结合皮内变态反应与γ干扰素ELISA的牛结核病检疫

巴州辖区内某奶牛场为根除牛结核病对该奶牛场的威胁,技术人员根据该奶牛场情况制定了检疫计划,选用皮内变态反应与γ干扰素ELISA检测相结合的方法,从而达到检疫的目的。初筛检疫使用牛型结核病PPD(纯化蛋白衍生物)皮内变态反应,出现阳性或可疑牛之后,再对其接触较为密切的同群牛进行γ干扰素ELISA(酶联免疫吸附试验),目的在于检出与患病动物接触的牛群是否处在牛结核感染的潜伏期。检测结果:皮内变态反应全检150头奶牛后,出现1例阳性牛和1例可疑牛,之后将阳性、可疑与同属一个圈舍的其他13头牛进行γ干扰素ELISA检测,出现1例牛型结核分枝杆菌阳性、14例阴性。表明牛结核PPD皮内变态反应结合γ干扰素ELISA可以有效提高牛结核病检疫的准确性,节省检疫时间,减少因单纯使用牛结核PPD皮内变态反应出现假阳性而造成的不必要扑杀。     

牛结核病两种活体诊断方法检测结合病原学诊断的研究

本文报道应用两种活体诊断方法检测牛结核病的试验结果。2010～2011年度,应用PPD皮内变态反应方法分3批次对5156头奶牛和奶水牛实施监测,监测阳性数57头,阳性率1.11%。采集该57头牛抗凝全血,应用γ-干扰素酶联免疫吸附试验进行检测,检出阳性样品3份,阳性率5.26%。对14头第一批PPD皮内变态反应阳性牛进行病理检验和进行细菌分离培养和PCR检测,结果3份样品分离培养呈阳性,其中1份PCR鉴定为结核分枝杆菌,2份为非分枝杆菌。PCR方法检测的14份组织样品中,2份为结核分枝杆菌阳性,1份为牛结核分枝杆菌阳性。结合病理剖检和病原PCR诊断,分析比较PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素酶联免疫吸附试验的敏感性和特异性,由于PPD纯度、非特异性反应、结果判定的主观性等因素,导致PPD皮内变态反应监测检出假阳性率较高。     

奶牛结核病不同检疫方法比较

采用牛结核菌素皮内变态反应试验(TST)、欧盟比较变态反应试验(SICTT)和牛结核γ干扰素酶联免疫吸附试验(IFN-γ-ELISA)对河北省石家庄市栾城县某奶牛场300头奶牛进行结核病平行检测,比较不同检疫方法对奶牛结核病诊断结果的影响,并分析对比检测结果。经综合判定牛型结核阳性牛208头(其中20头双阳),阴性92头(其中禽型19头)。TST和SICTT相比,阳性符合率为94.89%;TST与IFN-γ-ELISA相比,阳性符合率为31.16%;SICTT与IFN-γ-ELISA对比,阳性符合率为51%。综合判定,3种方法的总符合率为33.67%,符合率较低,表明各种检测方法各有优缺点,在实际应用中应根据需要合理选择。     

不同监测方法在奶牛结核病检疫中的应用

为了解牛型提纯结核菌素PPD皮内变态反应试验和牛结核γ-干扰素ELISA试验的相关性,对规模牛场先进行牛型PPD皮内变态反应试验,采集检疫阳性牛和部分阴性牛抗凝血进行牛结核γ-干扰素ELISA试验,通过试验结果找出两者之间的相关性,研究牛结核γ-干扰素ELISA试验在牛结核病检疫中的可行性。     

两种牛结核病检测方法对广西奶牛的检测

牛结核病现行防治政策是对牛尤其是奶牛进行检疫,淘汰结核病牛[1]。现在牛结核病应用较多的检疫方法有变态反应[2]、酶联免疫试验     

检疫牛结核病的欧共体皮内注射比较试验方法

结核病是由结核分枝杆菌引起畜和禽类的一种慢性传染病。目前，世界动物卫生组织对牛结核病检疫的指定方法是皮内变态反应。尽管世界上不少国家采用皮内变态反应的检疫方法消灭了牛结核病，但是却付出了极其高昂的经济代价。一方面皮内变态反应方法的敏感性高，非特异性反应较多；另一方面阳性牛检出后淘汰要负责赔偿损失，这种激励政策加速了牛结核病的控制和净化。最近，欧共体也采取了对南欧一些国家贸易中检出的结核阳性牛予以50％的经济赔偿，从而加速了控制结核病的速度。     

两种奶牛结核病检测方法的比较研究

牛结核病是由牛分枝杆菌引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病,严重威胁着人类的健康。因此,对该病的定期检疫对公共卫生和食品安全具有重大意义。本研究采用提纯结核菌素(PPD)皮内变态反应试验和γ-干扰素(IFN-γ)ELISA试验,对扬州市的892头奶牛进行结核病检测。结果表明,PPD皮内变态反应检出的31头牛型结核阳性牛和可疑牛中,经IFN-γELISA试验检测仅检出9头禽型结核可疑牛。PPD皮内变态反应试验特异性较差,出现了较高的假阳性率,其原因可能与禽结核分枝杆菌感染或其他非特异性因素的干扰有关。     

内蒙古羊副结核病检测方法的比较研究

对选自内蒙古4个旗(县)的213只羊采用通过琼脂扩散试验(AGID)、皮内变态反应(DTH)、补体结合反应(CF)和酶联免疫吸附试验(ELISA)4种检测方法进行3次羊副结核病检测,以比较4种检测方法的检出率。结果表明,琼脂扩散试验、皮内变态反应、补体结合反应和酶联免疫吸附试验的检出率分别为3.8%、4.7%、5.2%和11.3%。其中以酶联免疫吸附试验的检出率最高,并且该方法简便、灵敏,具有实际应用和推广价值,对内蒙古地区羊副结核病检测方法的选择有一定的指导意义。     

对奶牛结核病平行检测的不同方法

[目的]综合分析奶牛的健康状况,评价不同检测方法的优缺点,提出实际应用建议。[方法]同时采用单纯牛结核菌素（PPD）皮内变态反应试验（TST,使用国产PPD简称国产TST、使用进口PPD简称进口TST）、欧盟比较变态反应试验（SICTT）和牛结核γ-干扰素酶联免疫吸附试验（IFN-γ-ELISA）,对河北省唐山市某奶牛场存栏的115头牛进行结核病平行检测。[结果]经综合判定牛型结核阳性15头（其中5头为牛型、禽型双阳性）、阴性100头（其中1头为禽型阳性）,牛型结核阳性率13.04%、禽型结核阳性率5.22%、二者混合感染率为4.35%。试验表明,对于伴有非结核分枝杆菌感染的牛群,仅靠一种活体检测方法难以做出牛结核病准确诊断。[结论]因此,可采用进口TST初筛,阳性和可疑牛用IFN-γ-ELISA复检以排除部分假阳性,对于早期感染牛场可直接采用IFN-γ-ELISA方法检测。     

深圳某养殖场奶牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测与皮内变态反应比对试验

正牛结核病是一种人畜共患传染病,被我国列为二类动物疫病,给牛业生产特别是奶牛养殖业造成巨大危害,并对人类的健康也造成了严重的威胁。为加强奶牛养殖场结核病的高效监测,我实验室人员严格按照农业部发布的动物疫病监测计划,每年定期对辖区内的奶牛进行结核病检疫监控。近年来,随着全球科技的高速发展,牛结核病的检测方法也逐步完善,现行的检测方法包括结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素检测试验。其中皮内变态反应是我国     

牛结核病诊断技术研究进展

牛结核病(Bovine Tuberculosis, TB)是由牛结核分枝杆菌等引起的一种慢性消耗性人兽共患传染病,该病不仅会对畜牧业造成严重经济损失,还会对人类身体健康造成威胁,我国将其列为二类动物疫病,该传染病是国内外迫切需要解决的严重公共卫生安全问题之一。目前,牛结核病在世界各地均有流行,其通用的诊断方法是采用牛型结核菌素PPD皮内变态反应试验,根据测量的皮厚差进行结果判定,在基层应用较为广泛,也是国家检测牛结核病的行业标准,但该方法的缺点是试验操作时间长达72 h,要2次抓牛测量其皮厚度,对试验牛的应激反应和生产干扰较大,且检测人员的操作易对检测结果造成影响。因此,在实际生产当中应用不同诊断方法进行牛结核检测对克服试验误差具有重要意义。随着牛结核新型诊断方法和技术的不断发展,IFN-γ释放试验(IGRA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、序列扩增技术(NASBA)、全基因组测序法(WGS)以及聚合酶链式反应(PCR)法等被广泛应用于兽医临床结核病诊断,使该病检测的敏感性和特异性均得到很大提高。但现实中需要从价格、实用性等生产角度出发,选择出最佳诊断方法。在实际生产应用中,由于结核病存在细胞免疫和体液免疫分离现象,无论是牛型结核菌素PPP皮内变态反应试验、γ-干扰素体外释放试验还是聚合酶链式反应(PCR)法都难以准确无误地诊断牛结核病,因此确诊牛结核病比较理想的方法是2种或2种以上方法的联合使用。     

鹿结核病的点眼法和酶联免疫吸附检疫法

鹿结核病在国内、外的养鹿场中广泛流行，不仅影响养鹿业的发展，而且对人和其他动物的健康也构成一定程度的威胁。笔者在专家的指导下，采用牛结核菌素（OT）点眼变态反应法和酶联免疫吸附（ELISA）试验对梅花鹿进行结核病检疫，取得了满意的效果。     

欧盟皮内变态反应比较试验法结合ELISA检测牛结核病的研究

现在应用较多的牛结核病检疫方法有变态反应、ELISA等方法。检疫牛结核病目前OIE唯一指定方法是皮内变态反应,该方法也是最古老的方法之一,经过多次改进,仍然为各国所用。该方法的不足是非特异性反应过高,且只能检测细胞免疫状态。牛结核     

天津市牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测与皮内变态反应比对试验

<正>皮内变态反应是我国标准规定的牛结核病检测方法,而γ-干扰素检检测试验是Ol E规定的国际贸易指定使用的检测方法,为了验证此方法在实际工作中的检测效果,我市分别对静海区、武清区皮内变态反应试验阳性牛和宝坻区待检牛进行了检测比对试验。1牛结核分枝杆菌皮内变态反应试验1.1试验材料(1)实验动物来自宝坻、静海、武清三个地区的239头牛。其中静海区的1个农场23头牛和武清区的2个农场     

新疆石河子地区牛结核病检测方法的比较研究

采用比较变态反应检测方法对石河子地区6家规模牛场牛型提纯结核菌素(PPD)皮内变态反应检出的475头阳性牛进行了检测,按照国家标准-动物结核病诊断技术(GB/T18645-2002)进行结果判定,结果表明:牛型结核阳性457头,符合率在93.18%～100%之间,平均96.21%。经反复试验对比分析采用牛型提纯结核菌素皮内变态反应进行结核病的检测,结果准确,既经济实用又便于操作,还可避免再采用比较变态反应要隔离阳性牛而导致牛结核病传染散播风险。项目组通过在四个牛场的对比分析,在未建立符合防疫条件的独立隔离圈舍的牛场检测阳性牛及可疑牛在隔离45d后再次检测时新增阳性牛数量增加;而采用牛型提纯结核菌素检测后对阳性牛采取扑杀、无害化处理、消毒等综合性措施后,间隔45d对全群再次检测时新增阳性牛数量明显减少。因此牛结核病检疫采用适宜基层实际的牛型提纯结核菌素皮内变态反应对及时检出阳性牛,并尽快进行扑杀、无害化处理、净化牛群、控制结核的传播扩散,实现公共卫生安全具有重要意义。     

欧盟比较试验法在奶牛场结核检疫中的应用研究

我们应用欧盟的牛PPD和禽PPD皮内变态反应比较试验法,对黑龙江省哈尔滨市一奶牛场的99头6月龄以上奶牛进行了检疫。现将具体做法报告如下:     

短期内进行牛型结核分支杆菌PPD皮内变态反应复检试验的结果变化观察

牛型结核分支杆菌PPD皮内变态反应试验,是当前国际国内普遍使用的牛结核病诊断方法.我国农业部《牛结核病防治技术规范》将牛型结核分支杆菌PPD皮内变态反应试验规定为牛结核病确诊方法之一.GB/T 18645-2002(《动物结核病诊断技术》)规定,用牛型结核分支杆菌PPD皮内变态反应试验检出的结核病可疑牛,应立即在对侧颈部用同一批号试剂再进行一次试验.在实际生产中,因为检出结核病阳性牛必须扑杀,为慎重,除可疑牛外,多数情况下阳性牛也同时进行了再次试验(复检)以再次确认.根据往年检测结果,我们发现这种短期内复检通常都可弱化首次试验结果.为研究这种变化发生的原因及评价其对检测结果判定的影响,2012年我们对新疆南疆阿克苏地区的4个奶牛场和北疆昌吉地区的1个奶牛场使用该方法进行结核病检测的情况进行了观察分析.     

应用Dot-ELISA检测结核病牛血清抗体效价

用牛型结核菌菌体蛋白(PP)及提纯牛结核菌素(PPD)作抗原,硝酸纤维素滤膜(NC 膜)作载体。以斑点-酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测了30份结核菌素变态反应阳性牛及30份非结核病牛血清中的抗体效价。结果证实,Dot-ELISA 与变态反应符合率很高(20/30),只有简便、快速、经济及适于现场推广应用等优点,可望在今后牛结核病检疫中取代变态反应和常规 ELISA.     

γ干扰素和变态反应试验诊断奶牛结核病的比较研究

同时应用欧盟比较皮内变态反应、传统皮内变态反应对200头奶牛进行试验,3天后,采集这200头牛的肝素抗凝全血,经全血培养、抗原刺激,用BOVIGAMTM干扰素(γ-IFN)试剂盒检测上清。结果200头奶牛中,比较皮内变态反应阳性牛、传统皮内变态反应阳性牛和γ-干扰素阳性牛分别为91头、98头和95头,γ-干扰素检测与传统变态反应、比较变态反应的符合率分别为92.86%和95.79%。     

三种变态反应判定标测牛结核病的比较

同时应用牛型PPD和禽型PPD皮内变态反应,对300头牛进行了检测;并分别采取OIE、中国和欧共体的判定标准进行判定.结果发现阳性数分别为48头、19头和7头;检出率分别为16%、6.3%和2.3%.从变态反应强度而言,牛结核变态反应的平均皮厚差为1.38mm,禽结核变态反应的平均皮厚差为1.46mm.可看出,由于判定标准不同,欧共体阳性检出率最小,其次是中国,而OIE最高.禽结核变态反应强度比牛结核变态反应强度略高.说明禽结核分枝杆菌对牛结核变态反应有很大的干扰.同时欧共体比较试验法能够排除禽结核分枝杆菌干扰.