,发现了日粮中CLA影响差异表达基因作用的主要生物学过程和信号通路,为今后研究CLA影响边鸡胸肌脂类代谢的分子作用机制奠定了基础。     

武定鸡肝脏miR-143基因及其脂类代谢靶基因表达规律研究

为了探究miR-143基因与脂类代谢靶基因的关系及其在脂类代谢过程中的调控作用以及对武定鸡肝脏组织脂类代谢的调控机制,试验通过靶基因预测软件microRNA.org(http://www.micror-na.org)预测miR-143基因与脂类代谢靶基因的结合位点;选取胚胎期第15天和出生后第1,7,14,28,56天...     

基于LC-MS代谢组学的植物乳杆菌发酵黄芪的代谢产物分析

试验旨在利用色谱-质谱联用（liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS）代谢组学技术分析植物乳杆菌发酵黄芪的代谢产物,并探索其互作发酵机制。分别采取植物乳杆菌发酵黄芪（FT组）和未发酵黄芪固态粉末（CT组）,经样本前处理、LC-MS分析、生物学信息分析等探寻差异代谢物并分析代谢通路。结果显示,总离子流图峰图重现性良好,发酵黄芪主要代谢物共鉴定出183种代谢成分,正离子和负离子模式样品间关系PCA图均能良好区分。火山图分析表明,FT和CT组间的代谢物变化具有差异性,正离子模式上调的1 416个代谢物富集到83个代谢途径;下调的935个代谢物富集到83个代谢途径;负离子模式上调的1 040个代谢物富集到52个代谢途径,下调的809个代谢物富集到45个代谢途径。发酵黄芪差异代谢产物酸类、脂类、酮类等氨基酸显著增加,烯类等氨基酸显著下调,其中上调代谢物15个,下调代谢物2个,关键代谢产物主要为α-硫酸二乙酯、2-甲基柠檬酸、3-异丙烯基-6-氧代庚酸等,涉及到丙酮酸代谢、丙酸代谢、半乳糖代谢等途径。本研究结果为发酵黄芪的代谢产物、发酵互作机制和临床应用提供理论依据。     

哺乳动物Acot2基因的研究进展

酰基辅酶A硫酯酶2(Acot2)是酰基辅酶A硫酯酶(Acots)家族成员之一,其将酰基辅酶A(CoA)水解成游离脂肪酸和CoA,具有维持细胞水平的游离脂肪酸和酰基CoA(游离脂肪酸的活化形式)的潜力,在脂质代谢中发挥重要作用。本文对Acot2基因的定位、结构特征、生理功能及其调控进行综述,以期对Acot2基因的进一步探究提供参考。     

AICAR和二甲双胍对产蛋鸡肝细胞AMPK活性及脂质代谢的影响

以产蛋鸡肝细胞为材料，研究添加腺苷一磷酸激活的蛋白激酶（AMPK）激活剂AICAR和治疗二型糖尿病药物——二甲双胍对产蛋鸡肝细胞AMPK、β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGR）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）和细胞脂质代谢的影响。试验分4个处理：基础培养液组（对照组）、基础培养液组中分别加入0．5mmol／L AICAR、0．5mmol／L二甲双胍、1mmol／L二甲双胍。结果表明，肝细胞培养100min时，AICAR和二甲双胍均可激活AMPK（P〈0．05），且二甲双胍激活AMPK具有一定的浓度依赖性；AICAR和二甲双胍均可不同程度抑制脂肪酸和胆固醇合成的关键酶ACC和HMGR的活性，AMPK活性与HMGR、ACC活性呈一定的负相关；添加AICAR和二甲双胍抑制产蛋鸡肝细胞甘油三酯和胆固醇合成，AMPK活性与肝细胞甘油三酯和总胆固醇含量也呈一定的负相关。因此，可通过调控产蛋鸡肝脏AMPK活性变化从而调节产蛋鸡脂肪和胆固醇的合成。     

混合油脂对清远麻鸡胸肌脂肪酸组成的影响及其代谢组机制研究

本试验旨在研究单一和混合油脂日粮对肉鸡生长性能和胸肌脂肪酸组成的影响,并利用代谢组学技术探究日粮油脂干预后胸肌脂肪酸组成发生变化的代谢机制,为调控肉鸡脂肪酸组成的研究提供新思路。选取1日龄慢速型清远麻母鸡480只,随机分为2组(每组6个重复,每个重复40只),对照组(CON)饲喂大豆油日粮,试验组(BOF)饲喂等量的混合油脂(大豆油∶猪油∶鱼油∶椰子油=1.0∶1.0∶0.5∶0.5)日粮,试验期127 d。结果表明,与对照组相比,混合油脂日粮对肉鸡平均日增重没有显著影响(P0.05),但显著降低了肉鸡的平均日采食量和料重比(P0.05);显著增加了肉鸡胸肌中月桂酸(C12∶0)、肉豆蔻酸(C14∶0)、油酸(C18∶1n-9)、二十碳五烯酸(EPA,C20∶5n-3)和二十二碳六烯酸(DHA,C22∶6n-3)的比例,显著降低了亚油酸(C18∶2n-6)比例(P0.05)。利用液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术,在试验鸡胸肌中共筛选到110种差异代谢物(变量权重值(VIP)1,P0.05),其中63种差异物质被注释,主要是磷脂代谢物,包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰乙醇胺(PE)等。此外,与对照组相比,混合油脂组显著增加了胸肌中谷胱甘肽和肌肽含量(P0.05)。代谢通路富集分析表明,α-亚麻酸代谢、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢和甘油磷酸代谢等脂质代谢通路发生显著改变(P0.05)。综上,混合油脂日粮相较于大豆油日粮提高了肉鸡的饲料转化效率,促进了胸肌组织中DHA和EPA的沉积;日粮油脂干预后肉鸡胸肌中磷脂代谢物、氧化稳定性代谢物和脂类代谢途径发生显著改变。本研究鉴定出的差异代谢物和差异代谢通路可为调控肉鸡脂肪酸组成的研究提供参考。     

鹅肝细胞的分离培养及其三酰甘油合成功能检测

本文旨在探讨鹅肝细胞的分离与原代培养方法,并对分离的肝细胞三酰甘油(TG)合成功能进行检测.采用改进的Seglen二步法分离纯化来自10日龄仔鹅肝脏的肝细胞,并进行原代培养.在倒置显微镜下观察肝细胞形态变化,MTT比色法测定细胞活性,用脂肪酸培养肝细胞并检测其形态、活性和细胞内TG含量的变化.结果显示,分离出的肝细胞形态完整、贴壁良好、活性高,细胞活性曲线与理论“S”型细胞生长曲线基本符合.另外,脂肪酸能增加肝细胞体积、活性和TG含量.结果表明,本研究成功分离了鹅肝细胞并进行了原代培养,肝细胞生酯功能正常.     

奶牛酮病血浆差异代谢物及其代谢途径分析

基于核磁共振技术的代谢组学分析奶牛酮病代谢谱,探索奶牛发生酮病时机体代谢的全景式变化,进一步了解奶牛酮病时的代谢物变化规律。收集临床酮病奶牛、亚临床酮病奶牛、健康对照组奶牛共81头,采血后分离血浆并进行预处理,运用NMR技术结合多元统计分析,鉴定差异代谢物,并进行分析讨论。结果表明:获得29个差异代谢物,其中碳水化合物3个、脂类6个、氨基酸14个、其他物质6个。通过查找数据库,发现这些代谢物主要与氨基酸代谢、脂肪代谢和糖类代谢等能量代谢途径相关。代谢组学技术在一定程度上可以揭示奶牛酮病的发生和发展变化,而这些差异代谢物经过进一步验证可能是诊断奶牛酮病的潜在标记物和指标。     

亚油酸、亚麻酸及二者不同比例对鸡原代肝细胞增殖的影响

本研究使用原位二步灌流法分离鸡原代肝细胞,并测定亚油酸、亚麻酸及不同亚油酸/亚麻酸比例(30∶1,10∶1和2.5∶1)对肝细胞增殖的影响。结果表明:使用0.05%的胶原酶Ⅱ进行原位二步灌流分离鸡原代肝细胞不需要大量的胶原酶,细胞分离效果好,细胞活率高;100μm ol/L的亚油酸处理鸡原代肝实质细胞72 h显著增加细胞增殖,亚油酸/亚麻酸比值为10时细胞增殖能力最强。此方法的建立为研究脂肪酸种类或比例对鸡脂肪代谢和调控机理提供了依据。